国家自然科学基金(30371519)
- 作品数：30 被引量：107H指数：6
- 相关作者：陈建苏徐锦堂丁勇赵松滨郑佩娥更多>>
- 相关机构：暨南大学暨南大学附属第一医院深圳市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
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- 角膜内皮细胞稳定表达转化生长因子-β_1对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控
- 2007年
- 目的探讨转化生长因子-β1(tromsforming growth factor-β1,TGF-β1)基因转染角膜内皮细胞后表达产物对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控作用。方法利用脂质体介导法将TGF-β1基因转染入培养的兔角膜内皮细胞中,并用药物筛选抗性细胞克隆。用免疫组化法检测外源基因的稳定表达。ELISA法检测转染细胞培养上清中TGF-β1表达量,用RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6mRNA的表达。结果免疫组化染色显示基因转染后筛选出的克隆细胞TGF-β1蛋白表达均为阳性,胞浆呈棕色着色。转染细胞培养上清中TGF-β1的表达量为(597±7)pg/ml,高于对照组。基因转染组淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-αmRNA的表达量明显低于正常对照组(P<0.05);IL-4、IL-6mRNA的表达量明显高于正常对照组(P<0.05)。结论TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后高表达TGF-β1,致使淋巴细胞发生免疫偏离,作为组织工程角膜种子细胞移植后具有抑制角膜移植免疫排斥反应的潜在可能性。
- 马慧香徐锦堂姜振友张穗梅陈建苏赵松滨
- 关键词：转化生长因子-Β1基因转染细胞因子
- 微重力细胞培养与组织工程被引量：1
- 2004年
- 组织工程主要致力于组织和器官的形成和再生,其核心就是建立细胞与生物材料的三维复合体,形成具有生命力的活体组织,用于对病损组织进行形态结构和功能的重建并达到永久性替代。目前有关微重力和模拟微重力条件下细胞体外生长的研究提示微重力培养环境有利于细胞体外增生,维持有功能的细胞长期生长,并且有助于形成组织样结构,使培养得到的组织更接近于活体组织。因此微重力细胞培养为组织工程的研究开辟了新的前景。
- 陈瑞陈建苏徐锦堂
- 关键词：微重力细胞培养
- 肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞的研究被引量：2
- 2009年
- 目的探索以脱细胞的肾纤维囊作为载体培养角膜基质细胞并研究培养角膜基质细胞特性。方法将培养扩增的兔角膜基质细胞分别接种到培养板和肾纤维囊上进行体外培养,采用倒置显微镜、免疫组化(波形蛋白)和免疫荧光(AO、PI和Hoechst)的方法进行检测,观察兔角膜基质细胞在培养板和肾纤维囊上的生长情况。结果倒置显微镜和免疫荧光显微镜观察结果显示角膜基质细胞在肾纤维囊上快速贴壁生长并增殖,细胞形态呈多角形树枝状,多次传代后细胞仍维持原有的形态和功能,细胞能长期培养。在培养板上培养的细胞呈长梭形,细胞贴壁生长和增殖情况稍差。在肾纤维囊上的活细胞较在培养板上培养的细胞多。结论角膜基质细胞在脱细胞的肾纤维囊载体上生长良好,细胞形态结构明显。本研究为角膜基质细胞的体外培养,提供了简单和高效的方法。
- 唐光霞陈建苏徐锦堂夏潮涌丁勇
- 关键词：角膜基质细胞细胞培养
- 纤维蛋白胶在眼科应用的新进展被引量：8
- 2006年
- 梁晓东陈建苏徐锦堂
- 关键词：纤维蛋白胶眼科应用纤维蛋白黏合剂促进伤口愈合组织工程角膜伤口止血
- 灌注动物细胞培养及其在组织工程中的应用进展被引量：1
- 2010年
- 灌注培养方法是在传统的培养方法基础上发展起来的新的动物细胞的培养方法。目前,组织工程方面有关灌注培养条件下细胞体外生长的研究表明,灌注培养提供的动态培养环境有利于细胞体外生长和增殖,可以得到与活体组织相似的体外组织,用灌注培养所得的细胞或组织进行体内移植的成功率较高。灌注培养方法为组织工程的研究和应用开辟了新的前景,本文对灌注动物细胞培养及其在组织工程中的应用研究进展进行综述如下。
- 唐光霞陈建苏
- 关键词：灌注培养细胞培养
- 纤维蛋白胶与兔角膜3种细胞构建组织工程细胞片研究被引量：4
- 2008年
- 目的:观察兔角膜3种细胞能否在体外构建的纤维蛋白胶体上良好生长,探讨纤维蛋白胶作为组织工程细胞片支架材料的可行性。方法:将培养扩增的兔角膜3种细胞分别接种于纤维蛋白胶表面,采用倒置显微镜,HE染色和扫描电子显微镜,观察兔角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长情况。结果:制备的薄层纤维蛋白胶支架光滑、透明,随培养细胞的生长部分降解,可获得仅带少量纤维蛋白胶的细胞片。角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长良好,可保持生理状态的细胞形态。角膜上皮细胞可形成单层和复层,细胞间连接紧密。角膜内皮细胞呈圆形或多角形,细胞大小一致,排列紧密。角膜基质细胞拉长生长,呈三角形或树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接。结论:体外构建的纤维蛋白胶与角膜3种细胞有组织相容性,纤维蛋白胶有望作为角膜3种细胞的生长载体构建可供移植的组织工程细胞片。
