江苏省自然科学基金(BK2011866)
- 作品数：15 被引量：129H指数：9
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- 淫羊藿总黄酮对泼尼松龙诱导斑马鱼致骨质疏松的防治作用被引量：14
- 2014年
- 目的:利用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型评价淫羊藿总黄酮抗斑马鱼骨质疏松的作用。方法:将受精后4 d的斑马鱼幼鱼暴露在不同浓度泼尼松龙(1,10,25μmol·L-1)模型药溶液,得出泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松的最佳剂量,以及含25μmol·L-1泼尼松龙的不同浓度淫羊藿总黄酮(0.12,0.6,3,6μg·ml-1)溶液,含25μmol·L-1泼尼松龙的15μg·ml-1依替膦酸二钠阳性药溶液,0.5%DMSO溶媒对照溶液和培养基阴性对照溶液中,28.5℃下在24孔板中培养,每天换液至第9天处死。采用茜素红对的各组斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果:与DMSO溶媒和培养基阴性对照组相比,25μmol·L-1泼尼松龙模型组的斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著减少;与模型组比较,15μg·ml-1依替膦酸二钠能增加斑马鱼头骨矿化量并有效防止泼尼松龙诱导斑马鱼产生的骨质疏松;与模型组比较,6μg·ml-1淫羊藿总黄酮能显著提高斑马鱼头部骨骼的染色面积和染色光密度值。结论:淫羊藿总黄酮能对抗泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松,同时表明该模型可成功用于评价淫羊藿总黄酮抗骨质疏松活性。
- 詹扬韦英杰王长梅孙娥贾晓斌
- 关键词：斑马鱼骨质疏松依替膦酸二钠淫羊藿总黄酮
- 二维斑马鱼模型联合色谱技术高效筛选中药抗骨质疏松活性成分的思路与方法被引量：4
- 2014年
- 目的:提出以二维斑马鱼模型联合色谱技术突破评价模型和化合物数量制约,建立高效筛选中药抗骨质疏松活性成分新方法。方法:根据本课题组相关研究及国外有关文献资料,依据斑马鱼骨质疏松模型可高效评价活性,斑马鱼代谢模型可高效富集代谢产物,现代色谱联用技术可高效分离、分析中药成分,提出三者有机联合有望高效解码中药抗骨质疏松体内、外药效物质。结果与结论:该方法使中药成分特别是量微成分与代谢产物的富集、分离分析、在体抗骨质疏松活性筛选简单、高效,充分体现中药药效物质含原形成分及代谢产物,具"多成分,多靶点,整体作用"的特点,为中药抗骨质疏松活性成分的早期、快速发现提供新思路与方法。
- 韦英杰景莉君詹扬孙娥贾晓斌
- 关键词：斑马鱼骨质疏松药物代谢活性筛选
- 补骨脂水煎液和醇提物对斑马鱼骨骼发育的影响及其毒性作用被引量：9
- 2017年
- 目的研究补骨脂水煎液(WD)和醇提物(EE)促骨骼发育与安全性的差异。方法将受精后3 d(3 dpf)斑马鱼幼鱼暴露于泼尼松龙(PN)25μmol·L^(-1)和WD或EE 0.1,1,10和100 mg生药·L^(-1),以及依替膦酸二钠(ED)30 mg·L^(-1)溶液中,隔天换液至9 dpf处死。茜素红染色光学显微镜观察斑马鱼头骨骨矿化面积和骨密度,荧光定量PCR法检测9 dpf斑马鱼骨保护素(OPG)和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)m RNA表达。另将1 dpf斑马鱼胚胎置于EE 10,20,30,35,40,50和60 mg生药·L^(-1)、WD 10,50,100,125,150,175,200和500 mg生药·L^(-1)、补骨脂素(PS)12.5,25,50,100,200和400μmol·L^(-1)及补骨脂酚(BK)1,5,10,25和50μmol·L^(-1)溶液中,光镜检测3 dpf斑马鱼胚胎形态,观察记录给药后2~9 dpf胚胎或幼鱼死亡数,SPSS软件计算4,6和9 dpf LC50;另用速率法检测6 dpf斑马幼鱼谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性。结果与模型组相比,EE 0.1 mg生药·L^(-1)和WD 1 mg生药·L^(-1)能显著增加斑马鱼头部骨骼染色面积和骨密度(P<0.01),提示增加骨矿化量;且WD和EE 1 mg生药·L^(-1)均上调OPG m RNA、下调RANKL m RNA表达水平(P<0.01),OPG/RANKL比值显著提高(P<0.01)。EE,WD,PS和BK可致斑马鱼心包、卵黄囊肿大,GOT活性降低(P<0.01),WD和PS的LC50值分别为EE和BK的4~7倍和4.3~20倍。结论 EE较WD促骨骼发育活性强,且毒性更大,提示脂溶性特征性成分可能是起效或致毒的关键成分。
