国家自然科学基金(30471952)
- 作品数：18 被引量：31H指数：4
- 相关作者：董子明赵继敏赵国强杨洪艳黄幼田更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院郑州市妇幼保健院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省自然科学基金河南省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 互隔交链孢酚激活EC9706细胞DNA聚合酶β表达的信号通路初探被引量：2
- 2009年
- 目的:研究互隔交链孢酚(AOH)对食管癌EC9706细胞株中DNA聚合酶β(DNApolβ)表达的影响.方法:以PKA激活剂Forskolin(40μmol/L)为阳性对照,采用免疫细胞化学,WesternBlot方法检测20μmol/LAOH作用EC9706细胞16h后polβ蛋白水平的表达.以PKA特异性抑制剂H89(10μmol/L)预处理EC9706细胞1h,再以20μmol/LAOH作用细胞16h,观察H89阻断AOH激活polβ蛋白表达的作用.结果:免疫细胞化学结果显示,与溶剂对照组和H89处理组相比较,AOH处理组,Forskolin处理组的细胞中polβ表达增高.WesternBlot结果表明,AOH处理组,Forskolin处理组polβ表达分别是溶剂对照组的2.05和3.12倍(P<0.05),而H89组仅为对照组的1.32倍.结论:AOH可以激活食管癌EC9706细胞中polβ基因表达,这可能是通过PKA信号转导通路介导的.
- 赵继敏李沛杨洪艳黄幼田江亚南赵明耀郑智敏董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β互隔交链孢酚蛋白激酶A信号转导通路
- 食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β基因敲除载体的构建
- 2014年
- 目的构建食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β(DNA polβ)基因敲除载体,为DNA polβ基因敲除奠定基础。方法应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,根据DNA polβ基因序列,设计并合成2对特异性引物(UP1/UP2和DOWN1/DOWN2),通过PCR扩增获得上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN),其中上游同源序列长1 268 bp,下游同源序列长2 150 bp,将其插入骨架载体pcDNA3.1,从而构建了DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ,最后用PCR、酶切和测序进行鉴定。结果经过PCR筛选,限制性酶切及DNA测序鉴定,证实上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN)2个片段插入正确。结论通过本研究所述方法,成功构建了用于食管癌细胞Eca9706 DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ。
- 冯龙郭文涛路武豪孙萨迦董子明
- 关键词：基因敲除DNA聚合酶打靶载体
- 阻断PKA信号通路对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察蛋白激酶A(PKA)信号通路在食管癌EC9706细胞增殖和凋亡中的作用。方法利用PKA特异性阻断剂H89作用于食管癌EC9706细胞,倒置显微镜下观察食管癌EC9706细胞形态学改变;WST-8检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,H89作用于食管癌EC9706细胞24 h后,部分细胞出现细胞形态缩小,细胞增殖减慢;细胞增殖实验显示,吸光度值降低(P<0.05),细胞存活率下降;细胞凋亡检测结果显示,阻断PKA通路,促进细胞早期凋亡和晚期凋亡(P<0.05)。结论利用H89阻断PKA信号通路,可以改变食管癌EC9706细胞生物学特性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。
- 刘康栋赵继敏王瑾瑾马艳英杨洪艳郑智敏赵明耀董子明
- 关键词：食管癌EC9706细胞蛋白激酶A信号通路
- 全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达被引量：4
- 2006年
- 目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。
- 金戈赵继敏杨洪艳黄幼田郑智敏赵国强赵勤吴景兰董子明
- 关键词：食管肿瘤全反式维甲酸二甲亚砜细胞分化
- 互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞的急性毒性作用被引量：3
- 2009年
- 目的研究互隔交链孢酚(AOH)对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3的急性毒性作用。方法将对数生长期的NIH/3T3细胞分为10、50μmol/L AOH处理组和溶剂对照组,观察染毒细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究细胞存活率,采用彗星实验观察细胞的DNA损伤程度,利用流式细胞术(FCM)检测对细胞周期的影响。结果细胞处理后,出现明显的细胞形态学变化。MTT结果表明,10、50μmol/L AOH处理组细胞抑制率(分别为19.88%,32.47%)显著高于溶剂对照组(P<0.05)。10、50μmol/L AOH组在彗星实验中细胞拖尾率为35.87%和71.83%,尾部DNA含量为(36.18±18.6)和(51.3±21.6),显著高于溶剂对照组的拖尾率(14.78%)和尾部DNA含量(21.29±15.60)(P<0.05);10μmol/L AOH处理组对NIH/3T3细胞周期影响不明显,而50μmol/L AOH处理组引起S期增高和明显的G2/M期阻滞(P<0.05)。结论AOH可诱导NIH/3T3细胞的DNA损伤、抑制细胞增殖,并诱导G2/M期细胞阻滞。
- 赵继敏马俊芬赵军杨洪艳郑智敏董子明
- 关键词：互隔交链孢酚NIH/3T3细胞急性毒性
