国家自然科学基金(39770743)
- 作品数：16 被引量：122H指数：8
- 相关作者：吴海山周维江祝云利荆鑫缪志和更多>>
- 相关机构：第二军医大学空军大连疗养院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人半月板纤维软骨细胞培养及生物学特性研究被引量：2
- 2002年
- 为探索分离培养人半月板纤维软骨细胞的简便实用方法 ,采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法 ,简便快速地获得大量成活率高的人半月板纤维软骨细胞。在F 12培养液中进行原代和传代培养 ,并对传代培养纤维软骨细胞进行了免疫组化鉴定 ,光镜及超微结构的观察。结果显示 ,光镜下 ,原代培养细胞呈线形 ,单层排列 ,电镜可见细胞内有丰富的粗面内质网及线粒体 ,细胞呈多极性 ,表面有突起 ;纤维软骨细胞免疫组化Ⅱ型胶原染色阳性。
- 祝云利荆鑫缪志和吴海山周维江
- 关键词：半月板纤维软骨细胞培养生物学特性
- 基因疗法治疗骨骼、肌肉组织缺损的基础研究:重组复制缺陷型腺病毒载体Ad5/CMV-TGF-β_1的构建
- 2001年
- 目的构建重组缺陷型腺病毒载体Ad5/CMV-TGF-β1。方法利用同源重组的原理,将含有TGF-β1基因cDNA的pACCMVTGF-β1质粒和pJM17质粒在腺病毒包装细胞中共转染,制备重组复制缺陷腺病毒Ad5/CMV-TGF-β1并进行鉴定。结果采用同源重组的方法获得的重组复制缺陷型腺病毒载体Ad5/CMV-TGF-β1稳定、滴度高(5～10×107pfu/ml)。结论重组缺陷型腺病毒载体Ad5/CMV-TGF-β1的构建成功,为下一步进行基因疗法治疗骨骼、肌肉组织缺损提供基础。
- 荆鑫史宝明钱齐荣潘欣吴海山周维江
- 关键词：腺病毒转化生长因子Β1
- 兔关节软骨细胞在纤维蛋白胶中体外培养被引量：14
- 2000年
- 目的 :研究关节软骨细胞在纤维蛋白胶中三维培养时的表现。 方法 :( 1)通过硫酸铵沉淀法从兔血液中提取纤维蛋白原并制备纤维蛋白胶 ;( 2 )在纤维蛋白胶凝成的纤维蛋白中立体培养关节软骨细胞 ,观察其表现并测定生长曲线、倍增时间 ;( 3 )通过透射电镜、AB-PAS染色、 型胶原免疫组化检查等 ,了解细胞生长及软骨基质的分泌情况。结果 :( 1)关节软骨细胞在纤维蛋白中大部分保持卵圆形 ,小部分如贴壁细胞状 ;( 2 )细胞倍增时间在第 1～ 4天为 7.0 d,在第 5～ 7天为 2 .3 d;( 3 )AB-PAS染色 ( +)、 型胶原免疫组化检查 ( +)。结论 :关节软骨细胞能在硫酸铵沉淀法制备的纤维蛋白胶中增殖 。
- 傅捷祝云利吴海山周维江董肇阳
- 关键词：软骨细胞纤维蛋白胶关节软骨细胞培养
- 软骨细胞纤维蛋白胶混合物修复兔关节软骨缺损的实验研究被引量：16
- 2000年
- 目的 :研究关节软骨细胞与纤维蛋白胶的混合物修复关节软骨全层缺损的效果。 方法 :( 1)用自制消化瓶消化分离原代兔关节软骨细胞并培养 ;( 2 )通过硫酸铵沉淀法从兔血液中提取纤维蛋白原并制备纤维蛋白胶 ;( 3 )分别用自体或异体关节软骨细胞和纤维蛋白胶的混合物修复兔股骨滑车关节软骨全层缺损。术后 1,2 ,3个月从大体观察、组织学等方面了解关节软骨缺损的修复情况。 结果 :自体软骨细胞组在术后 3个月时修复组织已非常类似于关节软骨 ,界限模糊不清。异体软骨细胞组的修复组织与前者相比较差 ,但明显优于对照组。结论 :关节软骨细胞和纤维蛋白胶的混合物能够良好地修复关节软骨全层缺损 。
- 傅捷吴海山周维江祝云利董肇阳
- 关键词：纤维蛋白胶软骨细胞关节软骨缺损
- 关节软骨细胞的分离、培养及表皮细胞生长因子对其影响被引量：4
- 2000年
- 目的 :研究关节软骨细胞的原代分离及体外培养 ,了解表皮细胞生长因子 ( EGF)对其生长和去分化趋势的影响。方法 :( 1)用自制消化瓶分离原代软骨细胞并培养、传代 ;( 2 )锥虫蓝染色测定细胞存活率 ,测定克隆率 ;( 3 )比较 EGF对软骨细胞增殖以及去分化趋势的影响。 结果 :( 1)自制消化瓶能在 3 h内将软骨碎块消化完毕 ;( 2 )细胞存活率为 88.4% ,克隆率为2 9 .4% ;( 3 ) EGF显著促进软骨细胞增殖 ( P<0 .0 5 ) ;( 4 )软骨细胞经过 8～ 10次传代以后出现去分化趋势 ,与培养液中是否含EGF无关。 结论 :自制消化瓶能提高消化软骨的效率。 EGF能显著促进软骨细胞增殖 。
