国家自然科学基金(81171517)
- 作品数：16 被引量：54H指数：5
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- 氧化应激下黑素细胞自噬相关基因差异表达分析
- 2017年
- 目的 探讨过氧化氢（H2O2）对黑素细胞自噬的影响及可能的调节机制。方法 取对数生长期健康人黑素细胞，分为空白对照组（不予任何处理）、阳性对照组（100 nmol/L西罗莫司处理）和实验组（体积分数为10-7 - 10-3的H2O2处理），处理4 h后，使用CCK8法、流式细胞仪分别检测各组黑素细胞活性及凋亡率。吖啶橙染色检测自噬小泡，透射电镜下观察自噬小体，Western印迹检测自噬特异性蛋白Beclin 1、微管相关蛋白轻链3B（LC3B）。最后采用包含84个自噬相关基因的RT2 Profiler PCR Array筛选自噬相关的差异表达基因。结果 黑素细胞分别经10-3、5 × 10-4、10-4、5 × 10-5、10-5、5 × 10-6、10-6 H2O2处理后，细胞增殖活性及凋亡率与空白对照组相比差异均有统计学意义（F值分别为286.95、301.23，均P＜0.05），且随H2O2体积分数升高，增殖活性降低，凋亡率升高。除5 × 10-6 H2O2组分别与10-5、10-6 H2O2组间相比细胞凋亡率差异无统计学意义外，上述各H2O2组间两两比较，黑素细胞增殖活性及凋亡率差异均有统计学意义（P 〈 0.05）。吖啶橙染色及电镜观察发现，10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司处理的黑素细胞中有自噬小体形成。Western印迹显示，10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司组黑素细胞Beclin 1表达量和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比率均较空白对照组显著升高（P＜0.05）。RT2 Profiler PCR Array结果显示，与空白对照组相比，10-5 H2O2组、10-6 H2O2组和西罗莫司组中ATG12、ATG3、ULK1、PIK3CG、PTEN、PIK3C3表达均显著上调，EIF2AK3表达显著下调；10-5 H2O2组和西罗莫司组mTOR表达显著下调，ULK2表达显著上调；10-6 H2O2组mTOR表达未发生明显改变, AMPK、JNK1表达显著上调。结论 体积分数为10-5和10-6的H2O2均能有效诱导黑素细胞自噬，可能与影响相关信号分子表达相关。
- 龚晴丽李雪丁高中凌雨婷赵文娥熊喜喜鲁严
- 关键词：黑素细胞自噬氧化性应激寡核苷酸序列分析
- 粒细胞集落刺激因子及其受体对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）在人黑素细胞中的表达及重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对人黑素细胞生物学作用的影响。方法分别用普通的合成培养基与添加一定浓度rhG-CSF的合成培养基培养健康人的黑素细胞，并对黑素细胞的生长情况及形态进行观察。应用流式细胞仪检测人黑素细胞、中性粒细胞及红白血病细胞（HEL92．1．7）中G-CSFR的表达率。Western印迹、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法分别检测黑素细胞、中性粒细胞及HEL92．1．7中G-CSFR蛋白及G-CSFRmRNA的表达情况；噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度rhG-CSF（200、400、600、800μg／L）对黑素细胞增殖作用。多巴氧化法检测黑素细胞的酪氨酸酶活性。结果黑素细胞G-CSFR的表达率（76．81％±10．70％）较HEL92．1．7（2．53％±1．54％）明显升高（P〈0．01），略低于中性粒细胞（85．76％±15．