国家自然科学基金(30371538)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 牙龈卟啉单胞菌FtsZ第322位的甘氨酸在细胞分裂中的作用
- 2006年
- 目的:探讨牙龈卟啉单胞菌FtsZ(PgFtsZ)第322位的甘氨酸在细菌细胞分裂过程中的作用。方法:通过site-d irected mutagenesis技术,采用m egaprim er方法,使用三个引物进行两轮的PCR,构建Pg-FtsZ第322位甘氨酸的点变异型质粒pYW 9(ZG322P,携带PgFtsZ第322位甘氨酸由脯氨酸取代的点变异型基因)和pYW 10(ZG322H,携带PgFtsZ第322位甘氨酸由组氨酸取代的点变异型基因),然后将质粒pYW 9、pYW 10和pEZ1(携带野生型PgFtsZ的基因)分别转化到Escherichia coliBL21(DE3)pLysS中进行表达、分离和纯化目的蛋白质。同时将载体pET3 a也转化到E.coliBL21(DE3)pLysS中作为阴性对照。进一步通过免疫印迹法鉴定构建的点变异型ZG322P和ZG322H。E.coli的形态通过显微镜观察。结果:野生型PgFtsZ的过表达导致E.coli细胞分裂的明显抑制,含质粒pEZ1的E.coli和仅含有载体作为对照的E.coli相比延长大约20倍。然而点变异型ZG322P和ZG322H的过表达并未引起E.coli细胞分裂的抑制,即含质粒pYW 9的E.coli和含质粒pYW 10的E.coli表现出正常的形态,与仅含有载体作为对照的E.coli细胞的形态相似。免疫印迹分析表明野生型PgFtsZ、点变异型ZG322P、ZG322H在相同位置出现阳性带,并且表达水平相似。结论:牙龈卟啉单胞菌FtsZ第322位的甘氨酸在细菌细胞分裂中起着重要的作用。
- 于维先胡晓春毕文翔于德珍
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌FTSZ细胞分裂
- Ca^(2+)和Mg^(2+)对野生型和变异型牙龈卟啉单胞菌FtsZs的GTPase活性的影响
- 2007年
- 目的:探讨Ca2+和Mg2+对野生型和变异型牙龈卟啉单胞菌FtsZs的GTPase活性的影响。方法:将质粒pEZ1(野生型PgFtsZ,Wt PgFtsZ)、pYW1(PgFtsZ的C末端缺失73个氨基酸残基的变异型,ZΔC01)和pYW2(PgFtsZ的N末端缺失43个氨基酸残基的变异型,ZΔN01)导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达,分离和纯化这些目的蛋白。应用Malachite green检测法检测10mmol.L-1的Ca2+、Mg2+对Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase活性的作用。结果:在没有10mmol.L-1Ca2+或Mg2+的条件下,Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase值分别为8.25±0.22、7.43±0.23和8.00±0.18;在10mmol.L-1Mg2+存在的条件下,Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase值分别为8.30±0.15、7.51±0.22和7.85±0.17,同没有离子存在的条件下相比GTPase活性差异均无显著性(P>0.05);在10mmol.L-1Ca2+存在的条件下,Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase值分别为5.84±0.20、5.25±0.18和5.73±0.13,同没有离子存在的条件下比较GTPase活性均有明显降低(P<0.01)。结论:10mmol.L-1的Mg2+对Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase活性无影响,10mmol.L-1的Ca2+则对GTPase具有抑制作用。
- 张玉凤于维先毕文翔于德珍
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌
- N末端的缺失对牙龈卟啉单胞菌FtsZ体外聚合的影响
- 2008年
- 目的:探讨N末端的缺失对牙龈卟啉单胞菌FtsZ体外聚合的影响。方法:将质粒pEZ1(PgFtsZ,携带野生型牙龈卟啉单胞菌FtsZ的基因)、pYWN1(ZΔN01,携带PgFtsZ的N末端去除了43个保守性氨基酸残基的缺失变异型PgFtsZ的基因)和pYWN2(ZΔN02,携带PgFtsZ的N末端去除了205个保守性氨基酸残基的缺失变异型Pg-FtsZ的基因)分别导入Escherichia coli BL21(DE3)pLysS中表达,通过IPTG诱导表达目的蛋白质,6 mol/L尿素变性及HiTrap SP层析柱纯化目的蛋白质,最后通过沉淀法检测10 mmol/L的MgCl2、CaCl2和MnCl2对PgFtsZ、ZΔN01和ZΔN02体外聚合的影响。结果:10 mmol/L的MgCl2、CaCl2和MnCl2均能诱导PgFtsZ和ZΔN01出现聚合反应,然而10 mmol/L的MgCl2和CaCl2没能引起ZΔN02的体外聚合,而仅有10 mmol/L的MnCl2能诱导ZΔN02出现聚合反应,但效果不如PgFtsZ和ZΔN01明显。结论:PgFtsZ的N末端的43个氨基酸残基对Mg2+、Ca2+和Mn2+诱导其体外聚合反应影响不大,而后的162个氨基酸残基在PgFtsZ的体外聚合过程中起着关键的作用。
- 于维先毕文翔于德珍
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌FTSZ
- 野生型及点变异型牙龈卟啉单胞菌FtsZs体外聚合的特性被引量：2
- 2004年
- 目的 :探讨野生型及点变异型牙龈卟啉单胞菌FtsZs体外聚合的特性。方法 :将质粒 pEZ1(携带野生型PgFtsZ基因的质粒 )、pYW 7(ZA32 0H ,携带野生型PgFtsZ第 32 0位的丙氨酸由组氨酸取代的点变异型PgFtsZ基因的质粒 )和 pYW 8(ZA32 0R ,携带野生型PgFtsZ第 32 0位的丙氨酸由精氨酸取代的点变异型PgFtsZ基因的质粒 )导入EscherichiacoliBL2 1(DE3)pLysS中 ,通过IPTG诱导表达目的蛋白质 ,6mol/L尿素变性及HiTrapSP层析柱纯化目的蛋白质 ,最后通过沉淀法检测FtsZ体外聚合的特性。结果 :仅 10mmol/LMgCl2 就能诱导野生型PgFtsZ、ZA32 0H和ZA32 0R的体外聚合 ,而与添加的GTP无关。结论 :野生型PgFtsZ体外聚合完全不同与E .coliFtsZ绝对依赖于GTP的特性 ,ZA32 0H和ZA32 0R体外聚合特性与野生型PgFtsZ相同 ,表明PgFtsZ的第 32 0位的丙氨酸与其体外聚合功能无关。
- 于维先胡小春毕文翔
- 关键词：体外变异型野生型牙龈卟啉单胞菌质粒IPTG
