广西壮族自治区自然科学基金(2010GXNSFD013048)
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 相关作者：黄天明罗国容莫发荣晁耐霞赵飞兰更多>>
- 相关机构：广西医科大学广西中医学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西中医学院课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>
- Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏树突状细胞对T细胞分化格局的改变
- 2011年
- 背景:Kinectin作为树突状细胞瘤苗可运用于肝癌临床免疫治疗。目的:检测kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞刺激T细胞亚群的分化情况。方法:运用免疫组化法检测kinectin-麦芽糖结合蛋白孵育的树突状细胞刺激增殖的T细胞中CD4+、CD8+T细胞亚群活化情况,同时设立麦芽糖结合蛋白组、非致敏树突状细胞组及普通培养T细胞组作为比较。结果与结论:Kinectin-麦芽糖结合蛋白致敏树突状细胞刺激的T细胞组CD8+T细胞明显高于麦芽糖结合蛋白孵育树突状细胞刺激的T细胞组、非致敏树突状细胞刺激组及普通培养T细胞组(P<0.05);各组CD4值之间、CD4/CD8值之间比较,差异无显著性意义(P>0.05)。经Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞能有效刺激自体CD8+T淋巴细胞的增殖,Kinectin-麦芽糖结合蛋白作为肝癌相关抗原可通过致敏树突状细胞发挥较明显的抗肿瘤功能。
- 赵飞兰晁耐霞李日伦曾庆堂黄天明莫发荣肖飞罗国容
- 关键词：树突状细胞T细胞亚群CD8
- 重组Kinectin蛋白的表达、纯化及应用研究被引量：1
- 2012年
- 目的优化重组kinectin蛋白的诱导表达及纯化条件;探讨用其致敏的树突状细胞(DC)对自体T淋巴细胞增殖能力的影响。方法以pMAL-C2为载体构建重组质粒,并转入TB1宿主菌。从IPTG加入时机、诱导温度、诱导时间及IPTG浓度方面对工程菌的诱导条件进行优化;过Amylose-resin亲和层析柱对诱导产物进行分离纯化。用获取的MBP-kinectin融合蛋白致敏从人外周血中分离培养的DC,并用ELISA检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ含量;再用MTT法检测致敏DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。结果 工程菌在37℃振荡培养2个小时后加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG,降低温度到34℃继续诱导3个小时,可明显提高诱导效率;所得MBP-kinectin与DC共培养上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,用其刺激的T淋巴细胞增殖指数为53.14±0.62,均高于麦芽糖结合蛋白(MBP)组和空白对照组,且差异有统计学意义。结论pMAL-C2载体可用于构建kinectin重组质粒;通过对诱导条件的优化,可获得较高的诱导效率;所得MBP-kinectin融合蛋白能致敏DC并具有很强的刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。
- 黄天明赵飞兰莫发荣晁耐霞谢小薰罗国容
- 关键词：肿瘤相关抗原KINECTIN重组蛋白树突状细胞
- 肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体制备、鉴定及初步应用被引量：5
- 2011年
- 目的制备本课题组报告的肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法以本课题组前期构建的人MBP-Kinectin融合片段重组质粒为基础,原核表达和亲和层析大量纯化MBP-Kinectin融合蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体;用间接ELISA法测定抗体效价,用Western blot鉴定抗体的特异性。同时用Kinectin多克隆抗体检测Kinectin在正常成人肝细胞HL-7702和人肝癌细胞株SMMC-7721内的表达。结果通过免疫新西兰兔获得抗Kinectin抗体,ELISA测定纯化的Kinectin抗体效价最高为1∶12 800,Western blot结果显示Kinectin抗体具有较好的特异性。免疫细胞化学和western blot检测发现Kinectin蛋白在肝癌细胞株内的表达显著高于正常成人肝细胞株。结论制备的抗Kinectin抗体具有较高的效价和特异性,能满足Western blot和免疫细胞化学检测Kinectin蛋白的要求,为进一步深入研究Kinectin在肝癌发生发展中的作用奠定基础。
- 晁耐霞肖飞蒋日婷黄天明赵飞兰曾庆堂李日伦谢小薰罗国容
- 关键词：多克隆抗体肝细胞癌肿瘤相关抗原KINECTIN
- 动力素kinectin基因mRNA在7404肝癌细胞株的表达及意义
- 2012年
- 目的研究动力素作为肝癌相关抗原其在肝癌细胞株中的表达情况,评价其作为分子肿瘤标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。方法运用RT-PCR技术检测国内建株的肝癌细胞株BEL-7404 kinectin基因(D2剪接区)mR-NA的表达,并与肝癌组织、相应癌旁肝组织、正常肝组织比较。结果肝癌细胞株BEL-7404中kinectin基因(D2选择剪接区)呈强阳性表达,肝癌组织中也呈较强的阳性表达,癌旁肝组织则表达呈弱阳性。结论 kinectin基因可作为肝癌诊断的辅助分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。
