国家自然科学基金(30471931)
- 作品数：12 被引量：24H指数：3
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- 海藻糖负载对人红细胞冷冻干燥保存影响的实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的初步探讨红细胞冻干长期保存的有效方法,并比较冻干前海藻糖的负载与否对红细胞冻干保存效果的影响。方法实验设实验组(负载海藻糖冻干-复水后红细胞):37℃,红细胞负载海藻糖7h后,采用主要成分为含有15%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和150mmol/L,海藻糖的缓冲液作为保护液,在设定的降温程序下冻干保存红细胞;对照组:未负载海藻糖冻干-复水后红细胞。冻干结束后用37℃的再水化液快速水化,检测2组的各项理化指标。结果实验组红细胞冻干再水化后RBC和Hb回收率要高于对照组(P<0.05);ATP酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢镁(G-6-PD)活性水平显著差异有统计学意义(P<0.05))。结论胞内海藻糖对红细胞冻干具有明显的保护作用,红细胞在37℃孵育7h的条件负载海藻糖后冻干-复水后能保持细胞的理化稳定性。
- 陈麟凤刘景汉欧阳锡林庄远车辑
- 关键词：海藻糖红细胞PVP复水
- 常用细胞冻干保护剂的特性、作用机制及应用进展被引量：8
- 2006年
- 陈麟凤刘景汉
- 关键词：细胞
- 红细胞保存期对冻干前海藻糖负载量的影响研究
- 2010年
- 探讨冻干前红细胞保存期对海藻糖负载量的影响,确定红细胞负载海藻糖的最佳条件。在37℃条件下,4℃保存0、24、48和72 h的红细胞在海藻糖浓度800 mmol/L的负载缓冲液中孵育7 h后,检测胞内海藻糖浓度和胞外外游离血红蛋白浓度。经相同条件孵育后,4组红细胞对海藻糖的摄取量基本相同,分别为(49.747±2.253)、(50.316±0.612)、(49.768±2.179)和(49.013±1.991)mmol/L,各组之间无统计学差异。4℃保存24、48和72 h的红细胞相对于新鲜红细胞,3组负载红细胞胞外游离血红蛋白明显增加,分别高达(8.473±2.138)g/L(P<0.05)、(12.697±1.787)g/L(P<0.01)和(14.036±2.796)g/L(P<0.01)。说明冻干前红细胞4℃保存期不会影响海藻糖负载量,红细胞负载海藻糖的主要影响因素仍为负载温度、负载时间和负载缓冲液中海藻糖浓度,若固定孵育条件,红细胞对海藻糖的胞内负载量基本保持不变。但随保存期的延长,红细胞在高渗环境中孵育更易损伤,溶血率明显增加。所以,为达到更好的海藻糖负载效果,应尽量采用新鲜红细胞进行处理。
- 庄远刘景汉吕颖陈麟凤薛英娜
- 关键词：海藻糖游离血红蛋白
- 冻干前人红细胞对海藻糖的负载影响因素研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究影响海藻糖负载多种因素,探讨人红细胞对负载海藻糖的影响因素及规律性。方法根据红细胞海藻糖的负载量衡量,利用硫酸-蒽酮法检测红细胞在不同胞外海藻糖浓度、不同孵育时间、不同孵育温度的条件下对海藻糖的摄取量,并检测红细胞溶血程度。结果红细胞内海藻糖在负载液中的浓度<1000 mmol/L、负载时间<9 h、负载温度<37℃条件下,海藻糖的摄取量呈正相关。在负载液中浓度为0、200、400、600、800、1000mmol/L时,红细胞内海藻糖浓度分别为0、10.03、14.5、41.7、55.3和71.6 mmol/L;在温度为37℃时红细胞在浓度为1 000 mmol/L负载液中分别孵育0、1、3、5、7、9 h,胞内海藻糖浓度分别为0、5.73、6.11、55.7、和61.2 mmol/L。对温度、时间和胞外海藻糖浓度的统计分析显示,温度对负载后胞内海藻糖浓度的影响最大(P<0.01)。结论37℃、采用新鲜红细胞在海藻糖浓度为800 mmol/L的负载缓冲液中孵育7 h能有效摄取海藻糖,使之达到对红细胞起到冻干保护作用的胞内海藻糖理论浓度。
- 刘景汉陈麟凤欧阳锡林庄远车辑
- 关键词：海藻糖缓冲液硫酸-蒽酮法
- 人红细胞冻干保护剂配方及浓度的优化被引量：2
- 2009年
