广东省科技计划工业攻关项目(2002C30404)
- 作品数：11 被引量：58H指数：5
- 相关作者：杨银梅刘朝晖王汉平叶惠芬陈劲龙更多>>
- 相关机构：广州市第一人民医院广州医学院广州医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 耐头孢西丁肺炎克雷伯菌的耐药监测及其β内酰胺酶研究被引量：5
- 2006年
- 目的对头孢西丁耐药的肺炎克雷伯菌进行耐药性监测,并对所产的β内酰胺酶进行初步研究。方法用琼脂稀释法测定所选菌株对13种常用抗生素的最低抑菌浓度(MIC),对菌株粗提酶进行等电聚焦电泳和三维试验。结果⑴所测的13种抗生素中,亚胺培南和美洛培南100%敏感,其次头孢吡肟的耐药率较低,为20.6%,头孢噻肟的敏感性高于头孢他啶。⑵等电聚焦电泳发现:绝大部分菌株都有多条β内酰胺酶条带,等电点为5.4和7.8的条带多见。⑶三维试验结果:超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的产生率为79.5%,AmpC酶(Ambler C型)的产生率为41.0%,同时产ESBLs和AmpC酶的产生率为35.9%。结论头孢西丁耐药的肺炎克雷伯菌大部分菌株同时产两种甚至多种β内酰胺酶,临床微生物实验室应加强对此类菌株所产的β内酰胺酶特别是AmpC酶的监测和研究。
- 杨银梅刘朝晖陈劲龙叶惠芬陈惠玲杨英为
- 关键词：肺炎克雷伯菌耐药性等电聚焦电泳
- 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型及耐药性研究被引量：3
- 2007年
- 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是革兰阴性细菌对新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药最重要的机制，主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌产生。随着第三代头孢菌素在临床上的大量应用，产ESBLs的细菌种类不断增加，ESBLs基因表型也不断增加，成为细菌耐药机制研究的热点。
- 张盛斌刘朝晖杨银梅叶惠芬
- 关键词：耐药性第三代头孢菌素ESBLSΒ-内酰胺类
- 运用变性高效液相色谱技术快速检测肺炎克雷伯菌耐药性被引量：5
- 2006年
- 目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLc)技术,对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的54株肺炎克雷伯菌临床分离株SHV型质粒进行基因分型,探讨其敏感性和特异性,试图建立一种快速检测肺炎克雷伯菌耐药性新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出SHV型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLc技术进行分析和DNA测序,确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型。结果DHPLc分析样本的阳性率为100%,均表现为形态各异的异常洗脱峰(双峰或三峰);测序结果表明所有样本与SHV-1比较均存在着耐药基因突变;并且DHPLc中异常峰一致的样本均为同一基因亚型。结论本次实验中DHPLc的敏感性高达100%,并且每一种SHV亚型具有特定的洗脱峰型,所以DHPLc可用于细菌耐药基因的分型,能快速检测肺炎克雷伯菌耐药基因的突变,不但准确性较高,而且具有简便快捷、经济等特点,有很大的潜在临床价值。
- 张盛斌刘朝晖杨银梅王汉平
- 关键词：变性高效液相色谱肺炎克雷伯菌产超广谱Β-内酰胺酶基因分型
- 运用变性高效液相色谱快速检测CTX-M超广谱β内酰胺酶基因型被引量：5
- 2006年
- 目的直用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对确认产 ESBLs 的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株 CTX-M 型质粒酶进行基因分型,探讨其灵敏度和特异度,以建立快速检测 CTX-M 型 ESBLs 的新方法。方法采用 PCR 技术从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出 CTX-M 型质粒的编码序列,用 DHPLC 技术对扩增产物进行分析和 DNA 测序,确定其基因突变的类型,通过比对两者结果后确定其基因型。结果从34株产 ESBLs 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出35份 CTX-M 型 ESBLs 编码序列(其中1株同时扩增到2份 CTX-M 型编码序列)。11份与标准菌株 CTX-M-3一致:4份与标准菌株 CTX-M-9一致;测序确定分别为 CTX-M-3型和 CTX-M-9型:20份表现为3种形态各异的异常洗脱峰,测序结果表明20份样本与其标准株对比均存在着基因突变,DHPLC 中异常峰一致的样本均为同一基因亚型。结论 DH-PLC 可用于 ESBLs 基因分型的检测,能快速检测 CTX-M 的基因型,具有准确性高、简便快捷、经济等特点,有很大的临床应用价值。
