国家自然科学基金(30471896)
- 作品数：21 被引量：51H指数：5
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- 基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤侵袭力的关系被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metaⅡoproteinase-2,MMP-2)活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭力的关系。方法:通过MMP-2活性抑制剂Ro31-9790降低MMP-2活性进行干预处理,采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、Western印迹、体外侵袭试验、组织学和免疫组织化学等方法,观察MMP-2活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭的关系。采用SPSS10．0统计软件包对上述数据进行X^2检验和单因素方差分析。结果:Ro31-9790各处理组和对照组的生长曲线无显著差异(P＞0．05)。Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的体内、外侵袭均有显著的抑制作用(P＜0．01),并可增加Ⅳ型胶原在瘤组织的阳性表达,减少E-钙黏素在瘤组织的异常表达,同时在体内、外均不影响成釉细胞瘤细胞MMP-2的表达。结论:MMP-2活性与成釉细胞瘤的侵袭直接相关;Ro31-9790可通过降低MMP- 2活性而抑制成釉细胞瘤的侵袭:活性MMP-2可能通过调节Ⅳ型胶原及E-钙黏素的表达,影响成釉细胞瘤的侵袭。
- 张彬陶谦黄洪章潘朝斌刘习强魏菁
- 关键词：成釉细胞瘤基质金属蛋白酶-2细胞培养移植瘤肿瘤侵袭
- 基质金属蛋白酶与Ⅳ型胶原在成釉细胞瘤的表达被引量：1
- 2006年
- 目的探讨基质金属蛋白酶和Ⅳ型胶原与成釉细胞瘤复发、侵袭的关系。方法采用免疫组织化学LABC方法检测28例成釉细胞瘤组织中MMP-2、TIMP-2和Ⅳ型胶原的表达,并用RT-PCR方法检测MMP-2、TIMP-2和MT1-MMP在20例成釉细胞瘤的表达。结果MMP-2、TIMP-2和Ⅳ型胶原蛋白在成釉细胞瘤的阳性表达率分别为92.9%、75.0%和42.9%,Ⅳ型胶原阳性着色部位均位于基底膜及部分肿瘤细胞的胞质,MMP-2和TIMP-2阳性着色部位均位于细胞质,分布于瘤组织各层;复发性成釉细胞瘤Ⅳ型胶原的阳性表达率明显低于原发性成釉细胞瘤(P<0.01)。MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2的mRNA在成釉细胞瘤组织中均有表达,复发性成釉细胞瘤的TIMP-2、MT1-MMP相对含量均显著高于原发性成釉细胞瘤(P<0.01)。结论基质金属蛋白酶MT1-MMP表达增加和Ⅳ型胶原在基底膜表达缺失与成釉细胞瘤的复发密切相关,MMP-2活性增加和基底膜Ⅳ型胶原降解增多可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。
- 张彬陶谦黄洪章潘朝斌刘习强
- 关键词：成釉细胞瘤基质金属蛋白酶免疫组化RT-PCR
- RNAi及其在口腔癌基因治疗中的应用被引量：2
- 2005年
- 将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默,这种转录后基因沉默机制(posttranscriptional gene silencing,PTGS)被称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)).它是生物体内抵御转座子和病毒感染的重要保护机制,也是在生长发育过程中调节内源基因表达的重要途径[1].RNAi技术是近年来兴起的一种有效的基因研究工具,它的应用不仅加快了功能基因组学领域的研究步伐,也推动了肿瘤基因治疗的研究,现将RNAi技术及其在肿瘤基因治疗中的应用综述如下.
