中国博士后科学基金(20070420762)
- 作品数：7 被引量：24H指数：2
- 相关作者：段华新程腊梅卢光琇谢健晋毛平更多>>
- 相关机构：中南大学广州市第一人民医院广州医学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 两种内皮祖细胞成血管能力的比较被引量：2
- 2007年
- 目的:比较高增殖潜能内皮祖细胞(HPP-EPCs)和循环成血管细胞(CACs)两种内皮祖细胞的成血管能力。方法:利用基质胶上毛细血管样结构的形成实验比较两种细胞的体外成血管能力;利用免疫缺陷的无胸腺裸鼠建立后肢缺血模型评价两种细胞移植后体内促进新生血管形成的能力;并利用荧光标记示踪的方法研究移植的内皮祖细胞能否整合入新生的毛细血管中。结果:HPP-EPCs形成的毛细血管样结构数明显高于CACs(28.6±15.8vs4.7±3.4,P<0.01)。内皮祖细胞移植能增加肢体的保留比例,减少肢体脱失率,促进缺血肢体的血流恢复,而且HPP-EPCs移植组的增加程度较CACs移植组的为高。HPP-EPCs和CACs移植组的毛细血管密度均高于对照组(P<0.001),且HPP-EPCs高于CACs移植组(P<0.01)。结论:HPP-EPCs较CACs具有更强的成血管能力。
- 段华新卢光琇程腊梅
- 关键词：内皮祖细胞血管形成缺血细胞移植
- 脐血来源的两种内皮祖细胞的分离、培养和鉴定被引量：14
- 2008年
- 为了建立从人脐血分离培养两种内皮祖细胞的方法和培养体系,从脐血分离单个核细胞,在含有内皮细胞条件培养液的体系中培养得到两种细胞,利用摄取乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low-density lipoprotein,DiI-Ac-LDL)和结合欧洲荆豆凝集素(Ulex European Agglutinin1,UEA-1)进行鉴定,并进一步用免疫细胞化学、RT-PCR、流式细胞术对它们进行内皮细胞相关的表型检测。结果表明,这两种细胞均能摄取DiI-Ac-LDL和结合UEA-1,表达内皮细胞的标志如CD31、CD144和血管假性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF),有CD31、酪氨酸激酶受体(kinase tyrosine insert domain receptor,KDR)、CD144和内皮一氧化氮合成酶(endothelial NO synthase,ENOS)的基因转录。但是,它们的增殖能力明显不同,分别称为循环成血管细胞和高增殖潜能内皮祖细胞。流式细胞计数结果显示,这两种细胞在一些表面标志表达方面也存在明显的差异。结论:利用含内皮细胞条件培养液的培养体系,成功地从脐血分离的单个核细胞中培养得到了两种内皮祖细胞。
- 段华新卢光琇程腊梅
- 关键词：内皮祖细胞脐血细胞培养
- 高增殖潜能内皮祖细胞促进脐血造血祖细胞体外扩增
- 2012年
- 目的:研究脐血来源高增殖潜能内皮祖细胞支持脐血造血干/祖细胞体外扩增的能力。方法:利用第3代的HPP-EPC联合细胞因子培养脐血造血干/祖细胞,分因子组、非接触培养组和接触培养组。体外培养脐血CD34^+细胞10 d后,从细胞总数,CD34^+细胞数,各系造血集落形成细胞数等比较各组的扩增效率。结果:接触组细胞总数扩增倍数(44.6±8.7)倍和非接触组(39.5±7.3)倍均高于因子组(24.8±5.6)倍,P<0.01。接触组CD34^+细胞数扩增倍数(8.8±2.1)倍高于因子组(2.9±0.6)倍和非接触培养组(3.3±0.6)倍,P<0.01。接触组集落扩增倍数和非接触组均分别高于因子组,P<0.05,且接触组各造血集落扩增数均分别高于非接触组,各P<0.05。接触组扩增后CD34^+CD38^-细胞(10.8%±2.7%)明显高于因子组(4.1%±0.9%)和非接触培养组(3.8%±0.8%),P<0.01。结论:脐血来源高增殖潜能内皮祖细胞能支持脐血CD34^+细胞体外扩增。
- 段华新刘畅杨新宇毛平徐艳丽罗畅如王彩霞谢健晋张玉平
- 关键词：脐血扩增
- LFA-1和VLA-4参与人高增殖潜能内皮祖细胞与血管内皮的黏附和跨内皮迁移被引量：7
- 2008年