- 刘朝晖张盛斌王汉平杨银梅
- 关键词：变性高效液相色谱超广谱Β内酰胺酶基因型
- 产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌blaCTX-M基因型及耐药性检测被引量：8
- 2006年
- 目的 了解我院产超广谱13，内酰胺酶（extended-spectrumβ-lactamascs，ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型耐药基因的分布及其耐药情况。方法 用针对SHV、TEM、CTX-M基因的特异性引物进行PCR扩增确定超广谱β--内酰胺酶基因型，对扩增到的CTX-M基因进行DNA序列分析；采用三维实验检测菌株产AmpC酶；采用K—B琼脂扩散法进行菌株的药物敏感性测定。结果34株产CTX-M酶菌中有28株同时产2种或2种以上的B．内酰胺酶，并且其中有一株同时产两种CTX-M酶。序列分析证实35份CTX-M的扩增产物中有17份为CTX-M-14，占48．6％；11份为CTX-M-3，占31．4％；4份为CTX-M-9，占11．4％；2份为CTX—M．19，占5．7％；1份为CTX-M-13，占2．9％。产CTX-M酶菌株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮，舒巴坦、头孢他啶、头孢西丁、庆大霉素、哌拉西林，他唑巴坦、氨曲南、亚胺培南和美洛培南的耐药率分别是100％、100％、100％、100％、100％、100％、97．1％、52．5％、53．1％、32．4％、38．2％、75．8％、23．5％、63．6％、0、0。产其它亚型ESBLs的菌株对上述药物的耐药率分别是100％、92．9％。78．6％、71．4％、92．9％、92_3％、57．1％、21．4％、7．1％、78．6％、64．3％、64-3％、38．5％、78．6％、0、0。结论 产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型耐药基因主要是CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-9、CTX-M-19和CTX—M．13；产CTX-M酶菌株绝大多数同时产其它多种β-内酰胺酶，其对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮，舒巴坦的耐药水平高于不产CTX-M型ESBLs株（P〈0．05）；耐药表型呈多样性，亚胺培南或美洛培南是临床治疗产CTX-M酶菌株感染的首选药物。
- 刘朝晖张盛斌杨银梅叶惠芬
- 关键词：大肠埃希菌肺炎克雷伯菌超广谱Β-内酰胺酶耐药性基因型
- 变性高效液相色谱技术快速检测下呼吸道致病性细菌的实验研究
- 2008年
- 目的运用变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测5种下呼吸道致病性细菌，建立一种快速检测下呼吸道致病性细菌的分子生物学方法。方法以下呼吸道致病性细菌16SrRNA基因的保守区设计通用引物，并在引物前加上40-bpGC，特异性扩增该基因的保守区和可变区，运用DH—PLC技术对PCR产物进行分析。选取50株临床分离菌株验证该方法的有效性。结果通用引物可特异性扩增细菌16SrRNA，PCR产物经DHPLC分析后每种细菌均能得到特征性的洗脱峰。DHPLC检测临床分离菌株结果显示，与常规培养方法的符合率为100％。结论DHPLC技术具有准确、简便、快捷和高通量等特点，在临床检测下呼吸道致病性细菌中具有潜在的应用价值。
- 张晓燕刘朝晖梁志科王汉平叶惠芬杨银梅谢健晋
- 关键词：变性高效液相色谱基因聚合酶链反应细菌
- 产TEM-116型β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌耐药性研究被引量：8
- 2006年
- 目的通过比较分析产TEM-116型β-内酰胺酶(-βlactamases)的肺炎克雷伯菌临床耐药性,了解TEM-116型β-内酰胺酶的特性。方法采用纸片扩散法进行细菌药敏试验,并以分析性等电聚焦的方法测定其等电点(isoelectric points,PI),对产TEM-116肺炎克雷伯菌与产TEM-1肺炎克雷伯菌的耐药性进行研究。结果产TEM-1和产TEM-116的肺炎克雷伯菌均对AMP 100%耐药,对第一、二代头孢菌素高度耐药,对第四代头孢菌素FEP敏感,对IPM 100%敏感;而产TEM-116肺炎克雷伯菌对AMC、TZP、AMK、GEN的耐药率较产TEM-1型者高,卡方检验显示二者之间差异存在显著性(P<0.05);分析性等电聚焦显示,TEM-116型β-内酰胺酶PI值为5.4,绝大多数产TEM-116肺炎克雷伯菌有>2条电泳带,仅1株只产TEM-116,它对大多数抗菌药物耐药。结论产TEM-116的肺炎克雷伯菌,对抗菌药物的耐受率比产TEM-1的肺炎克雷伯菌显著升高,排除其他耐药质粒的影响,TEM-116对β-内酰胺的水解能力明显高于TEM-1,具备了ESBLs的特性。
