国家自然科学基金(30960131)
- 作品数：9 被引量：43H指数：5
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- 线粒体连接蛋白43参与缺血后处理对兔急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用被引量：11
- 2010年
- 目的探讨线粒体连接蛋白43（connexin43，Cx43）和线粒体ATP敏感性钾通道（mitoKATP^＋）在缺血后处理保护兔心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法新西兰大白兔64只，建立心肌缺血再灌注模型，给予冠状动脉左前降支30min缺血，240min再灌注。随机分为4组，每组16只：假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组和5-羟葵酸加缺血后处理组。测定血浆磷酸肌酸激酶同工酶（CK—MB），肌钙蛋白I（cTnI）含量以及心肌梗死面积，采用电子显微镜观测心肌线粒体结构变化，Western blot检测线粒体Cx43蛋白表达。结果缺血后处理组心肌梗死面积为（19．1±3．9）％，明显低于缺血再灌注组（35．7±5．8）％，P〈0．01。再灌注4h末血浆CK—MB与cTnI活性，缺血后处理组明显低于缺血再灌注组和5-羟葵酸加缺血后处理组（P〈0．01）。与假手术组比较，其他各组线粒体均损伤明显（P均〈0．01）；缺血后处理组线粒体损伤程度轻于缺血再灌注组（P〈0．01）；缺血后处理组线粒体损伤程度明显轻于5-羟葵酸加缺血后处理组（P〈0．01）。缺血再灌注组和5．羟葵酸加缺血后处理组线粒体Cx43蛋白表达均显著低于假手术组（P均〈0．05）；缺血后处理组心肌线粒体Cx43蛋白表达明显高于缺血再灌注组（P〈0．05）；缺血后处理组心肌线粒体Cx43蛋白表达明显高于5-羟葵酸加缺血后处理组（P〈0．05）。结论线粒体Cx43可能参与了缺血后处理的心肌保护作用，其机制可能与mitoKATP^＋有关。
- 何燕曾志羽钟国强李金轶李伟科李薇
- 关键词：心肌再灌注损伤线粒体连接蛋白43缺血后处理
- 心肌Cx43在心脏缺血再灌注损伤及其保护作用的研究进展被引量：6
- 2011年
- 缝隙连接蛋白43（Cx43）是哺乳动物心脏最主要的连接蛋白，它在心脏发育及心脏疾病中具有重要意义。缺血预处理（ischemic preconditioning．IPC）和缺血后处理（ischemic postconditioning．IPOC）是最强的两种缺血心肌内源性保护方法。研究表明．Cx43对IPC及IPOC心脏保护具有重要调控作用。本文就Cx43在心脏缺血／再灌注（I／R）损伤及其保护作用的研究进展予以综述。
- 涂荣会陈立钟国强
- 关键词：心脏缺血再灌注损伤CX43缺血心肌缝隙连接蛋白缺血预处理缺血后处理
- 血清B型利钠肽水平在急性心肌梗死患者心力衰竭诊断中的价值被引量：7
- 2012年
- 急性心肌梗死（AMI）是指在冠状动脉粥样硬化的基础上发生的持久而严重的心肌缺血，导致部分心肌急性坏死。由于心脏收缩和舒张功能受损，因此AMI后可并发心力衰竭及心源性休克。目前B型利钠肽（BNP）在心血管疾病的诊断、治疗方面及评估患者预后的价值日益得到重视，当患者发生心力衰竭时，由于神经内分泌系统的激活及心室压力负荷的增加，引起血清BNP水平升高。本文旨在探讨BNP水平对AMI心力衰竭患者的诊断价值。
- 黄梦照钟国强
- 关键词：急性心肌梗死B型利钠肽心力衰竭
- 缺氧后处理中线粒体氧化应激平衡对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：5
- 2012年
- 目的观察缺氧后处理（PC）对缺氧／复氧心肌细胞凋亡的影响及氧自由基清除剂[超氧化物歧化酶（SOD）及过氧化氢酶（CAT）]后处理对PC抗凋亡效应的影响，探讨PC中线粒体氧化应激平衡对细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白调控心肌细胞凋亡的作用。方法大鼠乳鼠心肌细胞缺氧3h后，分别进行：（1）复氧6h（缺氧／复氧组，H／R组），（2）复氧5rain、缺氧5min，反复3次，再复氧6h（PC组），（3）应用SOD100U／mL后立即进行（2）的操作（SOD＋PC组），（4）应用CAT120U／mL后立即进行（2）的操作（CAT＋PC组），（5）应用SOD联合CAT后立即进行（2）的操作（SOD＋CAT＋PC组），对照组心肌细胞在复氧条件下培养9h。应用荧光探针测定线粒体活性氧含量，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率，Westernblot检测细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果H／R组线粒体活性氧含量（61．53±4．73）显著高于对照组（13．25±1．07）和PC组（32．72±2．86），分别是他们的4．6和1．9倍（P均〈0．01），SOD＋PC组（23．05±1．