- 傅捷董肇阳祝云利吴海山周维江
- 关键词：关节软骨细胞表皮细胞生长因子细胞培养
- 关节内注射透明质酸钠对兔膝关节退变软骨的影响被引量：8
- 2000年
- 目的 :观察关节内注射透明质酸钠对兔膝关节炎模型中退变软骨的影响。 方法 :以 2 4只成年新西兰兔为实验对象 ,建立 Hulth膝关节骨关节炎模型。实验组 ( 12只 )于术后第 8周开始 ,每周关节内注射 1%透明质酸钠 1ml,连续注射 5次。对照组 ( 12只 )不作任何治疗。注射后 6周处死动物 ,在手术显微镜下观察膝关节表面 ;取股骨内髁软骨标本进行透射电镜观察 ;取内侧胫骨髁软骨作氨基己糖测定。结果 :实验组动物软骨细胞退变程度均较对照组明显减轻 ;实验组软骨内氨基己糖测定值亦较对照组显著增高 ( P<0 .0 5 )。 结论 :关节内注射外源性透明质酸能减轻兔膝关节骨关节炎模型的关节软骨退变程度 。
- 吴海山李晓华
- 关键词：透明质酸关节软骨膝关节退变关节内注射
- 全关节置换术后自体引流血的回输应用被引量：6
- 2000年
- 目的 :评价全关节置换术后自体引流血回输的临床意义和使用的安全性。方法 :对 2组条件相似的初期关节置换的5 0例患者进行了前瞻性研究。实验组 ( 2 5例 )术后使用自体引流血回输装置 ,对照组 ( 2 5例 )使用负压吸引球。记录引流 /回输血量及与输血有关的反应。结果 :实验组平均回输引流血 492 ml,未输库血 ,也未发现输血反应及菌血症。对照组平均术后输库血 40 0 ml。二组患者手术前后的血红蛋白无显著差异。结论 :自体引流血回输是全关节置换术后安全有效的补充术后失血的方法。在术前没有自体血储备的情况下 ,该技术减少了输注库血的机会 。
- 吴海山李晓华吴宇黎周维江
- 关键词：全髋关节置换术自血回输安全性
- 人半月板纤维软骨细胞在纤维蛋白胶中体外培养被引量：5
- 2001年
- 目的 :研究纤维软骨细胞的分离培养及在纤维蛋白胶中三维培养时的表现。方法 :( 1)分离培养人半月板纤维软骨细胞 ;( 2 )制备纤维蛋白胶 ;( 3)在纤维蛋白中培养细胞 ,观察其表现并测定生长曲线、倍增时间 ;( 4 )通过透射电镜、AB -PAS染色、Ⅱ型胶原免疫组化检查等 ,了解细胞生长及软骨基质的分泌情况。结果 :( 1)原代培养细胞呈线形 ,能在纤维蛋白中保持 ;( 2 )细胞在纤维蛋白中倍增时间为第 1～ 4d :7.0d ,第 5～ 7d :2 .3d ;( 3)AB -PAS染色 ( +)、Ⅱ型胶原免疫组化检查 ( +)。结论 :人半月板纤维软骨细胞能在纤维蛋白胶中增殖 。
- 祝云利付捷缪志和荆鑫吴海山周维江
- 关键词：纤维软骨细胞培养纤维蛋白胶
- 骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究被引量：7
- 2002年
- 目的 :通过体外细胞的培养方法将骨髓间充质干细胞由骨髓血中分离出来并加以纯化 ,进一步在体外培养条件下研究其增殖及生长特征 ,从而为探讨后续利用组织工程学方法修复肌肉骨骼系统组织缺损的可能性提供实验基础。方法 :从骨髓血中提取间充质干细胞 ,体外培养扩增 ,再以相差显微镜、电镜观察并绘制生长曲线。结果 :( 1)通过离体培养 ,可以使体内环境下低丰度的骨髓间充质干细胞实现数目扩增。( 2 )体外培养条件下骨髓间充质干细胞具有成纤维细胞的生长特性。( 3 )体外单层培养条件下贴壁生长的骨髓间充质干细胞会出现“返祖现象”。( 4 )骨髓间充质干细胞内细胞器与其生物活性变化相一致。结论
- 荆鑫缪志和赵剑吴海山史宝明周维江
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养生物学特性
- 兔骨髓间充质干细胞的提取与体外培养被引量：21
- 2000年
- 目的 :评价兔自体骨髓间充质干细胞作为半月板组织工程重建中种子细胞的可能性。方法 :采用体外细胞培养技术将兔骨髓间充质干细胞自骨髓血中分离、纯化和和培养 ,并研究其增殖及生长特征。 结果 :原代培养及传代培养显示 ,兔自体骨髓间充质干细胞具有活跃的增殖倍增能力。 结论 :兔自体骨髓间充质干细胞生物年龄较为年轻 ,用作半月板组织工程重建的种子细胞具有较强的可行性。
- 徐青镭吴海山周维江
- 关键词：间充质干细胞骨髓半月板