- 王汉平刘朝晖杨银梅张盛斌陈劲龙叶慧芬
- 关键词：Β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性
- 运用变性高效液相色谱对肺炎克雷伯菌产ESBL进行基因分型被引量：22
- 2005年
- 目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLC技术进行分析,分析提示,异常的样本通过测序确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型。结果共分析了101例肺炎克雷伯菌临床分离株,全部样本均扩增出TEM型质粒的编码序列,经过DHPLC分析,52例(51.4%)样本表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;49例(48.6%)样本表现为异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,但异源双链峰的高度有差异,测序结果表明它们均存在四种相同的基因突变,在NCBI网站比对后确定为TEM-116;测序结果还提示,部分样本中TEM-1和TEM-116混合存在,其比例的不同表现为DHPLC时异源双链峰高度的差异;文献检索表明,本次确定的TEM-116为一新的基因亚型,为国内首次报道。结论DHPLC具有简便快捷、高通量和自动化的特点,重复性好,不仅可对已知突变作出即时诊断,还可发现新的基因亚型,不失为一种较好的ESBL分子诊断方法及其流行病学监测手段。
- 刘朝晖王汉平陈劲龙杨银梅叶惠芬曾军
- 关键词：变性高效液相色谱肺炎克雷伯菌基因分型变性高效液相色谱肺炎克雷伯菌ESBL基因分型TEM-1型DHPLC
- 广州地区产ESBL肺炎克雷伯菌SHV型质粒的分子流行病学调查被引量：3
- 2006年
- 目的运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术调查广州地区产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌各种亚型的流行分布情况,试图建立一种方便快捷的分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法对73份产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)肺炎克雷伯菌进行SHV质粒基因扩增,分别采用变性高效液相色谱(DHPLC)和测序法对扩增产物进行分析,以明确基因类型,并建立各个已知SHV基因亚型的特征性DHPLC图谱库。结果73株产ESBL的肺炎克雷伯菌中68株确定为SHV基因型,其中62株为已知基因型,分别为SHV-1225株,SHV-1a 14株,SHV-17株,SHV-2a 8株,SHV-28 5株,SHV-2 2株,SHV-26和SHV-33各1株；6株为新的SHV基因型,其中5株获得命名；非SHV型菌株5株,分别为LEN-4型1株,OKP型4株。经过DHPLC分析,全部样本均表现为异常的洗脱峰,各种亚型的异常洗脱峰的形态迥异,其敏感性达100％(68/68),特异性为93．2％(68/73)。SHV型质粒基因的突变集中在nt92、nt324～nt402及nt703～nt786这3个区段。结论SHV-12是广州地区产SHV型β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌主要的基因亚型,高比例基因变异的检出预示本地区即将或已经面临肺炎克雷伯菌新耐药机制的抵抗和流行,因此必须加强对产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测,及时调整抗菌策略；DHPLC可作为一种快速敏感的筛查方法用于产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测。
- 刘朝晖王汉平杨银梅左斌叶慧芬
- 关键词：变性高效液相色谱肺炎克雷伯菌SHV型Β-内酰胺酶
- 肺炎克雷伯菌肺炎临床和药敏研究被引量：2
- 2004年
- 目的 对肺炎克雷伯菌肺炎进行临床分析。方法 对 84例肺炎克雷伯菌肺炎住院患者进行临床和药敏分析 ,采用K -B法进行药敏检测 ,标准纸片扩散确证法检测ESBLs,对临床资料进行描述性研究 ,对危险因素、病死率进行 χ2 检验、logistic回归分析。结果 肺炎克雷伯菌肺炎多发生于老年人及有基础疾病者 ,细菌耐药情况较严重 ,产ESBLs率达 2 8 6 %。肺炎克雷伯菌肺炎混合菌感染发生率高达 4 7 6 %。肺炎克雷伯菌肺炎病死率为 13 1%。产ESBLs肺炎克雷伯菌肺炎病死率显著高于非产ESBLs肺炎克雷伯菌肺炎患者。老年人、脑血管意外、支气管 -肺部疾病为肺炎克雷伯菌肺炎高危因素 (P <0 0 5 )。产ESBLs菌株肺炎患者、合并MRSA感染者预后不良 (P <0 0 5 )。结论 肺炎克雷伯菌肺炎病死率较高 ,ESBLs的检出率增高。必须加强对产ESBLs及合并MRSA感染的肺炎克雷伯菌肺炎进行监控 ,规范合理的早期经验性抗生素治疗 。
- 刘朝晖陈劲龙叶惠芬赵子文杨银梅张溪林曾军
- 关键词：肺炎克雷伯菌ESBL病死率药敏MRSA感染