- 为了了解淋巴细胞功能相关抗原1(lymphocyte function-associated antigen 1,LFA-1)和极迟反应抗原4(very late antigen 4,VLA-4)在高增殖潜能内皮祖细胞(high proliferative potential endothelial progenitor cells,HPP-EPCs)归巢过程中与血管内皮的黏附和跨内皮迁移中的作用,利用流式细胞术检测HPP-EPC中整合蛋白β1和β2的表达以及小鼠骨髓内皮细胞相应的受体的表达。利用体外黏附和迁移实验研究经过功能级别的中和抗体阻断VLA-4和LFA-1后HPP-EPC黏附和迁移细胞数目的变化。结果表明,HPP-EPC表达整合蛋白β1和β2,活化后小鼠骨髓内皮细胞表达细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1);加CD11a抗体组黏附细胞或CD49d抗体组黏附和迁移细胞均较同型对照抗体组少,而且加CD11a和CD49d两种抗体联用组黏附和迁移细胞明显减少,其细胞数较任何单一抗体组少。结论:LFA-1和VLA-4在HPP-EPC与血管内皮的黏附和跨内皮迁移中发挥了重要的作用。
- 段华新卢光琇程腊梅
- 关键词：LFA-1VLA-4
- 人脐血造血干／祖细胞的磁力搅拌悬浮培养及移植实验被引量：1
- 2009年
- 目的探讨磁搅拌大规模培养体系对人脐血造血祖细胞的扩增效果以及扩增的人造血祖细胞植入动物体内后的造血重建情况。方法从新鲜抗凝脐血中分离出单个核细胞（MNC），以添加干细胞因子、酪氨酸激酶受体3配基及血小板生成素的无血清培养体系进行培养。静态扩增组的细胞置于T25培养瓶中培养，磁搅拌悬浮扩增组（磁搅拌扩增组）的细胞采用Celstir装置进行培养，培养体系为50～100ml。培养7d后进行细胞计数、集落培养检测和细胞表面分子表达的测定。以不进行培养者为对照组。非肥胖糖尿病重症联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠在接受2．5Gy的亚致死剂量X射线照射后分别从尾静脉输入上述静态扩增组、磁搅拌扩增组和对照组的MNC（5×10^6个），另设不移植的空白对照组。观察小鼠的存活情况，6周后处死存活小鼠，检测骨髓细胞中CD34^＋细胞、CD3^＋细胞、CD19^＋细胞、CD33^＋细胞及CD45^＋细胞的含量以及人特异的Cart—I和Alu基因的表达。结果经过7天的培养，磁搅拌扩增组的造血祖细胞扩增倍数为（2．8±0．45）倍，明显高于静态扩增组的（2．1±0．48）倍（P〈0．01）。磁搅拌扩增组形成的红系集落、粒-巨噬细胞集落数均明显高于静态扩增组（P〈0．05）。静态扩增组扩增后的CD34^＋细胞、CD34^＋CD38^-细胞和CD133^＋细胞含量均高于磁搅拌扩增组（P〈0．05），而CD184^＋细胞和CD62L^＋细胞含量低于磁搅拌扩增组（P〈0．01）。移植后6周，对照组、静态扩增组和磁搅拌扩增组分别有3、4、5只小鼠存活，三组间两两比较，6周存活率的差异无统计学意义（P〉0．05）。存活6周的小鼠，其骨髓中能检出人特异性CD34^＋细胞，以及CD3^＋细胞、CD19^＋细胞、CD33^＋细胞及CD45^＋细胞，也检测到人Alu基因和Cart—I基因的表达。结论磁搅拌培养能大规模扩增脐�
- 段华新毛平罗畅如许艳丽谢健晋张玉平
- 关键词：脐血造血干细胞细胞培养技术磁力学
- VLA-4和LFA-1参与HPP-EPC体内向缺血组织的归巢被引量：1
- 2008年
- 目的研究极迟反应抗原(VLA-4)和淋巴细胞功能抗原(LFA-1)参与高增殖潜能内皮祖细胞(HPP-EPC)体内向缺血组织的归巢的情况。方法结扎股动脉构建裸鼠后肢缺血模型,移植经功能级别的VLA-4(或CD49d)和LFA-1(或CD11a)中和抗体阻断后的HPP-EPCs,观察肢体坏死长度和肢体脱失情况,用放射性核素方法检测缺血肢体血流恢复程度,组织学方法计数毛细血管密度和归巢到缺血区肌肉组织的荧光标记的内皮祖细胞数目。结果CD11a抗体组、CD49d抗体组及两种抗体联用组的肢体坏死长度都较同型对照抗体组为高(P<0.05)。而且,两种抗体联用组比任一种抗体组的肢体坏死长度都要高(P<0.05)。各抗体阻滞组血流恢复、毛细血管密度和归巢HPP-EPC细胞数目均较同型对照抗体封闭组低(P<0.05)。而且,两种抗体联用组比任一种抗体组的肢体血流、毛细血管密度和归巢HPP-EPC细胞数目改善都明显(P<0.05)。结论LFA-1和VLA-4参与了HPP-EPC体内向缺血组织的归巢过程。
- 段华新卢光琇程腊梅
- 关键词：归巢
- 脐血来源的不同增殖能力的两种内皮祖细胞
- 2008年
- 目的比较两种脐血来源内皮祖细胞的增殖和抗凋亡能力。方法采用Annexin V/PI的凋亡检测比较两种细胞抵抗凋亡的能力;用增殖实验等方法比较两种内皮祖细胞的增殖特点;用集落形成实验比较两种细胞的集落形成能力。结果发现高增殖潜能内皮祖细胞(HPP-EPCs)显示比循环成血管细胞(CACs)具有更强的抗凋亡能力。CACs只能达到4～6个倍增,而HPP-EPCs能达到60多个倍增。CACs的单个细胞不能形成集落,HPP-EPCs的单个细胞中能在14d的培养期间形成了次级集落和三级集落。结论HPP-EPCs比CACs具有更强的抗凋亡能力、增殖能力和集落形成能力。
- 段华新卢光琇程腊梅
- 关键词：内皮祖细胞增殖凋亡集落形成