- 本研究探讨不同红细胞冻干保护剂配方及浓度的变化对红细胞冻干-复水后回收率的影响。应用一系列不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、海藻糖及不同渗透性保护剂组成的红细胞冻干保护剂保护冻干红细胞并检测冻干红细胞复冰后红细胞及血红蛋白的回收率。结果显示:荷载海藻糖的红细胞在添加不同浓度保护剂保护下各组的红细胞损失率差异具有显著性(p<0.05或p<0.01),其中以有PVP360的保护液组中的细胞损失最大(0.24%),含有PVP40且胞外海藻糖浓度为150mmol/L时,红细胞的损失最小(0.02%)。海藻糖浓度为150mmol/L与海藻糖浓度为50mmol/L的保护剂组之间存在统计学差异(p<0.01)。冻干红细胞在添加不同PVP40浓度的冻干保护剂作用再水化后红细胞和血红蛋白回收率也不相同。15%PVP40+150mmol/L海藻糖+2%BSA在红细胞冻干中的保护效果最好,红细胞和血红蛋白回收率分别为(61.29±4.93)%,(62.49±5.91)%,与其它各组间存在显著差异(p<0.01)。含有甘油的冻干保护液对红细胞冻干过程中的保护效果最好,红细胞和血红蛋白回收率分别为(65.97±4.52)%和(67.24±5.94)%,与其它渗透性保护剂组相比存在显著性差异(p<0.01)。结论:红细胞冻干保护剂为0.8mol/L甘油+15%PVP40+150mmol/L海藻糖+2%BSA是最佳保护剂浓度配方。
- 陈麟凤刘景汉欧阳锡林庄远车辑于洋
- 关键词：红细胞冻干保护剂海藻糖聚乙烯吡咯烷酮
- 二甲基亚砜在人红细胞冻干前负载海藻糖过程中的作用被引量：3
- 2007年
- 目的研究人红细胞冻干保存前负载海藻糖过程中二甲基亚砜(DMSO)的作用,优化红细胞负载缓冲液配方。方法实验组以浓缩红细胞25份(10ml/份)负载海藻糖,负载缓冲液中添加DMSO;对照组25份负载海藻糖,负载缓冲液中未添加DMSO。37℃条件下孵育8h后,分别检测两组红细胞胞内海藻糖负载量、胞外游离血红蛋白水平、ATP含量、红细胞变形性,并利用流式细胞术检测负载后红细胞膜的完整性。结果实验组与对照组红细胞的胞内海藻糖负载量分别为(57.033±4.883)mmol/L,(49.184±4.858)mmol/L(P<0.05);胞外游离血红蛋白浓度分别为(4.131±0.473)g/L,(5.410±0.501)g/L(P<0.05);ATP浓度分别为(3.874±0.426)μmol/g Hb,(3.358±0.306)μmol/g Hb(P<0.05);红细胞变形指数分别为0.330±0.0211,0.277±0.0232(P<0.01);红细胞胞膜PS表达率分别为(5.04±0.495)%,(8.69±0.862)%(P<0.01)。结论DMSO在红细胞负载海藻糖过程中可有效增加胞内海藻糖负载量,并显著改善负载缓冲液对红细胞胞膜的高渗损伤,更好地发挥海藻糖对红细胞的保护作用。
- 庄远刘景汉欧阳锡林陈麟凤车辑
- 关键词：海藻糖流式细胞术
- 人红细胞负载海藻糖后冻干保存过程的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨红细胞冻干长期保存的有效方法,并评价复水后红细胞各项理化指标的变化。方法设对照组(常规条件下保存的红细胞)和实验组(负载海藻糖冻干-复水后红细胞),在37℃条件下,红细胞负载海藻糖7h后,采用主要成分为含15%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和150mmol/L海藻糖的缓冲液作为保护液,在设定的降温程序下进行红细胞的冻干保存。冻干后置37℃的再水化液快速水化,检测各项理化指标。结果红细胞冻干再水化后红细胞和血红蛋白回收率均在80%以上,且各项理化指标与常规保存的对照红细胞间差异无显著性(P>0.05)。结论红细胞在37℃孵育7h的条件下负载海藻糖后进行冻干,复水后能保持细胞的理化稳定性和结构形态的完整性,为进一步研究长期冻干保存红细胞奠定了基础。
- 刘景汉陈麟凤欧阳锡林庄远车辑毕蔚如
- 关键词：海藻糖
- 人红细胞冻干前负载海藻糖最佳化研究被引量：1
- 2007年