71％，P〈0．05）；黑素细胞可表达G-CSFR蛋白和mRNA，不同浓度rhG-CSF处理组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。黑素细胞G-CSFR蛋白和mRNA的表达水平明显高于HEL92．1．7（P〈0．01），低于中性粒细胞（P〈0．05或P〈0．01）。rhG-CSF在200-800μg，L时均有促黑素细胞增殖的能力，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）；在200-600μg／L范围内呈浓度依赖性（P〈0．01），600μg/L时的效应（164．04％±13．0％）与20μg，L的TPA作用（165．62％±10．6％）相当（P〉0．05）；200-800μg/L的rhG-CSF对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响与空白对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论人黑素细胞可表达G-CSFR；rhG-CSF具有促进黑素细胞增殖的作用，但对酪氨酸酶活性无影响。
- 周梅华李雪吴迪朱文元鲁严
- 关键词：黑素细胞粒细胞集落刺激因子
- 白癜风皮损边缘黑素细胞线粒体超微结构的电镜观察被引量：9
- 2013年
- 目的探讨白癜风患者皮损边缘黑素细胞线粒体结构的变化。方法在透射电镜下观察健康对照、进展期白癜风及稳定期白癜风患者皮损边缘黑素细胞形态，体视学方法测量线粒体体密度（Vv）、表面积密度（sv）、数密度（Nv）等参数。结果健康对照组黑素细胞可见大量黑素小体（28．57±3．21），以Ⅲ、Ⅳ期为主，线粒体规则分布在细胞内，结构正常、嵴密集，部分细胞胞质内可见自噬小体。进展期和稳定期白癜风黑素细胞内黑素小体数量减少，单位细胞内黑素小体数量分别为22±6．16和17．43±6．24，其中，Ⅲ期黑素小体显著减少，线粒体大小不一、形态多样，大部分线粒体明显肿胀，嵴模糊、排列紊乱甚至断裂，呈空泡状改变，未见线粒体自噬现象。线粒体形态结构定量研究显示，健康对照组Nv、Vv、sv分别为（7．194±1．434）μm^-3、（4．8±1．2）％、（2．42±0．86）μm^-3；进展期白癜风组Nv、Vv、sv分别为（4．055±0．906）μm^-3、（7．4±2．1）％、（3．58±1．15）μm^-3；稳定期白癜风组Nv、Vv、sv分别为（5．311±0．873）μm^-3、（6．5±1．4）％和（2．82±0．94）μm^-3，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论白癜风皮损边缘黑素细胞线粒体受损，且进展期损伤程度大于稳定期。
- 李雪周梅华吴迪孙杰朱文元赵文娥鲁严
- 关键词：白癜风黑素细胞线粒体
- 新型黑素细胞涂布法移植卡波姆胶载体制备研究被引量：2
- 2012年
- 目的制备一种以卡波姆（carbomer）胶为基质的载体用于黑素细胞涂布法移植。方法体外培养正常人的黑素细胞,配制卡波姆胶半固体培养基;分别采用台盼蓝染色、噻唑蓝比色法[3-（4,5-Dimethyl-2-Thiazolyl）-2,5-Diphenyl Tetrazolium Bromide,MTT]检测1%卡波姆胶对黑素细胞毒性和增殖的影响;用Transwell培养板检测1%卡波姆胶对黑素细胞迁移的影响。结果 1%卡波姆胶作用0~36 h对黑素细胞活性和增殖无影响;1%卡波姆胶作用12 h后对黑素细胞迁移无影响（P〉0.05）。结论采用卡波姆胶混合黑素细胞,不影响体外培养的黑素细胞功能,可以作为新型黑素细胞涂布法移植载体。
- 鲁严周梅华李雪吴迪王大光朱文元
- 关键词：黑素细胞
- 细胞自噬及与皮肤病的研究进展被引量：2
- 2012年
- 自噬是一种细胞自我降解的过程，清除受损或多余的蛋白质和细胞器。当细胞代谢能量不足时，细胞依靠自噬作用实现细胞内成分的循环利用，从而维持自我稳态和生存。自噬与凋亡虽同为程序性细胞死亡，但两者既有区别又相互作用。近来研究表明，多种皮肤病的病理过程中均伴有细胞自噬功能的改变，如带状疱疹、系统性红斑狼疮、黑素瘤和白癜风等。因此，研究皮肤病的细胞自噬具有重要的临床意义，为通过调节细胞的自噬水平来控制和治疗皮肤病打下基础。