- 曾东林黄洪章
- 关键词：RNAI肿瘤基因疗法SIRNA
- RANKL、MMP-9和MMP-2在成釉细胞瘤中的表达及意义被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨RANKL、MMP-9和MMP-2与成釉细胞瘤骨吸收机制之间的关系。方法:应用免疫组化、荧光定量RT-PCR及Western印迹方法,分别在不同分子水平检测RANKL、MMP-2和MMP-9在成釉细胞瘤中的表达,所有实验数据均经SPSS 11.0统计软件包进行分析处理,组间比较采用t检验。结果:在所有成釉细胞瘤标本中,3种方法均可检测到RANKL、MMP-2和MMP-9的表达。其中,RANKL各型成釉细胞瘤中均呈恒定的高表达,而荧光定量RT-PCR检测结果显示,MMP-2在基底细胞型成釉细胞瘤中的表达水平显著高于其他两型(P<0.05)。结论:MMP- 2、MMP-9及RANKL可能共同参与成釉细胞瘤引起的骨质吸收过程。与MMP-9相比,MMP-2可能与成釉细胞瘤的侵袭性更为相关。
- 钱永黄洪章潘朝斌张彬王建广
- 关键词：RANKLMMP-2MMP-9成釉细胞瘤骨吸收
- TIMP-2基因过表达抑制成釉细胞瘤侵袭性生长的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)基因转染体外培养的人成釉细胞瘤(AM)细胞侵袭性生物学行为的改变,进一步研究MMP-2、TIMP-2与AM局部侵袭性的关系。方法 pcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2质粒转染人AM细胞。空白对照组:不加任何处理因素;脂质体对照组:加入4μL Lipo-fectamine 2000和250μL Opti-MEMⅠ混合物;转染阴性载体对照组(P0):转染2μg阴性对照质粒pcDNA3.1(+)/GFP;实验组:分别转染不同浓度的质粒pcDNA3.1(+)/GFP-TIMPI 1μg(P1)、2μg(P2)、3μg(P3)。倒置相差荧光显微镜观察转染情况,流式细胞仪测定转染效率。明胶酶谱法检测基质蛋白酶-2(MMP-2)的活性。逆向明胶酶谱法检测TIMP-2的活性。RT-PCR分析MMP-2以及TIMP-2 mRNA的表达。Western blot分析MMP-2及TIMP-2蛋白的表达情况。三维培养观察分析细胞生长状况。Transwell微侵袭分析。结果与空白对照组比较,不同浓度质粒转染组的MMP-2均有不同程度的抑制,差异有显著性(P<0.05);72 h MMP-2抑制率为54.38%。TIMP-2的活性均有不同程度的增加,差异有统计学意义(P<0.05);72 h的TIMP-2增加率为43.75%。MMP-2蛋白表达水平P2明显低于P1、P3组,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,转染72 h后,不同质粒组的MMP-2蛋白表达水平的抑制率分别为16.1%、45.3%及39.6%。不同浓度组的TIMP-2蛋白表达水平的增加率分别为26.1%、61.3%及32.6%。在Transwell中培养72 h后,各对照组之间细胞的细胞计数差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,质粒转染组Transwell下室细胞的细胞数明显减少(P<0.05)。两组的相对侵袭抑制率分别为53.7%及46.9%。结论 TIMP-2基因转染AM细胞后,TIMP-2的mR-NA及蛋白表达增加,蛋白活性亦增加;MMP-2 mRNA表达量无明显改变,其蛋白表达量及活性降低。细胞的侵袭性被部分抑制,可能机制是TIMP-2基因过表达使MMP-2活性降低所致。TIMP-2及MMP-2以及两者的关系可能是影响AM局�
- 张磊涛李伟忠黄洪章
- 关键词：成釉细胞瘤基质金属蛋白酶组织抑制剂-2
- 人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤的病理研究
- 2009年
- 目的观察分析人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤的病理特点。方法无菌条件下将人成釉细胞瘤组织标本切碎、过筛,接种于BALB/c-nu/nu裸小鼠前肢根部的背侧皮下近肌肉处及后背部皮下。无特殊病原体环境下饲养。观察裸鼠及移植瘤生长情况。显微镜下观察移植瘤的侵袭情况。结果裸鼠生长良好。移植瘤病理分析移植瘤的病理类型不同于原来的丛状型。肿瘤细胞散在或聚集成团片状排列,可见到非典型的类似滤泡样及颗粒样的结构,但大多数细胞排列紊乱无典型的成釉细胞瘤病理亚型。结论成功建立人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤动物模型;人成釉细胞瘤移植瘤的病理类型和移植组织的病理特点不一致,需要进一步研究。
- 张磊涛殷学民黄洪章曾东林王建广陶谦张彬
- 关键词：成釉细胞瘤移植瘤裸小鼠
- 人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立被引量：7
- 2007年