- 为更好的实现海藻糖在红细胞冻干保存中的保护作用,关键是克服质膜对海藻糖的非渗透性,使胞质内海藻糖达到有效浓度。本研究的目的是通过对人红细胞负载海藻糖的规律性研究,筛选出海藻糖负载的最佳负载条件并评价海藻糖负载对红细胞各项理化指标的影响。在不同孵育温度(4、22和37℃)、孵育时间(0、2、4、6、8、10小时)、不同负载缓冲液浓度(0、200、400、600、800、1000mmol/L)条件下检测新鲜红细胞对海藻糖的成功负载量及红细胞各项理化指标;在固定负载条件下,对新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞海藻糖负载、游离血红蛋白(FHb)、血红蛋白(Hb)和红细胞平均体积(MCV)进行了比较。结果表明:红细胞对海藻糖的负载与孵育温度、时间及负载缓冲液海藻糖浓度密切相关。随着温度的升高、时间的延长和负载缓冲液海藻糖浓度的增加,红细胞对海藻糖的摄取量也随之增加。在海藻糖负载最佳条件下,新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞的胞内海藻糖浓度、FHb浓度分别为65.505±6.314mmol/L、66.2±5.002mmol/L和6.567±2.568g/L、16.168±3.922g/L。结论:红细胞负载海藻糖的最佳条件是采用新鲜红细胞,在37℃条件下、海藻糖浓度为800mmol/L的负载缓冲液中孵育8小时,这一条件可使胞内海藻糖达到有效浓度,并保持红细胞细胞理化性质稳定和膜完整性。
- 庄远刘景汉欧阳锡林陈麟凤车辑
- 关键词：海藻糖
- 联合海藻糖和二甲基亚砜进行冻干前负载的人红细胞冻干效果研究被引量：1
- 2008年
- 探讨人红细胞在冻干前经添加低浓度二甲基亚砜(DMSO)海藻糖负载缓冲液负载后,是否会提高红细胞的冻干效果。实验组:为6%DMSO+800 mmol/L海藻糖。对照组:冻干前负载缓冲液为等渗PBS。取等量压积红细胞(6份)分别重悬于两组负载缓冲液,37℃孵育8 h后离心去除上清,加入冻干保护剂混匀后程序冻干,15%PVP溶液37℃三步复水。分别检测并比较两组冻干红细胞复水后血红蛋白回收率、复水红细胞变形性、再水化后4℃放置时间对冻干红细胞再水化稳定性的影响及冻干红细胞长期保存的稳定性。结果表明:冻干红细胞再水化后,实验组红细胞血红蛋白回收率为(63.019±4.901)%,对照组为(28.787±7.514)%,两组之间存在显著差异(P<0.01);冻干红细胞再水化后,两组冻干红细胞的综合变形指数均有明显下降,实验组红细胞综合变形指数为(18.133±2.392)%,对照组为(8.017±1.934)%,两组之间存在显著差异(P<0.01);两组冻干红细胞复水后4℃保存4 h、6 h、8h后,相对即刻再水化血红蛋白回收率的差值,经配对t检验显示有显著统计学差异(P<0.05)。复水后4℃保存12 h、24 h后,相对即刻再水化血红蛋白回收率的差值,经配对t检验显示无统计学差异;两组冻干红细胞4℃保存6个月前后复水后血红蛋白回收率的差值,经配对t检验显示两者之间存在显著差异(P<0.05)。结论:红细胞冻干前经添加6%DMSO的海藻糖负载缓冲液处理后,可提高冻干后红细胞血红蛋白回收率、改善复水红细胞变形性,提高复水后4℃保存的稳定性和冻干红细胞长期保存的稳定性。
- 庄远刘景汉孙桂香陈麟凤车辑
- 关键词：海藻糖
- 人红细胞冻干程序优化的实验研究
- 2010年
- 目的探讨冻干程序中几种参数设置对红细胞冻干复水后回收率的影响。方法将红细胞装入细管分别用四种模式对其进行降温,降温完成后将细管取投入25℃水浴中,对其外形变化进行比较判断玻璃化的程度;将冻好的样品放入冻干机搁板上,温度分别设置为-40、-50、-60、-70和-80℃,对样品进行冻干;对干燥开始不同温度、升温速率、红细胞样品在每一温度干燥的时间等多因素加以比较;最后测定了红细胞残余含水量。结果直接将样品投入液氮中降温,保护液在冷冻或溶化过程中形成玻璃化而未出现冰晶。搁板温度为-70℃和-80℃时红细胞回收率没有显著性差异(P>0.05),这两组与其他各温度下的回收率均有显著性差异(P<0.01)。E程序下的红细胞和血红蛋白回收率最高,分别为83.14%±9.55%和85.33%±11.42%。与其他各程序间存在显著差异(与A、B、C相比P<0.01;与D相比P<0.05)。随着残余含水量的增多,细胞回收率呈正相关的增加趋势。结论冻干中采用液氮快速降温,搁板温度预冷至-70℃,开始干燥时的温度越接近样品最初在搁板的平衡温度,红细胞升华干燥阶段升温速率越均匀缓和,红细胞的冻干效果越好。
- 陈麟凤刘景汉汪德清欧阳锡林庄远车辑于洋李卉
- 关键词：冻干保护剂