- 李雪周梅华鲁严
- 关键词：自噬细胞凋亡皮肤疾病
- 不同类型重症药疹患者外周血淋巴细胞亚群分析及其临床意义
- 2014年
- 目的:检测不同类型重症药疹患者外周血淋巴细胞亚群并研究其临床意义。方法:采用免疫荧光标记流式细胞术检测21例重症药疹患者外周血淋巴细胞的表型。结果:药物超敏反应综合征(drug-induced hypersensitivity syndrome,DIHS)患者治疗前CD3+、CD3+CD4+淋巴细胞较正常值显著增加,并且DIHS患者治疗前CD3+CD4+淋巴细胞显著高于Stevens-Johnson综合征(Stevens-Johnson syndrome,SJS)和中毒性表皮坏死松解症(toxic epidermal necrolysis,TEN)患者;在SJS和TEN患者中,随着外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞数目的增加,激素最大控制用量逐渐减少,随着外周血CD3-CD16+CD56+淋巴细胞数目的增加,激素最大控制用量逐渐增加。结论:不同类型的重症药疹外周血淋巴细胞亚群不同,外周血不同类型淋巴细胞亚群对激素最大控制用量的影响不同。
- 孙杰张锦英丁高中龚晴丽鲁严
- 关键词：淋巴细胞重症药疹流式细胞术
- 体外低浓度过氧化氢对人黑素细胞自噬水平的影响及自噬相关lncRNA的筛选被引量：2
- 2019年
- 目的研究低浓度过氧化氢(HwO2)处理对人黑素细胞黏附功能及自噬水平的影响,并筛选自噬相关lncRNA。方法从健康男性包皮环切术后获得的皮肤组织中分离、培养黑素细胞。对数生长期黑素细胞分为对照组(无HQ处理)、HO组(400 μmol/L HO处理)和HO + NAC组(4 mmol/L NAC预处理细胞2 h,然后加入400μmol/L H202).处理5 d后,用免疫荧光检测上述各组黑素细胞E-钙黏素、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及p62表达,透射电镜观察细胞结构及自噬体,Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,运用基因芯片技术筛选自噬相关lncRNA。采用Graphpad Prism 6软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,并用Tukey检验进行两两间的多重比较。结果共聚焦显微镜下,与对照组和H2O2 + NAC组相比,HQ组黑素细胞E-钙黏素及LC3荧光强度均明显下降,而p62荧光强度增高,且电镜下HQ?组黑素细胞内自噬体数量减少。Western印迹结果显示,HQ2处理组黑素细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值(0.604 ± 0.012)显著低于对照组(1.200 ±0.081, q = 7.718, P < 0.01)及 HO + NAC 组(1.017 ± 0.062, q = 5.076, P < 0.05),同时其 p62/β肌动蛋白值(0.881 ± 0.079)显著高于对照组(0.456 ± 0.121,q = 4.847,P < 0.05)及 HO + NACffl(0.492 ±0.049,9 = 4.439,P< 0.05)及 H202+ NAC组与对照组的LC3-II/LC3-I值及p62/β肌动蛋白值差异均无统计学意义(P > 0.05)。基因芯片结果显示,与对照组相比,H2O2组中有18个自噬相关lncRNA与黑素细胞提前衰老有关,从中筛选出了明显上调的自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1 (差异> 10倍)。结论低浓度H2O2可使黑素细胞E-钙黏素表达下降,降低黑素细胞自噬水平,上调自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1 表达水平。
