国家自然科学基金(30471865)
- 作品数：16 被引量：57H指数：5
- 相关作者：洪晶庞东渤孙昱昭孙兆义顾绍峰更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院北京大学第三医院辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金沈阳市科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bcl-2及bFGF在维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡中的表达被引量：6
- 2005年
- 目的探讨维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的凋亡作用,观察凋亡过程中原癌基因蛋白质(Bcl2)和碱性成纤维细胞生长因子(baic fibroblast growth factor,bFGF)的表达变化。方法应用80mg·L-1Ver作用于体外培养的人RPE细胞12h、24h、48h,吖啶橙(acridineorange,AO)荧光染色及透射电镜观察RPE细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Bcl2mRNA和bFGFmRNA表达变化。结果经Ver作用的体外培养的人RPE细胞具有典型的凋亡形态学特征:核染色质浓染、边集;细胞体积缩小。同时RPE细胞Bcl2mRNA表达下降;而bFGFmRNA表达随着作用时间延长,呈增高趋势。结论Ver可诱导体外培养人RPE细胞凋亡,凋亡过程中Bcl2表达逐渐下降,而bFGF表达增强。
- 庞东渤洪晶
- 关键词：维拉帕米色素上皮细胞细胞凋亡
- 慢性结膜炎患者泪液中腺病毒与单纯疱疹病毒的检测被引量：6
- 2010年
- 目的探讨慢性结膜炎患者泪液标本中腺病毒和单纯疱疹病毒的表达情况。方法实验研究。2008年11月至2009年6月期间，在北京大学第三医院、北京大学眼科中心门诊采集81例临床确诊为慢性结膜炎（成人组66例、儿童组15例）、9例急性病毒性结膜炎及30例健康者的双眼泪液标本，采用聚合酶链反应（PCR）法特异性检测腺病毒及单纯疱疹病毒核酸的存在情况，并对PCR阳性结果结合临床症状和体征进行分析。采用两个样本例数的卡方检验。结果在慢性结膜炎患者中，腺病毒阳性率为32．1％（26／81），单纯疱疹病毒阳性率为30．9％（25／81）。在慢性结膜炎的儿童组患者中腺病毒阳性率为33．3％（5／15），单纯疱疹病毒阳性率为13．3％（2／15）。成人组中腺病毒的阳性率为31．8％（21／66），单纯疱疹病毒阳性率为34．8％（23／66）。在既往有急性结膜炎病史的患者中腺病毒的阳性率为61．5％（16／26），与既往无急性结膜炎病史的患者比较，差异有统计学意义（x^2=16．884，P〈0．01）。单纯疱疹病毒阳性率为42．3％（11／26），与既往无急性结膜炎病史的患者比较，差异有统计学意义（x^2=5．351，P=0．021）。正常阴性对照组病毒检测阳性率均为0％（0／30），阳性对照组即急性病毒性结膜炎组腺病毒阳性率为100．0％（9／9）。81例慢性结膜炎患者中腺病毒和（或）单纯疱疹病毒阳性者为37例。病毒检测阳性的患者中64．9％（24／37）的患者出现眼红症状，56．8％（21／37）的患者出现眼痒症状，32．4％（12／37）的患者兼有眼红和眼痒，73．0％（27／37）的患者临床体征表现有下睑滤泡。结论慢性结膜炎患者中腺病毒和单纯疱疹病毒的表达占有相当的比例，既往有明确感染史的患者病毒阳性率明显高于无既往感染史患者。
- 靳瑛洪晶
- 关键词：腺病毒科单纯疱疹病毒属
- 视网膜下液致视网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞增殖过程中PKC活性的变化(英文)
- 2006年
- 目的:研究视网膜下液(SRF)能否引起体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)和神经胶质(RG)细胞发生增殖及在其增殖过程中是否出现蛋白激酶 C 的激活和转位, 来探讨RPE 和 RG 细胞增殖与其细胞中 PKC 信号系统变化的关系以及 PKC 抑制剂的作用。方法:实验对象为体外培养的 RPE 和 RG 细胞;刺激因素为提取 PVR 分级是 B、C 级两级患者的 SRF 和来自角膜移植后的供体眼球所提供的正常玻璃体成分;PKC 特异激活剂佛波酯(PMA)为阳性对照;DMEM 培养液作为空白对照。用 3H- 胸腺嘧啶脱氧核苷(3H- TdR)掺入法测定各自的RPE 和 RG 细胞增殖情况。用 B、C 级 SRF、正常玻璃体成分、PMA、DMEM 培养液分别在不同的时间刺激 RPE 和 RG细胞, 通过细胞裂解和离心获取细胞质和细胞膜蛋白粗提液,用同位素 32P 标记和液体闪烁计数法检测细胞质和细胞膜 PKC 活性水平。