13）、CAT＋PC组（23．82±1．88）和SOD＋CAT＋Pc组（16．58±0．74）则明显低于Pc组（P均〈0．01），SOD＋PC组与CAT十PC组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。各处理组心肌细胞凋亡率均显著高于对照组（P均〈0．01），SOD＋CAT＋PC组[（44．60±3．12）％]和H／R组[（45．55±3．75）％]显著高于PC组[（26．42±2．96）％]、SOD＋PC组[（26．01±4．24）％]和CAT＋PC组[（26．98±3．66）％]，P均〈0．01，Pc组、SOD＋PC组和CAT＋PC组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。PC组、SOD＋PC组和CAT＋PC组细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白表达水平显著高于对照组（P均〈0．01），Bax蛋白表达水平则显著低于对照组（P均〈0．01）。H／R组和SOD＋CAT＋PC组Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组（P均〈0．01），Bax蛋白表达水
- 涂荣会陈立钟国强曾志羽黎庆捷何艳何燕李金轶
- 关键词：细胞凋亡活性氧
- 缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞凋亡的影响被引量：6
- 2012年
- 目的观察缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨其调控心肌细胞凋亡的机制。方法构建大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、缺氧/复氧组(缺氧3 h后复氧6 h)、缺氧后处理组(缺氧3 h后行复氧5 min、缺氧5 min,反复3次,再复氧6 h)。应用荧光酶标仪测定线粒体活性氧量,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Western blot检测细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞线粒体活性氧量较对照组显著升高(P<0.01)。缺氧后处理组心肌细胞线粒体平均荧光强度为30.74±1.88 a.u./μg,显著低于缺氧/复氧组(63.17±2.75 a.u./μg,P<0.01),仍高于对照组(14.41±2.15 a.u./μg)。缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞凋亡率较对照组显著升高(45.86%±3.29%和26.99%±3.35%比5.72%±1.63%,P<0.01),缺氧后处理组低于缺氧/复氧组(P<0.01)。细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白在缺氧后处理组显著上调,在缺氧/复氧组显著下调;Bax蛋白在缺氧后处理组显著下调,在缺氧/复氧组显著上调。结论缺氧后处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡机制可能与线粒体和细胞膜Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关。
- 涂荣会钟国强曾志羽陈立何艳黎庆捷梁艺
- 关键词：活性氧细胞凋亡
- 离体大鼠心脏再灌注损伤模型中最佳再灌注时间的探讨被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨离体大鼠心脏再灌注损伤模型所需的最佳再灌注时间,为进一步研究心肌缺血再灌注损伤及其保护作用提供基础。方法:Langendorff离体心脏灌流模型下,35只离体大鼠心脏随机均分成5组:①Sham组,持续灌流210min;②～⑤IR组,全心停灌30min,分别再灌注30min(IR 30min组)、60min(IR 60min组)、120min(IR 120min组)、180min(IR 180min组)。检测各时段心率血压乘积(rate-pressure product,RPP)、冠脉流出液量(coronary flow,CF)及其乳酸脱氢酶(LDH)活力,采用2,3,5-氯三苯四唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法测量心肌梗死面积(infarct size,IS),透射电镜观察各组心肌超微结构变化。结果:与Sham组比较,RPP及CF于IR 30min组及IR60min组下降最为显著(P<0.01),LDH活力于IR 30min组及IR60min组升高最为显著(P<0.01),IS于IR 60min组开始趋于稳定;心肌超微结构于Sham组保存良好,IR 30min组其次,而于IR 60min组、IR 120min组及IR 180min组破坏均较严重。结论:在Langendorff模型下对离体大鼠心脏进行全心停灌再灌注,再灌注损伤主要发生在再灌注后60min,60min是相对较合适的再灌注时间。