- DNA聚合酶β基因表达对NIH3T3细胞增殖影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察不同类型DNA聚合酶β(DNA Polymerase β,DNA pol β)在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的表达及细胞增殖特性的变化。方法用脂质体转染的方法,将野生型(wild type,wt)和食管癌缺失突变型(delete mutional type,dmt)的polβ重组荧光载体pEGFP-C3-polβ转染NIH3T3细胞,建立稳定表达polβ的细胞系,通过荧光倒置显微镜观察其定位,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法绘制生长曲线,流式细胞仪测定其细胞周期。结果转染2种类型polβ的NIH3T3细胞株中,均有外源基因mRNA水平和蛋白水平的表达;荧光倒置显微镜结果显示,野生型的以细胞胞核为主,缺失突变型的polβ表达以细胞胞浆为主,从第3d开始,缺失突变型的细胞生长速度较野生型和对照组明显增快(P<0.05);转染缺失突变型NIH3T3细胞的S期细胞比例为68.29%,明显高于野生型的57.18%、对照组的58.12%和未转染NIH3T3细胞的57.35%(P<0.05)。结论外源野生型polβ基因表达后对NIH3T3细胞的增殖速度无明显影响,而缺失突变型则使其增殖速度加快。
- 赵军路静杨洪艳黄幼田赵继敏赵明耀赵国强张曦董子明
- 关键词：基因表达细胞增殖
- 鼻咽癌组织中DNA聚合酶β基因的突变被引量：3
- 2007年
- 目的研究鼻咽癌中是否存在DNA聚合酶β(DNA poly meraseβ,polβ)的突变及变异情况。方法采用RT-PCR法(逆转录-DNA聚合酶链反应)、PCR-SSCP(聚合酶链-单链构象多态性分析)、DNA序列分析法对26例鼻咽癌组织进行polβ基因突变研究。结果鼻咽癌组织中存在polβ基因突变,且基因突变率与癌组织的病理分级有关,高分化(G1)、中度分化(G2)、低分化及未分化(G3)鼻咽癌组织中polβ基因突变率分别为12.5%(2/16)、21.4%(3/14)、80%(8/10)。G1与G2比较,差异无统计学意义(P>0.01),G1与G3、G2与G3比较,差异均有统计学意义(P<0.005)。测序结果表明,polβ基因的第454位核苷酸由T变为C,其氨基酸变异为第114位氨基酸由Phe变为Ser;第466位核苷酸由G变为A,其氨基酸变异为第118位氨基酸由Gly变为Glu;第148位核苷酸由A变为G,其氨基酸变异为第28位氨基酸由Asn变为Ser。结论发现在鼻咽癌组织中存在多种形式的polβ突变,导致氨基酸序列、空间结构的改变,可能与鼻咽癌的发生、发展相关。
- 郑红李明善赵国强董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β鼻咽癌基因突变
- 人DNA聚合酶β基因启动子碱基位点突变对萤光素酶表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察人DNA聚合酶B基因（DNApolymerasebeta，polB）启动子-37位C→A突变对萤光素酶表达的影响。方法从25例人正常食管黏膜及食管癌组织中提取基因组DNA，PCR扩增及测序分析，获得野生型及含-37位C→A的突变型polβ启动子序列。分别构建含人野生型和突变型的polβ启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3（W／M）polβ／promoter，转染食管癌细胞Eca9706及G418筛选，检测萤光素酶活性。结果野生型及突变型的polβ启动子片段正确插入萤光素酶报告载体pGL3-neo-enhancer。对照组pGL3-neo-enhancer、野生组pGL3Wpolβ／promoter和突变组pGL3Mpolβ／promoter萤光素酶活性分别为2743．50±227．30、1112976．00±82900．20和7882559．00±201824．90，三组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论polβ基因启动子对萤光素酶基因表达具有较强的启动活性，polβ启动子区-37位C→A碱基突变可显著增强萤光素酶的表达。
- 李月白张海风于雅丽赵国强董子明赵松
- 关键词：DNA聚合酶Β启动子萤光素酶报告基因突变
- 互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞毒性的作用被引量：4
- 2008年
- 目的研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的毒性作用,为互隔交链孢霉的致癌机制提供理论依据。方法以互隔交链孢酚(alternariol,AOH)为阳性对照,采用形态学观察,噻唑蓝法,生长曲线,流式细胞术(FCM)等方法检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞生长的影响及细胞周期的改变。结果ALT对NIH/3T3细胞的半数抑制率为76.4、50和100μmol/L的ALT染毒24 h可使NIH/3T3细胞生长曲线明显下降,并有明显的形态学改变;以10.0、20.0和50.0μmol/L的ALT染毒24 h后,与对照组比较,G2/M期细胞比例增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALT对NIH/3T3细胞有毒性作用,可抑制细胞增殖并诱导G2/M期细胞阻滞,其细胞抑制作用可能与细胞周期阻滞有关。
- 刘康栋马艳英赵继敏王瑾瑾杨洪艳黄幼田董子明
- 关键词：NIH/3T3细胞细胞毒性细胞周期
- 调控食管癌EC9706细胞DNA聚合酶β表达的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:观察DNA聚合酶β(DNA polβ)对食管癌EC9706细胞生物学特性的影响。方法:以pSINsi-hU6为载体构建DNA polβ靶向的siRNA表达质粒,转染EC9706细胞,G418筛选。流式细胞术和裸鼠体内成瘤实验检测细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测细胞DNA polβmRNA的表达。结果:与空载体组和对照组相比,实验组1和实验组2(转染siRNA重组表达质粒)DNA polβmRNA的表达显著下降(P<0.05),DNA polβ高表达组中mRNA的表达显著升高(P<0.05);实验组1、实验组2和DNA polβ高表达组细胞周期S期比例显著增加(P<0.05),肿瘤重量亦显著增加(P<0.05)。结论:DNA polβ的高表达和过低表达,都会增加细胞的遗传不稳定性,可能在食管癌的发生中起一定作用。
- 王涛董子明赵国强
- 关键词：食管肿瘤DNA聚合酶ΒRNA干扰SIRNA表达载体
