国家自然科学基金(39770799)
- 作品数：13 被引量：62H指数：6
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- 编码基因pac的DNA疫苗经鼻粘膜免疫定菌鼠的研究被引量：10
- 2002年
- 目的 检测pCIA PDNA防龋疫苗经鼻粘膜免疫定菌鼠的效果 ,并对两种不同的载体系统进行对比。方法 将 30只出生后 2 0d断乳的SD雌鼠随机分为 6组 ,制备定菌模型。分别用裸DNA(A组 )、DNA Dosper复合体 (B组 )、DNA Bupivacaine复合体 (C组 )、pCI质粒 (D组 )及无菌水 (E组 )经鼻粘膜免疫大鼠 ,裸DNA股四头肌注射 (F组 )为阳性对照。 2周后加强免疫 1次。 70d鼠龄时收集唾液、血清及粪便 ,酶联免疫吸附实验检测特异性抗体 ,处死大鼠进行Keyes记分 ,单因素方差分析法分析结果。结果 B、C、F组血清特异性抗PAcIgG水平和B、C组唾液中特异性抗PAcIgA抗体水平明显高于其他组 (P <0 0 1 )。疫苗免疫组龋齿记分明显低于阴性对照组 (P <0 0 1 ) ,其中B、C组效果最好。结论 编码基因pac的pCIA PDNA防龋疫苗经鼻粘膜途径进行免疫可以有效预防龋病的发生 。
- 郭继华樊明文边专贾荣彭彬
- 关键词：DNA疫苗龋齿变异链球菌疾病预防粘膜免疫
- 融合防龋DNA疫苗pGLUA-P的构建及其细胞表达研究被引量：13
- 2002年
- 目的 将变形链球菌 (Streptococcusmutans)表面蛋白PAc编码A区和P区 (A P)的序列克隆到真核载体pGLU中 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗 ,并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法 将pCIA P质粒中A P片段序列与pGLU质粒连接 ,构建出GTF PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA P。将pGLUA P转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,以SDS PAGE电泳鉴定目的蛋白GLUA P的表达。通过脂质体将pGLUA P转染大鼠原代肌母细胞 ,以免疫组织化学检测GLUA P的表达。结果 GTF PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA P经酶切分析证实携带GLU和A P片段。pGLUA P转化的大肠杆菌BL2 1 (DE3)经IPTG诱导能够表达完整的融合蛋白。pGLUA P转染的大鼠原代肌母细胞中可检测到融合蛋白的表达。结论 成功地构建了融合防龋DNA疫苗pGLUA P ,所携带的基因序列正确 。
- 贾荣樊明文边专郭继华陈智杜民权
- 关键词：表面抗原龋齿变形链球菌原核细胞真核细胞
- DNA防龋疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠的实验研究被引量：8
- 2003年
- 目的 :观察编码pac结构基因A -P片段的重组质粒pCIA -P以不同途径免疫BALB/c小鼠后的特异性免疫反应。方法 :重组质粒pCIA -P经鼻腔滴注和颌下腺区皮下腺注射两种途径免疫小鼠 ,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。结果 :滴鼻法和皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高 ,并持续数周。且滴鼻法比皮下注射法诱导唾液IgA型特异性抗体要早。结论 :重组质粒pCIA -P是一种有效的免疫原 ,滴鼻法和颌下区皮下注射法接种防龋DNA疫苗都可有效诱导机体全身及局部黏膜免疫应答。而滴鼻法较皮下注射法能更早诱导局部黏膜免疫应答。
- 张睿樊明文
- 关键词：DNA疫苗变形链球菌龋齿PAC
- 编码PAc结构基因的DNA疫苗免疫动物的实验研究被引量：25
- 2002年
- 目的 本项研究将已构建的编码pac结构基因A P片段的重组质粒pCIA P免疫Wistar大鼠 ,观察重组表面蛋白抗原PAc在大鼠体内不同组织中的原位表达以及免疫定菌鼠后的防龋效果。方法 重组质粒pCIA P经股四头肌肌肉注射和颌下腺区皮下注射两种途径免疫大鼠 ,以免疫组化技术观察重组蛋白PAc在免疫部位的表达。采用股四头肌肌肉注射、颌下腺区皮下注射和颊粘膜下注射 3种方法免疫定菌鼠 ,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平 ,Keyes计分法评估免疫定菌鼠后鼠磨牙的患龋情况。结果 大鼠股四头肌细胞中可见PAc蛋白不均匀的受限表达 ,双侧颌下腺组织均可检测到PAc蛋白的阳性染色 ,在导管内表达呈强阳性。用重组质粒pCIA P经颌下腺区皮下注射和颊粘膜免疫的方法可显著增加唾液中抗PAc IgA水平和血清中特异性抗PAc IgG水平。重组质粒免疫定菌鼠后能显著降低定菌鼠龋损计分。特别是颌下腺区皮下和颊粘膜注射免疫组 ,大鼠牙本质龋的破坏程度明显低于其他组。结论 重组质粒pCIA P是一种有效的免疫原 ,粘膜免疫是较理想的DNA防龋疫苗的接种途径。
- 樊明文边专彭志翔郭继华贾荣陈智
- 关键词：DNA疫苗变异链球菌PAC结构基因动物实验
- DNA防龋疫苗诱导长期免疫反应及机制初探被引量：4
- 2008年