- 石家绮李雪孙利赵文娥丁书红侯晓媛修艳燕鲁严
- 关键词：黑素细胞细胞黏附自噬氧化性应激微管相关蛋白质类E-钙黏素
- 窄谱中波紫外线围白斑照射治疗难治性白癜风的临床疗效观察被引量：6
- 2021年
- 目的探讨窄谱中波紫外线围白斑照射治疗难治性白癜风的临床疗效。方法回顾2019年6月至2020年11月南京医科大学第一附属医院皮肤科治疗的126例难治性白癜风,分别采用遮盖白斑、窄谱中波紫外线照射围白斑区域皮肤和常规照射白斑治疗,每周2次,持续3个月。治疗结束后评估2组的疗效。运用倾向性评分匹配分析,按1:1匹配。采用单因素和多因素Logistic回归分析、分层分析围白斑照射法对于难治性白癜风的临床疗效。结果采用围白斑照射组皮损420处,常规照射组257处,倾向性评分匹配后每组各190处,匹配前后,围白斑照射组有效率(71.9%,67.9%)均高于常规照射组(31.9%、30.0%,均P<0.05)。倾向性评分匹配后单因素Logistic回归分析显示,围白斑照射与常规照射对疗效的影晌差异有统计学意义(OR=4.9,95%CI:3.2,7.6,P<0.001);多因素分析显示,围白斑照射与常规照射对疗效的影响差异亦有统计学意义(OR=12.0,95%CI:6.5,22.3,P<0.001)。对不同毛发类型与照射方法对白斑疗效的影响进行分层分析,匹配前,毛白白斑采用常规照射187处,围白斑照射246处,毛黑白斑采用常规照射70处,围白斑照射174处;匹配后,毛白白斑两照射组各140处,毛黑白斑各50处。对于毛白白斑,匹配前后围白斑照射组的有效率(77.6%、72.8%)均好于常规照射组(19.3%、20.7%,P<0.01)。对于毛黑白斑,匹配后两组疗效差异无统计学意义(P=0.908)。结论围白斑窄谱中波紫外线对于治疗难治性白癜风尤其是白斑处毛发变白的皮损疗效优于一般照射方法。
- 陈林修艳燕周炳荣侯晓媛王浩洋曹雪琛鲁严
- 关键词：白癜风紫外线疗法
- 羟基积雪草苷对氧化应激条件下黑素细胞的保护作用及其诱导自噬机制的研究被引量：7
- 2017年
- 目的:积雪草是一种传统中医药物,具有很多医学作用,如创伤愈合和抗氧化。中医也发现它可用于白癜风复色和炎症后色素沉着。本研究评估羟基积雪草苷对氧化应激下人黑素细胞作用效果及机制。方法:正常的人黑素细胞予0.01 mmol/L过氧化氢处理,再予不同浓度的羟基积雪草苷(0、10、50、100μg/mL)。评估人黑素细胞树突的回缩速率,流式细胞术及细胞内游离钙浓度([Ca^(2+)]_i)检测线粒体膜电位(MMP),透射电子显微镜(TEM)观察线粒体超微结构,吖啶橙染色检测自噬,蛋白质印迹检测自噬体形成的指标LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值。结果:在过氧化氢引发的氧化应激条件中,羟基积雪草苷在一定浓度下抑制了黑素细胞树突的回缩,提高了膜电位并减少了[Ca^(2+)]_i的积累,减弱了线粒体的损伤,增强了自噬活动。结论:人黑素细胞遭受氧化应激损伤时,羟基积雪草苷可通过自噬激活起到抗氧化作用。因此,羟基积雪草苷可成为氧化应激引起的白癜风的有效治疗手段。
- 凌雨婷龚晴丽熊喜喜孙利丁书红赵文娥朱文元鲁严
- 关键词：羟基积雪草苷自噬线粒体白癜风黑素细胞
- 氧化应激相关性疾病中线粒体机制的研究进展被引量：16
- 2013年
- 氧化应激是由体内生成的活性氧(reactive oxygen species,ROS)/活性氮(reactive nitrogen species,RNS)与抗氧化防御机制之间的平衡被打破引起的,这与许多疾病的发病机理相关,包括神经退行性病变、肿瘤、炎症性疾病等。而线粒体作为细胞代谢的中枢,是其作用的主要靶细胞器,氧化应激引起线粒体内脂质、蛋白质与核酸的损伤,导致线粒体结构和功能的改变,该文就线粒体在上述与氧化应激相关的疾病中改变的研究进展作一综述。
- 龚晴丽李雪鲁严
- 关键词：氧化应激线粒体神经退行性疾病肿瘤炎症
