福建省科技计划重点项目(2010Y0023)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：林建华吴朝阳赖建明林文平许胜贵更多>>
- 相关机构：福建医科大学福建中医药大学更多>>
- 发文基金：福建省科技计划重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石仿生支架材料的制备及其生物相容性检测被引量：9
- 2012年
- 目的制备胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石(collagen-chitosan/nano-hydroxyapatite-collagen-polylactic acid,Col-CS/nHAC-PLA)仿生支架材料,检测生物相容性,为其在骨软骨缺损修复中的应用奠定基础。方法以1,4二氧六环为溶剂,按8%质量浓度加入PLA和等量nHAC溶解,制备nHAC-PLA;用2%醋酸溶液配制浓度为2%的CS纯溶液及1%的Col纯溶液,以质量比(M/M)20∶1混合,倒入含nHAC-PLA的模具中,冷冻干燥成形制备Col-CS/nHAC-PLA仿生支架。行急性全身毒性实验、皮内刺激实验、热源实验、溶血实验、体外细胞毒实验、骨植入实验,评价其生物相容性。结果 Col-CS/nHAC-PLA仿生支架无急性全身毒性;皮内刺激实验示原发刺激指数为0分,为极轻微刺激;热原实验示3只实验动物体温升高均<0.6℃,体温升高总和<1.3℃,符合规定标准;溶血实验示平均溶血率为1.38%,符合≤5%标准。体外细胞毒性实验示材料浸提液不影响兔BMSCs增殖,毒性分级为Ⅰ级。骨植入实验显示支架材料与周边组织相容性好。结论 Col-CS/nHAC-PLA仿生支架材料具有良好生物相容性,有望成为较理想的组织工程骨软骨支架。
- 林建华赖建明林文平吴朝阳许胜贵
- 关键词：生物相容性
- BMP-2基因重组慢病毒载体转染猪BMSCs成骨分化研究被引量：2
- 2013年
- 目的构建BMP-2基因重组慢病毒载体,并检测其转染猪BMSCs后BMP-2表达活性及诱导BMSCs成骨分化情况,为进一步构建组织工程骨软骨奠定基础。方法取2只2月龄巴马香猪(体重约15 kg)髂骨骨髓,采用密度梯度离心法分离培养BMSCs,并传代。利用基因重组技术构建BMP-2基因重组慢病毒载体,并以感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、25、50、100、200转染第2代BMSCs,通过荧光显微镜及倒置相差显微镜观察确定最佳MOI值。以最佳MOI值感染BMSCs作为实验组,空载体转染的BMSCs(空载体组)及未转染的BMSCs(空白组)作为对照,通过RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测BMP-2 mRNA及蛋白在BMSCs中的表达,并应用ALP染色、ALP活性检测及茜素红钙结节染色检测其成骨分化情况。结果经RT-PCR基因测序鉴定BMP-2基因重组慢病毒载体构建成功,转染BMSCs后荧光显微镜下可见绿色荧光表达,且MOI值为100时为最佳表达。RT-PCR提示BMP-2基因成功转染至BMSCs中;免疫组织化学染色及Western blot检测示转染后BMSCs并可持续、稳定、高效表达BMP-2蛋白;培养后2周BMSCs可见ALP表达及钙结节形成。结论成功构建BMP-2基因重组慢病毒载体并转染猪BMSCs,BMP-2基因转染入BMSCs后能持续、稳定、高效表达BMP-2基因和蛋白,并成功诱导BMSCs向成骨细胞分化。
- 许胜贵林建华刘蔚楠吴朝阳
- 关键词：BMSCSBMP-2慢病毒载体
- 猪TGF-β_1基因重组慢病毒载体的构建及其在BMSCs中的表达被引量：4
- 2012年
- 目的构建猪TGF-β1重组慢病毒表达载体,并转染BMSCs,为构建组织工程骨软骨提供TGF-β1修饰的BMSCs,作为持续、高效的种子细胞。方法将已获取的目的基因TGF-β1cDNA包装至慢病毒载体中,通过PCR及基因测序对阳性克隆进行鉴定,并测定病毒滴度。取2月龄巴马香猪(体重约15 kg)骨髓制备BMSCs,取第2～3代用于实验。用TGF-β1重组慢病毒载体以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10、50、70、100、150分别转染BMSCs,通过激光共聚焦显微镜观察,并以Western blot检测不同MOI值的转染效果,确定最佳MOI值。用TGF-β1重组慢病毒载体以最佳MOI值感染BMSCs作为实验组,以空载体转染的BMSCs(空载体组)及未转染的BMSCs(空白组)作为对照,通过RT-PCR、免疫细胞化学染色、ELISA等方法检测TGF-β1基因及蛋白在BMSCs中的表达情况,并检测Ⅱ型胶原表达情况。结果经PCR及基因测序鉴定TGF-β1重组慢病毒表达载体构建成功,并成功转染BMSCs,激光共聚焦显微镜下可观察到强绿色荧光;Western blot示MOI为70时转染效果最佳;RT-PCR示实验组TGF-β1基因的表达量明显高于空载体组及空白组,差异有统计学意义(P<0.05);免疫细胞化学染色示实验组TGF-β1蛋白及Ⅱ型胶原呈阳性表达,而空载体组及空白组呈弱阳性或阴性表达;ELISA示实验组TGF-β1蛋白至转染后21 d仍有较高表达。结论 TGF-β1重组慢病毒表达载体可成功转染BMSCs,TGF-β1蛋白可长期、稳定表达,促使BMSCs向成软骨细胞方向分化。
- 赖建明林建华林文平吴朝阳
- 关键词：BMSCS关节软骨慢病毒载体