- 梁晓东陈建苏郑佩娥陈小琳
- 关键词：纤维蛋白组织黏着剂角膜细胞培养
- 异种全厚板层角膜和前板层角膜植片板层移植术后拆线时间探讨被引量：4
- 2009年
- 目的研究全厚板层和前板层角膜移植后不同的角膜缝线拆除时间对植片的影响。方法将32只健康新西兰白兔随机分成4组,每组各8只:A组、B组(A、B2组又合为M组)为猫→兔异种全厚板层移植组。C组、D组(C、D2组又合为N组)为猫→兔异种前板层移植组。术眼为右眼,植片直径为9.0mm,植床直径为8.0mm。A、C2组拆线时间为10d(A、C2组又合为G组),B、D2组拆线时间为1个月(B、D2组又合为H组)。观察时间为3个月。结果用两因素方差分析法分析3个月时的炎性反应指数:(1)角膜植片M组(2.560±2.065)与N组(5.250±2.887)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即M组炎性反应较轻;(2)拆线时间G组(2.560±2.128)与H组(5.250±2.840)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即G组炎性反应较轻;(3)角膜植片差异联合拆线时间差异:F=7.017,P=0.013<0.05,差异有统计学意义,即角膜植片差异和拆线时间之间存在交互影响角膜移植炎性反应作用。结论角膜植片差异和拆线时间差异均存在影响异种角膜移植炎性反应的作用,并且二者存在交互作用。
- 吴连胜陈建苏陈建苏徐锦堂丁勇
- 关键词：异种角膜移植高渗葡萄糖
- 角膜内皮细胞高表达TGF-β_1的免疫学作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后表达产物的免疫学活性。方法分别用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学法检测pSecTag2-TGF-β1MP质粒转染角膜内皮细胞48h后TGF-β1基因的表达,ELISA法检测TGF-β1浓度;MTT法检测其对ConA诱导的淋巴细胞转化反应的影响;用流式细胞仪法检测其对淋巴细胞凋亡以及淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、CD69+、CD71+亚群分化的影响。结果从mRNA转录和蛋白质水平均证实TGF-β1基因在角膜内皮细胞获得高效表达。瞬时转染48h角膜内皮细胞培养上清中TGF-β1的表达为(98±3)pg/ml,高于对照组。在其作用下淋巴细胞活化增生受抑制;出现明显的亚二倍体峰;CD25+、CD69+、CD71+阳性细胞比率下降。结论基因转染角膜内皮细胞高表达TGF-β1,可抑制淋巴细胞的活化增生,促使淋巴细胞凋亡。
- 马慧香徐锦堂姜振友赵松滨陈建苏
- 关键词：转化生长因子-Β1基因转染淋巴细胞免疫
- 模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维培养被引量：3
- 2008年
- 目的探讨在模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维生长特性,为构建组织工程角膜提供新的途径。方法Ⅱ型胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以密度为1×105/mL将第5代细胞种植于无菌复合载体材料上。以模拟微重力条件下培养兔角膜基质细胞为实验组与传统静态培养系统进行细胞培养作对照。分别在6、12、18d取细胞和载体行苏木精-伊红染色光镜观察和扫描电镜观察;在3、6、9、12、15、18d取出行CCK-8法检测细胞增生功能。结果对照组只在材料表面可见单层细胞;实验组大量细胞与载体黏附紧密且生长入载体内部,载体材料降解显著。扫描电镜下实验组可见细胞胞体小且突触丰富,培养第18d细胞在材料表面分泌大量胶原膜样物;模拟微重力系统促进了细胞增生(P=0.004)。结论模拟微重力环境中在复合材料上培养的兔角膜基质细胞接近生理状态,更适用于组织工程三维构建,为构建更接近生理状态的组织工程角膜提供了依据。
- 李晓霞陈建苏李沁华郑佩娥吴连胜
- 关键词：模拟微重力基质细胞组织工程角膜
- 体外培养角膜内皮细胞移植的实验研究被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨体外培养角膜内皮细胞移植的手术方法及移植后在活体的生理功能。方法 植片 :以直径 7 5mm、厚 10 0 μm、冷冻脱水保存的猪角膜后弹力膜 (Descemet′smembrane ,DM ) /基质为载体 ,原代接种兔角膜内皮细胞 ,体外培养 7～ 10d ,用于移植。受眼 :新西兰兔 3 0只 ( 3 0眼 ) ,实验组 2 0眼 ,对照组 10眼 ,全角膜范围去除术眼内皮细胞 ,5周后施行手术 ;做直径 9mm、3 / 4角膜厚的带蒂前层角膜瓣并掀置一侧 ,再用直径 7 2 5mm的环钻钻去中央后层角膜 ,形成植床 ;将植片置于植床 ,8-0可吸收线间断缝合 ,10 -0尼龙线间断缝合前层角膜瓣 ,术后观察 1～ 12个月。结果 术后角膜持续透明 6个月 14眼 ( 14 / 18、 77% ) ,12个月 8眼 ( 8/ 14、 5 7% ) ;术后 6个月内皮细胞密度 ( 193 4± 3 0 7)个 /mm2 ,角膜厚度平均为 ( 3 92± 3 9) μm。 结论 以异种DM /基质为载体培养的兔角膜内皮细胞 ,行同种异体移植后 ,能够在活体上成活 ,并具有正常内皮细胞的生物学功能 ,维持角膜透明 ,深板层角膜内皮移植术是体外培养内皮细胞移植的一种有效术式。
- 罗小玲徐锦堂李辰赵松滨陈建苏郭海科
- 关键词：体外培养角膜内皮细胞细胞移植
