长江学者和创新团队发展计划(IRT0731)
- 作品数：49 被引量：132H指数：6
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- 细胞信号转导的组学研究策略
- 细胞信号系统(cell signaling system)控制着细胞的代谢、增生、分化、迁移、细胞凋亡、炎症反应和应激适应等功能活动。在真核细胞,各种细胞过程往往并非单个信号转导分子或单一信号通路就能完成的,而是受到多个...
- 姜勇
- 关键词：蛋白质组学信号转导网络蛋白质-蛋白质相互作用质谱分析
- 文献传递
- p38信号通路对SETD4在细胞中的表达和定位的影响被引量：6
- 2012年
- 目的:观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO2)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO2诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路。方法:用Western blotting检测SETD4在不同细胞中蛋白的表达情况,用细胞免疫荧光技术检测SETD4在细胞中的定位;用NaAsO2刺激p38+/+和p38-/-细胞,分别收集细胞总蛋白检测SETD4蛋白的表达变化,同时观察SETD4的定位和移位改变。结果:SETD4蛋白无论在鼠源还是人源的细胞中均有表达;细胞免疫荧光结果显示SETD4在整个细胞中分布,以胞质较多;p38+/+和p38-/-细胞受NaAsO2刺激后其SETD4蛋白的表达趋势一致,即均在6 h时有明显减少;p38+/+细胞受NaAsO2刺激后SETD4蛋白从胞质向胞核移位,而p38-/-细胞SETD4的移位现象不明显。结论:SETD4蛋白在不同种属及组织来源的细胞中均有表达,表现为全细胞分布,以胞质为主;NaAsO2刺激可影响细胞SETD4蛋白的表达水平及定位,NaAsO2诱导的SETD4移位改变有赖于p38 MAPK介导的信号通路。
- 叶萍蔡军伟付晓霞崔航刘亚伟陈小欢罗海华李煜生刘芸姜勇刘靖华
- 关键词：亚砷酸钠P38MAPK通路
- p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂研究进展被引量：18
- 2009年
- p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路是细胞内应激反应信号通路,与炎症反应密切相关。炎症反应失控是很多疾病产生的重要原因之一,传统抗炎药物的严重副作用使得寻找强效、安全的抗炎药物极为迫切。通过抑制剂调节信号通路的炎症药物研发成为目前发展的趋势,而p38MAPK的中心地位使其成为首选靶点。p38MAPK抑制剂和p38MAPK的研究进展相辅相成,发展迅速。已报道的100多种不同化学结构的p38MAPK特异性抑制剂中已有20多种进入临床试验阶段,但至今尚没有一种化合物被批准应用于临床治疗。我们讨论了p38MAPK抑制剂的研究现状和研究策略。
- 王国军刘亚伟李玉花姜勇
- 关键词：炎症
- 串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨
- 2009年
- 目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF。利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化。结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0.5ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达。
- 刘芸邓鹏刘铮徐佳吴向玲姜勇
- 关键词：高迁移率族蛋白B1
- RelA/p65的翻译后修饰及其对NF-κB转录活性的影响被引量：16
- 2012年
- RelA/p65是NF-κB的一个亚单位,其翻译后修饰能够精细地调控NF-κB的转录激活,并在炎症反应及炎症反应相关疾病的发生和发展过程中发挥重要的作用.RelA的翻译后修饰主要包括磷酸化、乙酰化、甲基化以及泛素化等.这些翻译后修饰不仅能在生理和病理的条件下有效地调控NF-κB的转录激活,彼此之间还存在着复杂的相互作用,一种翻译后修饰可以使另一种修饰增强或是抑制,从而综合而完善地调控NF-κB的转录活性.本文就近年来RelA的翻译后修饰及这些修饰之间的相互作用对NF-κB信号通路影响的最新研究进展进行综述.