- 目的建立人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用组织块直接贴壁法将新鲜成釉细胞瘤组织进行原代细胞培养,反复贴壁法和胰酶消化法使之纯化。然后将纯化的成釉细胞瘤细胞接种于裸鼠颈背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织大体生长情况以及常规病理切片观察瘤细胞的侵袭生长情况。结果成釉细胞瘤细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后第23天见有移植瘤形成,成瘤率为25%。病理切片显示瘤细胞可向裸鼠肌间生长,保持了其侵袭性生长的特性。结论初步建立了人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究成釉细胞瘤的侵袭生长特性奠定了基础。
- 张磊涛黄洪章曾东林张彬
- 关键词：成釉细胞瘤裸鼠移植瘤模型
- 负向调控基质金属蛋白酶-2的表达抑制成釉细胞瘤的侵袭性被引量：1
- 2008年
- 目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)靶向小干扰RNA(siRNA)对成釉细胞瘤(AM)细胞MMP-2基因的负向调控作用及对AM侵袭性的抑制作用。方法培养成釉细胞瘤细胞,应用免疫荧光法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达;体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体,并转染成釉细胞瘤细胞,激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效果,流式细胞仪检测转染效率,逆转录聚合酶链反应检测MMP-2mRNA的改变,免疫印迹法检测细胞MMP-2蛋白表达,侵袭小室微侵袭分析检测细胞的侵袭性,对统计结果进行方差分析。结果成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达,siRNA质粒表达载体对成釉细胞瘤细胞的转染率为63.6%;转染后,成釉细胞瘤细胞的MMP-2mRNA表达减少69.3%,MMP-2蛋白表达减少64.2%,P<0.05,细胞的侵袭抑制率为61.2%。结论MMP-2靶向siRNA表达质粒成功转染成釉细胞瘤细胞并沉默MMP-2基因,MMP-2与细胞的侵袭性密切相关。
- 曾东林黄洪章张磊涛
- 关键词：MMP-2小干扰RNA基因沉默
- 成釉细胞瘤的鸡胚绒毛尿囊膜侵袭模型的建立被引量：6
- 2007年
- 目的 建立成釉细胞瘤的鸡胚绒毛尿囊膜侵袭模型。方法 将新鲜成釉细胞瘤组织接种于鸡胚绒毛尿囊膜上，分别观察接种后不同时期的瘤组织大体生长情况及病理切片。结果 成釉细胞瘤组织可以在鸡胚上生长，接种后第3天见有瘤细胞与尿囊膜融合，5～7天可见有瘤细胞向尿囊膜侵袭性生长。结论 成功建立成釉细胞瘤的鸡胚绒毛尿囊膜侵袭模型，为进一步研究成釉细胞瘤的侵袭生长奠定了基础。
- 张磊涛黄洪章唐海阔曾东林张彬
- 关键词：成釉细胞瘤鸡胚绒毛尿囊膜
- TIMP-2对人成釉细胞瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用
- 2009年
- 目的:研究TIMP-2基因转染对人成釉细胞瘤裸鼠移植瘤侵袭性生长的抑制作用。方法:实验分为空白对照组(Opti-MEM)、脂质体转染组(脂质体+Opti-MEM)和质粒转染组[pcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2+脂质体+Opti-MEM]。将以上各组液体混合注射于移植瘤的周围,每3天1次,共3次。采用RT-PCR分析移植瘤MMP-2及TIMP-2mRNA的表达,Western印迹分析移植瘤MMP-2及TIMP-2蛋白的表达,测定移植瘤体积和瘤重。应用SPSS11.0软件包对所得数据进行统计学分析。结果:接种AM组织块后,裸鼠生长良好,所有裸鼠在实验终止前均存活。接种AM组织块后1周末,可见裸鼠的接种处皮下有小结节,颜色与皮肤颜色相近,随皮肤移动而移动;2周末,小结节稍有增大,并且固定于皮下,不随皮肤的移动而移动,小结节表面较第1周略圆;实验终止时,所有移植瘤都有不同程度的增大。与对照组比较,质粒转染组移植瘤的生长速度在接种后4周明显降低。接种后第5周末,质粒转染组移植瘤的生长速度略有增加。自第1周末开始至实验终止时,质粒转染组移植瘤的体积均小于对照组。各组MMP-2mRNA表达平均值无变化,三者之间无显著性差异,P>0.05。质粒转染组的TIMP-2mRNA表达水平与空白对照组和空脂质体转染组比较均显著增加(P<0.05)。与空白组比较,质粒转染组的TIMP-2mRNA表达相对增加率为35.72%。质粒转染组MMP-2表达平均值比值为0.38,MMP-2蛋白抑制率为47.36%。质粒转染组MMP-2表达显著低于空白组,P<0.05。质粒转染组TIMP-2表达平均值比值为0.86,TIMP-2蛋白增加率为54.65%。质粒转染组TIMP-2表达显著高于空白组,P<0.05。结论:AM移植瘤的生长抑制,可能是由于TIMP-2基因过表达后,特异性抑制MMP-2蛋白所致。
- 张磊涛黄洪章曾东林王建广陶谦张彬
- 关键词：成釉细胞瘤移植瘤基质金属蛋白酶组织抑制剂-2裸鼠