选用 PKC 抑制剂地喹氯铵预处理各组细胞后,再分别观察各组 RPE 和 RG 细胞中 PKC 活性表达水平及增殖情况。结果:用 B、C 级 SRF 和 PMA 处理过的 RPE 细胞出现高增殖;SRF 和 PMA 都可以激活 RPE 和 RG 细胞质中的 PKC,并使其由胞质向胞膜转位,但 SRF 作用于 RPE 和 RG 细胞时,胞膜上 PKC 活性峰值出现的时间较 PMA 明显延长。其中,B 级 SRF 作用于 RPE 和 RG 细胞时,胞膜上 PKC 活性峰值出现的时间较 C 级长且峰值低,增殖程度也低;正常玻璃体成分和 DMEM 培养液组没有出现 PKC 活性变化和高增殖。用 PKC 特异抑制剂预处理各组细胞后,没有出现PKC 活性和细胞增殖的改变,组间无显著性差异,P>0.05。结论:SRF 可促进 RPE 和 RG 细胞增殖,RPE 和 RG 细胞中的 PKC 是以激活和转位方式参与细胞增殖的过程;使用PKC 特异抑制剂可阻止此过程发生。
- 孙兆义洪晶
- 关键词：视网膜下液视网膜色素上皮细胞神经胶质细胞增殖
- 细胞内Ca^2＋及MERTK基因在人视网膜色素上皮细胞吞噬功能中的作用
- 2009年
- 目的观察细胞内Ca^2＋及MERTK基因在人视网膜色素上皮（RPE）细胞的吞噬功能中所起的作用及二者的相互关系。方法用视细胞外节膜盘（ROS）于37℃孵育培养的RPE细胞，在孵育不同终止吞噬反应。双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学；钙离子荧光探针负载法在荧光显微镜下测定RPE细胞内Ca^2＋的变化；半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测相应时间点MERTK基因表达的变化及施加Ca^2＋激活剂（A23187载体）或拮抗剂（verapamile）后MERTK基因表达的变化。结果RPE细胞与ROS孵育过程中，ROS结合于RPE细胞表面发生在15min时，RPE细胞吞噬ROS在24h时达到饱和。细胞内Ca^2＋在孵育15min时升高，并在24h内保持高水平；MERTK基因表达在RPE细胞与ROS孵育5min时增强，并在全部孵育过程中呈现出高表达状态；以A23187载体开放钙通道升高RPE细胞内Ca^2＋后，MERTK基因信使核糖核酸（mRNA）水平升高，并呈剂量依赖性。经A23187预处理后的孵育实验中所检测到的MERTK mRNA水平除3h这一时间点外均高于对照组；verapamile拮抗RPE细胞内Ca^2＋后，MERTK基因表达明显下降并呈剂量依赖性；以verapamile预处理后继续与ROS孵育，所检测到的MERTK基因在24h内均低于对照组。结论MERTK基因及细胞内Ca^2＋发挥着维持RPE细胞吞噬过程的重要作用，MERTK作为上游调控信号启动下游的细胞内Ca^2＋信号来维持RPE细胞对ROS的摄入过程。
- 孙昱昭洪晶安刚
- 关键词：CA^2+
- 视网膜下液致视网膜色素上皮细胞增殖过程中蛋白激酶C活性的变化被引量：1
- 2006年
- 目的探讨视网膜下液(SRF)能否引起体外培养的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖及在其增殖过程中是否出现蛋白激酶C(PKC)的激活和转位,进一步明确RPE细胞增殖与RPE细胞中PKC信号系统变化的关系及PKC抑制剂的作用。方法实验对象为体外培养的RPE细胞;刺激因素为提取的增生性玻璃体视网膜病变(PVR)为B、C级患者的SRF和来自角膜移植后的供体眼球所提供的正常玻璃体成分;PKC特异激活剂佛波酯(PMA)为阳性对照;DMEM培养液作为空白对照。用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法测定各自的RPE细胞增殖情况。用B、C级SRF、正常玻璃体成分、PMA、DMEM培养液分别在不同的时间刺激RPE细胞,通过细胞裂解和离心获取细胞质和细胞膜蛋白粗提液,用同位素32P标记和液体闪烁计数法检测细胞质和细胞膜PKC活性水平。选用PKC特异抑制剂N,N-二甲基鞘氨醇预处理各组细胞后,再分别观察各组RPE细胞中PKC活性表达水平及增殖情况。结果用B、C级SRF和PMA处理过的RPE细胞出现高增殖;SRF和PMA都可以激活RPE细胞质中的PKC,并使其由胞质向胞膜转位,但SRF作用于RPE细胞时,胞膜上PKC活性峰值出现的时间较PMA明显延长。其中,B级SRF作用于RPE细胞时,胞膜上PKC活性峰值出现的时间较C级长且峰值低,增殖程度也低;正常玻璃体成分和DMEM培养液组未出现PKC活性变化和高增殖。用PKC特异抑制剂预处理各组细胞后,未出现PKC活性和细胞增殖的改变,组间比较差异无统计学意义(P>0．05)。结论SRF可促进RPE细胞增殖,RPE细胞中的PKC是以激活和转位方式参与细胞增殖的过程;使用PKC特异抑制剂可阻止此过程发生。
- 孙兆义洪晶
- 关键词：视网膜蛋白激酶C