- 陈颖王茉宋捷詹扬景莉君陈书芹贾晓斌韦英杰
- 关键词：斑马鱼补骨脂骨骼发育
- 二维斑马鱼模型联合色谱技术评价朝藿定A及其代谢物宝藿苷I抗骨质疏松活性被引量：11
- 2014年
- 以二维斑马鱼模型联合色谱技术筛选朝藿定A及其代谢物宝藿苷I的抗骨质疏松活性,建立高效筛选中药抗骨质疏松活性成分新方法。用斑马鱼成鱼对朝藿定A的0.5%DMSO溶液进行代谢,代谢液浓缩后用LC-MS分析、HPLC捕获代谢产物宝藿苷I,用斑马鱼骨质疏松模型评价朝藿定A和宝藿苷I的活性。结果表明朝藿定A和宝藿苷I均能防止泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松。该方法使朝藿定A的量微代谢产物得到富集、分离分析,通过在体斑马鱼抗骨质疏松模型简单、高效的筛选朝藿定A及代谢产物宝藿苷I的抗骨质疏松活性,为早期、快速发现中药量微成分及其代谢物的抗骨质疏松活性提供新思路与方法。
- 詹扬韦英杰孙娥徐凤娟贾晓斌
- 关键词：斑马鱼骨质疏松模型代谢模型活性筛选宝藿苷I
- 基于模式生物斑马鱼创立中药壮骨效应评价新模型的思路与方法被引量：9
- 2013年
- 中药治疗骨质疏松的功效正日益受到重视,但壮骨中药及其成分特别是量微成分的活性评价却难以高效开展。新模型、新方法的建立有益于丰富中药壮骨效应评价的思路与方法。模式生物斑马鱼是一种极好的、热门的药学研究工具,根据其骨骼发育的生理、遗传学特点和优势,将斑马鱼用于中药复杂体系及其成分的壮骨效应评价,具有合理性和可行性。本文概述了中药壮骨效应评价的现状及不足,分析了斑马鱼中药壮骨效应评价模型建立的依据,提出了斑马鱼中药壮骨效应评价模型的建立方法,并对该模型的前景进行展望。
- 韦英杰王长梅詹扬贾晓斌
- 关键词：斑马鱼
- 基于斑马鱼模型的续断抗骨质疏松活性部位筛选被引量：11
- 2014年
- 目的:利用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型筛选续断抗骨质疏松活性部位,探讨斑马鱼骨质疏松模型的适用性与合理性。方法:将受精后5 d的斑马鱼幼鱼暴露在25μmol/L泼尼松龙溶液、0.5%DMSO的培养基中,48 h后将25μmol/L泼尼松龙溶液更换为含25μmol/L泼尼松龙的不同浓度续断总提物及其大孔树脂不同浓度醇洗脱部位(含生药0.025、0.25、2.5、25μg/mL)溶液中,同时保留一组25μmol/L泼尼松龙组作为模型对照组。28.5℃下在24孔板中培养,每天换液至第10 d处死。采用茜素红对培养10天的各组斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果:与DMSO溶媒阴性对照组比较,25μmol/L泼尼松龙模型组的斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著减少;与模型组比较,除续断大孔树脂水与10%乙醇洗脱部位外,续断总提物及其大孔树脂30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位的斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著增加。色谱分析表明30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位即含皂苷类成分又含非皂苷类成分。结论:续断皂苷类和非皂苷类成分均能阻止泼尼松龙诱导的斑马鱼骨丢失。斑马鱼骨质疏松模型成功用于高效筛选中药续断的抗骨质疏松活性部位,具简单、高效及可操作性强的优势。
- 景莉君王长梅韦英杰贾晓斌谢林
- 关键词：斑马鱼骨质疏松续断活性部位
- 泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松模型的建立被引量：20
- 2013年
- 本文首次采用斑马鱼为模型动物,以糖皮质激素泼尼松龙为造模用药,建立一种快速、高效的骨质疏松新动物模型。选用受精后4 d或5 d的幼鱼暴露于不同浓度泼尼松龙溶液中,同时设0.5%DMSO溶媒阴性对照组,28.5℃下在24孔板中培养5 d,至斑马鱼颅骨形成。采用茜素红对培养至9 d或10 d的斑马鱼骨骼进行染色,以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。与溶媒阴性对照组相比,2.5,10,25μmol.L-1泼尼松龙组的斑马鱼骨骼染色面积和染色光密度值显著减少,提示泼尼松龙使斑马鱼骨骼矿化量和骨密度显著降低,成功诱导斑马鱼骨质疏松。并用该模型成功验证鲑鱼降钙素和依替膦酸二钠防治骨质疏松的作用。
