浙江省科技攻关计划(2006C12021)
- 作品数：2 被引量：19H指数：2
- 相关作者：周继勇郭军庆马益萍蔡月琴申会刚更多>>
- 相关机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：14
- 2007年
- 为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的核蛋白再经Ni2+-NTA亲和层析纯化。结果显示,核蛋白在pET-32a(+)中的表达量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的表达量(19.4%),培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13.6和8.45 mg/L。经Western-blotting检测,不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别,表明核蛋白具有良好的反应原性。
- 蔡月琴马益萍申会刚郭军庆周继勇
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白蛋白纯化
- 狂犬病病毒核蛋白在Bac-To-Bac/AcMNPV杆状病毒系统的表达被引量：6
- 2010年
- 为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重组杆状病毒。SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光对表达的蛋白进行鉴定和反应原性分析。分别以重组杆状病毒表达的核蛋白、原核表达核蛋白为包被抗原进行ELISA检测。结果表明,在昆虫细胞中表达的狂犬病病毒重组核蛋白能与鼠抗RV核蛋白单克隆抗体和RV阳性血清特异性结合,其相对分子量约为50.5ku。以重组杆状病毒表达的核蛋白为抗原建立的rNP-ELISA的敏感性、特异性、符合率分别为86.36%,89.83%,90.00%,优于大肠杆菌表达的RV核蛋白。说明杆状病毒系统表达的核蛋白是建立RV核蛋白ELISA抗体检测方法的理想抗原。
- 尹伟徐洁萍张金阳颜焰周继勇
- 关键词：核蛋白基因
