国家自然科学基金(30471853) 作品数:5 被引量:24 H指数:4 相关作者: 夏晓波 熊思齐 周金子 孙伟 杨卓 更多>> 相关机构: 中南大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子干扰性RNA抑制鼠视网膜新生血管的研究 2008年 目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)小片段干扰性RNA(siRNA)对小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法本研究采用随机对照方法。构建HIF-1α siRNA重组质粒。C57BL/6J小鼠玻璃体腔注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒pEGFP-N1,1d后视网膜铺片观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达。选7天龄C57BL/6J小鼠90只,17只为正常组,73只建立氧诱导的视网膜新生血管模型,分为模型对照组、空载体组和基因治疗组(HIF1α siRNA组、VEGF siRNA组及共转染组)。于出氧舱前1d,向空载体组小鼠玻璃体腔注射空载体质粒;HIF—1α siRNA组注射HIF—1α siRNA,VEGF siRNA组注射VEGF165 siRNA,共转染组注射HIF1α siRNA+VEGF165 siRNA。采用荧光造影视网膜铺片方法观察血管形态变化;制作组织切片计算突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测视网膜HIF—1α和VEGF的表达。采用单因素方差分析和组间最小显著差法进行统计学分析。结果pEGFP-N1经脂质体LF2000介导转染视网膜细胞后1d即可见GFP表达。基因治疗组较模型对照组新生血管丛明显减少,荧光渗漏明显减轻,其中共转染组效果最明显。基因治疗组[HIF-1α siRNA组为(27.73±2.33)个,VEGF siRNA组为(15.43±3.23)个,共转染组为(8.70±2.88)个]较其他3组突破视网膜内界膜的细胞核数量减少,差异均具有统计学意义(F=3016.527,P〈0.01)。视网膜HIF-1α mRNA及蛋白表达水平:模型对照组(1.08±0.06,0.383±0.009)和空载体组(1.09±0.05,0.386±0.010)较正常组(0.81±0.07,0.035±0.003)上调,而HIF-1α siRNA组(0.46±0.06,0.182±0.008)较模型对照组下调,抑制效率分别为57.4%和52.5%,差异均有统计学意义(F=139.804,2686.001;P〈0.01)。VEGF mRNA及蛋白� 蒋剑 夏晓波 许惠卓 熊宇 宋伟涛 熊思齐 李岩关键词:视网膜新生血管化 核蛋白质类 DNA结合蛋白质类 兔角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系 被引量:7 2007年 目的:研究碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)的表达与角膜新生血管的关系。方法:普通家兔25只碱烧伤诱导角膜新生血管模型。碱烧伤后不同时间(1,3,5,7,14d)形态学分析来评价角膜新生血管的情况,免疫组化评价角膜VEGF的表达。结果:角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始升高,伤后5d达高峰(阳性表达最强,遍布全层),伤后7dVEGF的表达开始下降,14d后显著下降。碱烧伤后,角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。结论:碱烧伤后兔角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性,并在其中发挥了重要作用。 周金子 夏晓波 杨卓 熊思齐 孙伟关键词:血管内皮生长因子 角膜新生血管化 碱烧伤 VEGF siRNA对兔眼碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用 被引量:4 2007年 目的:研究血管内皮生长因子小干扰RNA(VEGF small in-terfering RNA,VEGF siRNA)对兔眼碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用。方法:普通家兔25只以碱烧伤法(1mol/LNaOH溶液)诱导角膜新生血管(CNV)生成。碱烧伤后立即以脂质体(LF2000)为载体,右眼球结膜下注射VEGF siRNA重组质粒,左眼球结膜下注射pSilencer 2.1-U6 hygro空白质粒作为阴性对照。碱烧伤后1,3,5,7,14d,形态学分析评价角膜新生血管的生长情况。结果:与对照眼相比,碱烧伤后球结膜下注射VEGF siRNA重组质粒,实验眼在各时间段(3,5,7,14d),CNV长度明显变短,面积明显变小,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VEGF siRNA能有效地抑制碱烧伤后CNV的形成。 周金子 夏晓波 杨卓 熊思齐 孙伟关键词:角膜 新生血管 HIF-1α干扰RNA抑制早产儿视网膜病小鼠模型视网膜新生血管形成的研究 被引量:5 2011年 目的探讨特异性抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达对早产儿视网膜病变(retinopathy of pre-maturity,ROP)小鼠模型视网膜新生血管的抑制作用。方法新生C57BL/6J小鼠48只,随机分为实验组和对照组(每组24只),采用Smith方法制备ROP模型。生后12 d时实验组玻璃体腔注射HIF-1α特异性小片段干扰RNA表达载体pSUPERH1-siHIF-1α,同时对照组玻璃体注射空载体。Western blot检测两组小鼠视网膜HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,FITC-Dextran荧光照影视网膜铺片和组织切片观察两组小鼠视网膜新生血管和新生血管内皮细胞核数目的差异。结果实验组小鼠HIF-1α和VEGF的表达较对照组明显下降(P<0.01);实验组突破视网膜内界膜血管内皮细胞核数较对照组明显减少(P<0.01)。结论特异性抑制HIF-1α能有效抑制ROP视网膜新生血管的形成。 许惠卓 刘双珍 熊思齐 夏晓波关键词:缺氧诱导因子1Α 早产儿视网膜病变 视网膜新生血管 VEGF siRNA对兔眼碱烧伤后角膜VEGF表达的作用 被引量:9 2008年 目的研究血管内皮生长因子(VEGF)小干扰RNA(VEGF siRNA)对兔眼碱烧伤后角膜VEGF表达的调控作用。方法25只普通家兔以碱烧伤法(1mol/LNaOH溶液)诱导角膜新生血管(CNV)。碱烧伤后立即以脂质体(LF2000)为载体,右眼球结膜下注射VEGF siRNA重组质粒,左眼球结膜下注射pSilencer2.1-U6 hygro空白质粒作为对照。碱烧伤后1、3、5、7、14d,RT-PCR法检测角膜组织中VEGF mRNA的表达,免疫组织化学法检测角膜组织中VEGF蛋白的表达。结果与对照眼相比,实验组在各时间段RT-PCR结果显示角膜组织中VEGF mRNA的表达明显下调,免疫组织化学结果显示角膜组织中VEGF蛋白的表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VEGF siRNA能有效地抑制兔眼碱烧伤后角膜组织中VEGF mRNA及蛋白的表达。 周金子 夏晓波 熊思齐 孙伟关键词:角膜新生血管