博士科研启动基金(B2006097)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张华华周汝滨梁朋郑克勤张国平更多>>
- 相关机构：广东医学院暨南大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金湛江市科技计划项目广东省湛江市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 实时定量RT-PCR评价小鼠胸腺功能和状态方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的建立实时定量RT-PCR的分析方法,对胸腺微环境内的相关基因的表达进行准确的定性和定量,以分析胸腺微环境及其中细胞的状态,直接有效地评价胸腺功能和状态。方法提取小鼠胸腺淋巴细胞RNA;逆转录成为cDNA;PCR扩增目的片段;优化PCR体系;进行实时定量RT-PCR反应,建立扩增曲线;反应结束后,设定阈值,软件输出Ct值;根据比较Ct值法公式,获得不同处理组间相关基因表达比值。结果实时定量RT-PCR的扩增曲线为S型的动力学曲线,熔解曲线为单一峰,证实反应的准确性和特异性;36周小鼠相对于1周小鼠的胸腺相关基因表达变化比值为:LMO2 2.54±0.08、Foxn1 0.68±0.02I、L-7 0.15±0.03。结论36周小鼠发生了胸腺衰老,胸腺的功能和状态均出现退化;本研究成功建立利用实时定量RT-PCR评价小鼠胸腺功能和状态方法。
- 张华华郑克勤
- 关键词：实时定量RT-PCR胸腺小鼠
- 实时定量逆转录PCR分析D-半乳糖致衰老小鼠胸腺相关基因表达的研究
- 2009年
- 目的建立D-半乳糖致衰老小鼠模型,分析其胸腺相关基因表达的研究。方法D-Gal模型组小鼠皮下注射剂量为500mg/kg·d的D-半乳糖溶液,连续注射8w;实时定量逆转录PCR方法对D-Gal模型组小鼠的几种胸腺状态和功能相关基因的表达进行相对定量以直接评价胸腺微环境。结果D-Gal模型组与对照组相比,胸腺相关基因表达变化比值为:LMO2:0.94±0.76,Foxn1:0.45±0.32,IL-7:0.69±0.7。结论D-Gal模型组与对照组相比,胸腺负调控因子的表达无明显变化,而胸腺微环境上皮细胞和胸腺细胞分泌及必需的因子的基因表达显著下降,因而在个体水平上,D-Gal破坏了胸腺微环境的稳定性和功能性,使小鼠胸腺发生明显退化。
- 张华华张国平
- 关键词：D-半乳糖胸腺
- 枸杞子对D-半乳糖致免疫衰老小鼠胸腺功能的作用被引量：4
- 2008年
- 目的:建立D-半乳糖致衰老动物模型,并设置不同处理,研究枸杞子对于小鼠胸腺功能的作用,确定其对于免疫衰老的影响。方法:小鼠分组进行造模并给药;实时定量PCR方法对处理后小鼠胸腺初始T细胞标记物(sjTRECs)进行绝对定量以评价免疫中枢器官胸腺的生成和输出功能。结果:小鼠胸腺和脾脏的T淋巴细胞中的sjTRECs的含量:D-Gal模型组<枸杞组<对照组(P<0.05)。结论:D-Gal模型组与对照组相比,小鼠胸腺的初始T细胞生成和输出功能显著减弱,成功建立了D-Gal致小鼠免疫衰老的模型。枸杞组的小鼠胸腺初始T细胞生成和输出功能较D-Gal组显著增强,具有延缓衰老和免疫保护的作用。
- 张华华梁朋
- 关键词：免疫衰老D-半乳糖胸腺
- 小鼠松果体同基因异体胸腺内移植对免疫衰老作用的研究
- 2008年
- 目的探讨小鼠松果体同基因异体胸腺内移植对免疫衰老的作用。方法将幼龄小鼠松果体移植至老龄小鼠胸腺内,术后切片观察确定手术可靠性。采用实时定量PCR方法对术后受体小鼠胸腺初始T细胞标记物(sjTRECs)进行绝对定量,以评价免疫中枢器官胸腺的生成和输出功能;采用实时定量逆转录PCR方法对术后受体小鼠的几种胸腺状态和功能相关基因的表达进行相对定量,以直接评价胸腺微环境。结果切片观察到移植的松果体在小鼠胸腺内存活良好;手术组小鼠的胸腺和脾脏淋巴细胞内的sjTRECs水平高于伪手术组(P<0.01);与伪手术组的小鼠相比,手术组的小鼠胸腺相关基因表达变化比值为:LMO2:0.78±0.08、Foxn1:5.27±1.58,IL-7:3.46±1.84。结论松果体移植后老年小鼠胸腺的初始T细胞生成和输出功能有显著的提高,胸腺微环境分泌因子的基因表达显著增加,而负调控因子的表达相对下降,回复了衰老胸腺的功能,因而小鼠松果体移植对于以胸腺退化为先导的免疫衰老有逆转的作用。
- 张华华周汝滨曾耀英狄静芳
- 关键词：免疫衰老胸腺松果体
- 小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的采用全骨髓贴壁培养法分离和体外培养小鼠骨髓间充质干细胞,并通过形态学观察和排除鉴定法进行初步鉴定。方法无菌分离小鼠胫骨和股骨,剪开骨干骺端,用RPMI 1640培养基反复液冲洗骨髓腔,收集并过滤离心。DMEM-LG培养基重悬细胞,将细胞悬液转入0.1%明胶包被的培养瓶中,37℃,5%CO2常规进行原代培养并传代。在培养过程中,取不同代数的细胞做CD45流式标记鉴定。结果采用全骨髓贴壁培养法获得的骨髓间充质干细胞贴壁时间短,增殖快,经传代后能够纯化。第4-5代骨髓间充质干细胞形态单一均匀,呈典型的极性漩涡状生长,并不表达白细胞标志抗原CD45。结论本实验可稳定获得均质性良好的小鼠骨髓间充质干细胞,并初步通过鉴定。
- 张华华周汝滨
- 关键词：骨髓间充质干细胞