- 李毅斌蔡军伟刘靖华
- 关键词：核因子ΚBRELAP65翻译后修饰
- 转甲状腺素蛋白真核表达载体的构建及其细胞内定位被引量：3
- 2009年
- 目的构建转甲状腺素蛋白(TTR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到TTR编码序列,将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒pcDNA3-TTR-HA。重组质粒通过PCR、酶切测序等证明构建正确后经脂质体转染NIH3T3细胞,固定并染色后通过荧光显微镜观察该融合蛋白的表达及定位。结果重组质粒经鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要分布在细胞质中。结论成功构建带HA标签的TTR真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为深入研究TTR在细胞内的相关生物学功能奠定了基础。
- 胡水旺孙明晶夏高晓陈丽赵明哲姜勇
- 关键词：前白蛋白基因表达
- 丝裂原活化的蛋白激酶在高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放炎性细胞因子中的作用被引量：5
- 2009年
- 目的研究重组人高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导内皮细胞释放趋化因子白介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的规律及其与脂多糖(LPS)的协同作用;探讨丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路在上述作用中的地位。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测不同浓度重组HMGB1(0~75ng/ml),或者HMGB1(15ng/ml)刺激后不同时间点人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌IL-8、MCP-1的水平变化以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激后IL-8、MCP-1的水平变化;探讨MAPK信号通路在HMGB1诱导内皮细胞释放趋化因子中的作用时首先加入抑制剂SB203580(20mol/L)、PD98059(20mol/L)和JNKinhibitorII(50nmol/L)预处理细胞1h,再加入HMGB1和LPS刺激。结果在HMGB1蛋白刺激后3~6h,IL-8和MCP-1水平开始增加,12~24h持续增高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-8和MCP-1水平也明显升高,与基础值相比差异有统计学意义(P<0.01)。如果用LPS(10ng/ml)和...
- 钟田雨唐靖刘亚伟李志杰陈登宇赵明哲王蔚刘靖华姜勇
- 关键词：白介素-8单核细胞趋化蛋白-1人脐静脉内皮细胞
- 过氧化物氧还蛋白家族的功能及调节机制被引量：12
- 2010年
- 过氧化物氧还蛋白(peroxiredoxin,Prx)家族是细胞中一类高丰度蛋白质,作为过氧化物酶对维持体内过氧化氢水平发挥着重要的作用,并且通过调控蛋白激酶的氧化还原状态参与细胞信号转导调控过程。Prx家族根据其参与催化反应的半胱氨酸残基数目分为典型双半胱氨酸型(2-Cys)、非典型双半胱氨酸型(atypical 2-Cys)和单半胱氨酸型(1-Cys)。Prx的活性受到寡聚化状态、磷酸化以及蛋白质水解的调控。
- 王蔚祁婷婷刘芸李玉花姜勇
- 关键词：过氧化物酶过氧化氢细胞信号转导氧化应激
- 细胞氧化应激过程中MK2调控磷酸化蛋白的鉴定
- 目的:氧化应激反应（oxidative stress response）是当细胞内的活性氧簇水平高于细胞的抗氧化能力时产生的适应性反应。在真核细胞中,应激激活的蛋白激酶（stress-activated protein ...
- 王蔚刘芸康瑞霞陈丽夏高晓邓鹏姜勇
- 关键词：活性氧簇磷酸化蛋白DIGE
- 文献传递
- 两种细胞系中内源性C-反应蛋白的表达和定位分析
- 2008年
- 目的观察在不同刺激条件下,不同组织来源细胞系中内源性C-反应蛋白(CRP)的表达及定位情况。方法培养人单核细胞系THP-1和人肝细胞系LO2,用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞;使用内毒素(LPS)对两种细胞进行刺激,同时收集LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清加入到LO2细胞的培养液中进行孵育,运用Western blot和免疫细胞化学技术检测上述刺激条件下CRP在两种细胞中的表达及其定位情况。结果Western blot检测表明,在未受到刺激时,两种细胞的裂解物中均检测到一定量的CRP,在细胞培养液上清中没有检测到;受到LPS刺激后,THP-1细胞内的CRP表达增加,且在培养液上清中也检测到少量的CRP,但对于LO2细胞,刺激前后CRP的表达和分泌没有明显变化;当用LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清处理LO2细胞后,在LO2的细胞裂解物和培养液上清中均检测到CRP。免疫细胞化学检测结果显示,整个THP-1细胞中均可检测到标记的CRP的荧光信号,其中以核内的最明显,LPS刺激可以增加该蛋白的表达,使其核定位更加明显;在LO2细胞中,CRP定位于核外,LPS刺激对其表达和定位没有明显影响,而给予LPS刺激的THP-1细胞培养液上清处理后,LO2细胞中标记CRP的荧光信号增强,尤其以细胞膜上的增强明显。结论LPS不能直接上调肝细胞LO2内的CRP表达,却可以诱导THP-1表达分泌某些细胞因子来增加CRP的合成分泌;CRP在肝细胞系LO2和单核-巨噬细胞系THP-1中的定位有明显不同,在LO2中主要表现为分泌型蛋白的定位特征,而在THP-1细胞中却有明显的核定位表现。
- 陈腾祥李红梅胡水旺杨婷刘亚伟刘靖华姜勇
- 关键词：C-反应蛋白蛋白定位单核细胞佛波酯