- 王长梅韦英杰贾晓斌蔡雪婷孙娥宋捷
- 关键词：斑马鱼骨质疏松鲑鱼降钙素依替膦酸二钠
- 基于斑马鱼模型的26种常见骨伤科中药材的毒性筛选被引量：11
- 2016年
- 目的利用斑马鱼毒性模型评价26种常见伤科中药材的安全性。方法将受精后1d（1dpf）的健康斑马鱼胚胎置于不同浓度药味水煎液中,观察记录给药后15d的死亡情况,显微检视3dpf或以后斑马鱼幼鱼的形态,同时设置0.4%DMSO溶媒对照组。用SPSS16.0计算不同药味水煎液在6dpf的鱼半数致死浓度LC50。结果 13种药味（续断、知母、乳香加没药、补骨脂、独活、牛膝、制何首乌、蛇床子、木香、土鳖虫、淫羊藿和五加皮）水煎液致斑马幼鱼脏器形态明显改变,毒性主要表现为卵黄囊肿大、变形、变黑,心包水肿、出血等,且它们的鱼LC50值较低（16.9689.7μg/mL）。其余13种药味（鹿衔草、千年健、苏木、巴戟天、龟甲、骨碎补、丹参、狗脊、桑寄生、鸡血藤、熟地黄、女贞子、杜仲）,未见鱼脏器毒性,且致鱼死亡浓度高（在2 000μg/mL以上）,较安全。结论用斑马鱼模型成功的筛选了26种常见骨伤科中药的毒性,为骨伤科中药临床合理应用提供参考。斑马鱼模型具有简单、高效、实时动态的优势,使中药在体毒性规模化筛选成为可能。
- 陈颖汪晶陈书芹景莉君韦英杰
- 关键词：斑马鱼毒性
- 基于斑马鱼模型的朝鲜淫羊藿抗骨质疏松活性部位筛选被引量：8
- 2014年
- 目的利用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型筛选朝鲜淫羊藿抗骨质疏松活性部位,探讨斑马鱼骨质疏松模型的适用性与合理性。方法将受精后4 d的斑马鱼幼鱼暴露在25μmol/L泼尼松龙模型药物组,含25μmol/L泼尼松龙的15μg/mL依替膦酸二钠阳性药物组,0.5%DMSO溶媒对照组、含25μmol/L泼尼松龙的朝鲜淫羊藿总提物(生药0.1、1.0、10.0、100.0μg/mL)及其大孔树脂水及30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位(生药1.0、10.0、100.0、1 000.0μg/mL)溶液组,28.5℃下在24孔板中培养,每天换液至第9天处死。采用茜素红对各组斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果与对照组相比,模型组斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著减少;与模型组比较,除朝鲜淫羊藿大孔树脂水洗脱部位外,朝鲜淫羊藿总提物及30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位的斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著增加。色谱分析表明30%、50%、70%、90%乙醇分离部位主要含黄酮类成分和少量非黄酮类化合物。结论斑马鱼骨质疏松模型成功用于高效筛选朝鲜淫羊藿的抗骨质疏松活性部位,具简单、高效及可操作性强的优势。
- 詹扬韦英杰孙娥王丹丹景莉君贾晓斌
- 关键词：斑马鱼骨质疏松朝鲜淫羊藿活性部位
- 地塞米松影响骨骼发育的斑马鱼模型的建立被引量：43
- 2013年
- 本文首次采用斑马鱼模型动物,以糖皮质激素地塞米松为模型药,以建立一种快速、高效的骨质疏松新模型。将受精后4天(4 dpf)的斑马鱼幼鱼暴露于不同浓度地塞米松溶液中,设阴性(0.5%DMSO)对照组,28.5℃下在24孔板中培养至9 dpf,至斑马鱼头部骨骼形成。并用此模型观察依替膦酸二钠对斑马鱼头骨矿化的影响及对10μmol.L 1地塞米松诱导的斑马鱼骨质疏松的防治作用。采用茜素红对培养9天的斑马鱼骨骼进行染色,以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果显示:与阴性对照组相比,地塞米松(2.5、10和25μmol.L 1)组的斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著减少;依替膦酸二钠(15及30μg.mL 1)能增加斑马鱼头骨矿化量并有效防止地塞米松诱导斑马鱼产生的骨质疏松。结果提示,地塞米松使斑马鱼头骨骼矿化量和骨密度显著降低,成功诱导斑马鱼产生骨质疏松。该模型亦成功验证依替膦酸二钠能防止骨质疏松的作用。
- 韦英杰王长梅蔡雪婷詹扬贾晓斌
- 关键词：斑马鱼地塞米松依替膦酸二钠骨质疏松