- 人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中细胞内钙离子浓度的变化
- 2006年
- 安刚洪晶孙煜昭路璐许愿
- 关键词：细胞内钙离子浓度人视网膜色素上皮细胞吞噬RPE细胞视网膜疾病信号传导系统
- 角膜后弹力层剥除自动角膜刀取材内皮移植术后植片脱位的处理被引量：5
- 2010年
- 目的探讨角膜后弹力层剥除自动角膜刀取材内皮移植（Descemet’s stripping with automated endothelial keratoplasty，DSAEK）术后植片脱位的原因和处理的方法。方法回顾性研究，在接受DSAEK的48只眼中发生植片脱位的有10例患者，其中2例为晶体摘除后无晶体眼无后囊的病例、8例为人工品状体眼虹膜缺损的病例。7例患者既往有青光眼的病史。DSAEK术后应用裂隙灯显微镜和前节OCT观察植片的位置。植片复位的方法有气泡复位法和黏弹剂复位法，即将气泡或黏弹剂注入到植片的下方，将植片顶起与植床相贴。结果10例患者全部复位成功，其中2例晶体缺如但虹膜正常的患者应用气泡复位成功；另8例人工晶状体眼虹膜缺损的患者应用黏弹剂复位成功。术后早期所有患者眼压均正常，但有3例患者复位手术3周后发生眼压升高。结论DSAEK术后植片脱位是最常见的并发症，气泡复位是最常应用的方法，但对于晶体虹膜隔异常的患者，黏弹剂复位是一种有效地手段。
- 洪晶郝燕生彭荣梅马志中
- 关键词：角膜内皮移植
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的初步研究被引量：8
- 2008年
- 目的探讨在体外损伤微环境下,人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为角膜上皮细胞的可行性。方法体外分离培养人MSCs和人角膜缘干细胞(LSCs),检测细胞CD34、CD44、细胞角蛋白3(CK3)、细胞角蛋白19(CK19)的表达情况。制作人LSCs热损伤模型,加入增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记的人MSCs共同培养,2周后检测细胞CK19的表达情况。结果人MSCsCD44表达阳性、CD34表达阴性,流式细胞术显示CD44阳性率为92.59%,CD34阳性率为0.01%;人LSCsCK19表达阳性,CK3表达阴性。共同培养后部分人MSCsCK19表达阳性,并有多核细胞现象。结论在损伤微环境下,人MSCs可以转化为类角膜上皮细胞的细胞,在此过程中存在细胞融合现象。
- 顾绍峰付小兵洪晶
- 关键词：人骨髓间充质干细胞人角膜缘干细胞细胞融合
- 人孕中期胎儿结膜上皮干细胞定位特征的免疫组化研究
- 2008年
- 目的研究孕中期不同胎龄胎儿结膜上皮细胞中,角蛋白7、14、19p63和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及分布情况,探讨人胎儿结膜上皮干细胞的定位特征。方法取正常引产6h内的孕中期不同胎龄胎儿眼球前部组织,采用HE、免疫组化染色法,观察角蛋白p63和PCNA的表达及分布情况。结果PCNA及p63表达情况一致,主要表达在睑缘皮肤黏膜交界处及角膜缘上皮深层细胞。角蛋白19主要表达在穹窿部及球结膜上皮细胞。角蛋白14表达在睑缘皮肤黏膜交界处及睑结膜上皮细胞。角蛋白7表达在穹隆部至角膜缘上皮细胞。结论细胞角蛋白7、14、19和p63及PCNA在人孕中期不同胎龄的胎儿结膜上皮细胞的特征性表达表明,人孕中期胎儿结膜上皮细胞普遍具有增殖的活性,干细胞位于睑缘皮肤黏膜交界处和角膜缘上皮细胞的深层。
- 张昊洪晶
- 关键词：免疫组织化学
- 维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡及细胞内钙变化被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨钙通道拮抗剂—维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelium,hRPE)细胞凋亡诱导作用及凋亡过程中细胞内钙浓度[Ca2+]i的变化。方法:应用80mg/L的Ver作用体外培养hRPE细胞12,24及48h,采用吖叮橙(AO)荧光染色法、透射电镜、流式细胞术观察hRPE细胞凋亡;Fluo-3/AM负载技术,观察凋亡过程中细胞[Ca2+]i的变化。结果:一定浓度Ver可诱导hRPE细胞凋亡,荧光显微镜及电镜观察hRPE细胞具有早期凋亡特征:核荧光呈黄绿色,电镜下核染色质浓染、边集。流式细胞术显示,Ver作用后的hRPE细胞凋亡百分率增加(F=12.3415,P<0.05)。Ver作用的hRPE细胞内钙浓度([Ca2+]i)呈下降趋势(F=23.607,P<0.01)。结论Ver能诱导体外培养的hRPE细胞凋亡,细胞内[Ca2+]i浓度的变化可能是诱导hRPE凋亡的机制之一。
- 庞东渤洪晶
- 关键词：视网膜色素上皮细胞维拉帕米凋亡钙离子