- 目的:观察编码pac结构基因A-P片段的重组质粒pCIA-P以经肌肉和颌下腺周围区域皮下注射(TSG)两种途径免疫BALB/c小鼠后的特异性免疫反应,并观察表面蛋白抗原PAc在小鼠颌下腺中的表达。方法:将20只BALB/c小鼠随机分为4组,分别以重组质粒pCIA-P经肌肉、颌下腺区周围区域皮下注射两种途径免疫小鼠及pCI质粒和生理盐水肌肉免疫小鼠,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。将pCIA-P经颌下腺区周围区域皮下注射以免疫组化技术观察表面蛋白抗原PAc的表达。结果:颌下腺区皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高,并持续24周以上。肌肉注射法后血清IgG型特异性抗体明显升高,但未有效诱导产生唾液IgA型特异性抗体。在小鼠颌下腺中检测到PAc蛋白的表达。结论:DNA防龋疫苗经颌下腺周围区域皮下注射免疫是可诱导长期黏膜免疫的有效途径。
- 张睿樊明文边专彭彬陈智范兵
- 关键词：DNA变形链球菌龋齿PAC
- GTF-PAc融合防龋DNA疫苗研究(Ⅲ)pGLUA-P免疫定菌鼠防龋研究被引量：25
- 2002年
- 目的 :了解GTF -PAc融合防龋DNA疫苗 pGLUA -P激发机体免疫反应和抑制龋病的能力。 方法 :将pGLUA -P和携带 pac基因A -P基因片段的DNA防龋疫苗 pCIA -P以颌下腺周围区域皮下注射 (TSG)和股四头肌注射途径分别免疫定菌SD大鼠 ,以ELISA法检测血清和唾液中的抗体水平 ,采用Keyes法评估大鼠磨牙患龋情况。结果 :pGLUA -P和 pCIA -P经TSG免疫及 pGLUA -P经股四头肌注射免疫组的血清抗PAc的IgG抗体水平明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,pGLUA -P和pCIA -P经TSG免疫组的唾液抗PAc的IgA抗体水平明显高于其余组 (P <0 .0 5 ) ;pGLUA -P经TSG免疫组的釉质龋和牙本质浅龋记分最低 (P <0 .0 5 ) ;经TSG免疫 pGLUA-P组和pCIA -P组的牙本质中龋记分最低 (P <0 .0 5 )。结论 :GTF -PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA -P可以有效地诱导机体的免疫反应 ,抑制龋病的发生和发展 ,防龋效果优于防龋DNA疫苗 pCIA -P。
- 贾荣樊明文边专郭继华陈智
- 关键词：龋齿DNA疫苗疾病预防变形链球菌
- 重组质粒pCIA-P在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达研究
- 2001年
- 目的 证实重组质粒 pCIA P可编码表达具有变形链球菌S .mutans表面蛋白PAc抗原性的表达产物。方法 在选择合适的原核表达系统后 ,诱导外源基因表达出目的蛋白 ,通过蛋白质电泳技术及免疫印迹法检测表达蛋白 ,以观察 pac基因重要抗原决定簇编码区DNA片段在原核细胞中的表达情况。结果 克隆片段在原核系统下可完成表达 ,表达产物保存了S .mutans表面抗原的免疫原性。
- 彭志翔樊明文边专陈智彭彬
- 关键词：重组质粒原核表达龋齿DNA疫苗
- 变形链球菌表面蛋白PAc功能区基因重组质粒的亚克隆构建
- 2001年
- 将变形链球菌 pac基因待表达部分克隆入哺乳动物表达质粒中构建成将用作 DNA免疫防龋研究的重组质粒。用 PCR扩增出 pac基因的 2个高度保守区域 ,扩增产物以 p GEM- T为载体进行亚克隆后 ,再克隆至高效哺乳动物表达质粒 p CI构建成重组体 ,重组质粒 p CIA- P经限制性酶切分析及 DNA测序分析证实克隆构建正确。对含 pac基因重要抗原决定簇区域的成功克隆为 DNA免疫防龋研究完成了重要准备。
- 彭志翔樊明文边专
- 关键词：克隆重组质粒变形链球菌表面蛋白龋病DNA疫苗
- DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗诱导小鼠免疫应答的研究被引量：12
- 2008年
- 目的:研究以一种新型免疫策略即追加相应蛋白质抗原来加强免疫DNA疫苗的免疫效果。方法:重组质粒pCIA-P经鼻腔滴注途径免疫小鼠,并以其相应抗原rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB经鼻腔滴注加强免疫,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平。结果:以rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB加强免疫可显著提高唾液中IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体水平。并且以rPAc蛋白和黏膜佐剂rCTB加强免疫组产生了最高水平的唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体。结论:DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗可有效增强DNA防龋疫苗免疫效果。
- 张睿樊明文彭彬李宇红
- 关键词：DNA龋齿PAC
- 编码基因pac的DNA疫苗经胃肠粘膜免疫SD鼠的研究被引量：2
- 2002年
- 郭继华樊明文边专贾荣彭彬
- 关键词：核酸疫苗龋齿疾病预防变形链球菌