- 赵飞兰晁耐霞李日伦黄天明罗国容
- 关键词：RT-PCR技术
- 恶性肿瘤的帮凶——纤维母细胞活化蛋白被引量：2
- 2013年
- 成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)是一种丝氨酸蛋白酶,主要由活化的成纤维细胞分泌,广泛存在于上皮来源的恶性肿瘤中,与恶性肿瘤的侵袭和转移、血管形成、免疫逃逸等密切相关。综述FAP的结构和功能、在恶性肿瘤中的表达情况、与恶性肿瘤的关系及在恶性肿瘤诊断与治疗中的应用,并对FAP在肿瘤诊治中的应用前景进行展望。
- 黄天明莫发荣罗国容
- 关键词：成纤维细胞活化蛋白恶性肿瘤微环境
- 肝癌相关抗原Kinectin蛋白致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株杀伤作用的检测被引量：2
- 2011年
- 目的探讨肝癌相关抗原Kinectin基因重组蛋白Kinectin-MBP(MBP,麦芽糖结合蛋白)致敏树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株的杀伤作用。方法体外基因工程的方法表达、纯化Kinectin-MBP。从正常人外周血中分离单个核细胞(PBMC),重组人粒细胞-巨噬细胞集落因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DCs,并通过形态学、流式细胞术鉴定DCs。DCs经Kinectin-MBP致敏后,ELISA检测细胞上清液中IL-12和IFN-γ的含量;将致敏DCs与自体T淋巴细胞混合培养后,MTT法检测T细胞增殖的能力;同时诱导T细胞增殖转化为CTL,以此CTL为效应细胞,Kinectin表达阳性的肝癌细胞株bel-7404为靶细胞,LDH 4 h释放法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。结果体外重组蛋白技术成功表达、纯化出Kinectin-MBP。PBMC经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导,可成功培养出DCs。DCs经Kinectin-MBP致敏后上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量明显增高,且刺激自体T细胞增殖的能力也显著增强;同时Kinectin-MBP致敏的DCs能明显诱导CTL的增殖,此CTL对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株有较明显的杀伤作用,其杀伤率在效靶比为25∶1时达最高峰[为(65.00±1.47)%],显著高于其他对照组(均P<0.001)。结论体外诱导扩增的DCs经肝癌相关抗原Kinectin-MBP致敏后具有较强的刺激自体T细胞增殖的能力,且在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株具有较强的杀伤效应。该实验为将Kinectin蛋白运用于以DCs为基础的肝癌临床免疫治疗奠定了基础。
- 赵飞兰晁耐霞李日伦莫发荣黄天明肖飞谢小薰罗国容
- 关键词：CTL
- 一款多功能可控滚轮运动器的设计与实现
- 2013年
- 基于AT89S52设计了一款多功能可控滚轮运动器。该运动器可进行可测量的主动运动和可控的被动运动;还具备了带自我保护的电刺激功能,可用于耐力测试及过度运动损伤测试;无线传输模块还可实现电脑的实时监控和即时数据保存。本系统经小鼠测试,功能一切正常,在医学、体育、动物学等实验领域可能会有广泛的应用前景。
- 黄天明莫发荣罗国容
- 关键词：单片机电刺激
- 肿瘤相关抗原GC结合因子2 shRNA表达载体的构建及鉴定
- 2013年
- GC结合因子2（GC-binding factor 2, GCF2）是一种转录抑制因子, 因为能与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因启动子上富含GC的序列结合而得名。研究表明, GCF2可通过多种途径参与细胞增殖、 细胞周期调控及细胞凋亡等进程。GCF2广泛地高表达于肺癌A549细胞、 胃腺瘤AGS细胞及白血病K562细胞等人类多种肿瘤细胞, 并且发现GCF2在这些细胞中的高表达与肿瘤细胞增殖、 侵袭及肿瘤耐药等密切相关。RNA干扰（RNA interence, RNAi）可特异性地阻断靶基因表达, 是研究基因功能的有效技术。我们的前期研究表明, GCF2是一种肿瘤相关抗原, 在HepG2等肝癌细胞株中高表达[8]。本实验设计针对GCF2 mRNA的干扰序列, 并且与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo重组而构建重组质粒pGPU6/GFP/Neo-GCF2, 经酶切和测序鉴定后, 将该重组质粒转染肝癌细胞株HepG2, 以实现对GCF2表达的抑制, 为进一步研究GCF2对肝癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制奠定基础。
- 李金平晁耐霞蒋日婷马平陈德凤陈力吴博黄天明莫发荣罗国容
- 关键词：肝细胞癌质粒
- 肝细胞癌分子标志物研究的探讨
- 2013年
- 肝细胞癌(HCC)分子标志物的筛查和评价是一项重要而庞大的工程,需要大量的病例积累及各个实验室的通力合作。然而,由于对HCC的认识不足及标志物检测、评价方法的差异造成了各实验室数据交流及病例共享的极大障碍。对HCC标志物筛查及评价中常见的一些问题进行了探讨并提出建议,以期引起研究者对肿瘤标志研究规范化问题的重视。
- 黄天明罗国容莫发荣
- 关键词：肝细胞癌肿瘤标志物