- 黎庆捷文伟明钟国强涂荣会何艳李烁蒙滋滋
- 关键词：离体心脏灌流再灌注损伤再灌注时间
- 缺血后处理减轻心肌线粒体损伤对缝隙连接蛋白43的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察缺血后处理对线粒体缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响以及心肌保护的可能机制。方法健康新西兰大白兔64只.建立心肌缺血再灌注模型,随机分为4组,假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组、缺血后处理组,每组16只。检测各组心肌梗死面积,透射电镜观察心肌细胞的超微结构,荧光法检测线粒体膜电位,比色法检测线粒体Ca^(2+)和丙二醛浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测Cx43含量。结果与缺血再灌注组比较,缺血后处理组和缺血预处理组兔心肌梗死面积明显减少,心肌线粒体形态结构改变明显减轻,跨膜电位、SOD活性、线粒体Cx43明显升高,Ca^(2+)、丙二醛浓度明显降低(P<0.05,P<0.01)。与假手术组比较,缺血再灌注组兔线粒体Cx43明显下调(P<0.05)。结论缺血后处理保护心肌及线粒体可能与提高线粒体跨膜电位、降低线粒体氧自由基水平和减轻线粒体Ca^(2-)超载有关,其机制可能与提高线粒体Cx43表达有关。
- 何燕曾志羽钟国强李薇李金轶李伟科
- 关键词：连接蛋白类膜电位丙二醛
- 缺氧后处理与氧自由基清除剂预处理对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的观察缺氧后处理与氧自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)联合过氧化氢酶(CAT)预处理,对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨两者调控心肌细胞凋亡的机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,分对照组、缺氧/复氧组、缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组。应用荧光探针测定心肌细胞线粒体活性氧水平,Hoechst染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Wesiern blot法检测心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧/复氧组、缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与缺氧/复氧组比较,缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显降低(P<0.01);缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白明显上调,Bax蛋白明显下调。结论缺氧后处理及氧自由基清除剂预处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧再灌注心肌细胞凋亡,其抗凋亡可能机制与细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关。
- 涂荣会钟国强曾志羽陈立何艳黎庆捷梁艺
- 关键词：自由基清除剂细胞膜
- Cx43基因shRNA慢病毒载体的构建及其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用被引量：1
- 2013年
- 目的构建缝隙连接蛋白(Cx)43基因shRNA慢病毒载体,并检测其对大鼠心肌细胞Cx43基因的作用。方法针对Cx43基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,挑选阳性克隆行PCR鉴定及测序。用pHelper1.0和pHelper2.0质粒转染293T细胞,包装产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的细胞数量计算病毒滴度;以最适感染复数感染大鼠心肌细胞,通过荧光显微镜观察感染效率;应用real-time PCR和Western blot法检测大鼠心肌细胞Cx43 mRNA及Cx43蛋白表达,并评价其抑制效果。结果经PCR鉴定和测序证实,Cx43慢病毒载体构建正确,其病毒滴度为8×108TU/mL、转染效率为82.59%。荧光定量real-time PCR法检测Cx43 mRNA的抑制率为96.10%,Western blot法检测Cx43蛋白的抑制率为77.16%。结论成功构建了Cx43基因shRNA慢病毒载体,其能显著抑制大鼠心肌细胞Cx43基因的表达。
- 陈立钟国强涂荣会黎庆捷何艳
- 关键词：连接蛋白43RNA干扰慢病毒感染
