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Immunization with recombinant baculovirus expressing the VP6 protein of grass carp reovirus induces immunity in grass carp: 2014年; Grass carp reovirus（GCRV）,a member of the genus Aquareovirus in the family Reoviridae（Attoui H,et al,2002）,is one of the most virulent aquareoviruses iden-tified so far,leading to high fatality rates（up to 85%）of fingerlings and yearlings of grass carp（Fang Q,et al,2007）.No commercial vaccines against GCRV infection have been developed as yet.; Qin LiLiyue LiuLi LinZeming LiGuangxin LiuShusheng WuMin WangLijuan LiJunfa YuanGailing YuanXueqin Liu; 关键词：草鱼呼肠孤病毒杆状病毒表达诱导免疫疫苗研制

斑点叉尾鮰病毒多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定被引量：1: 2011年; 利用斑点叉尾鮰卵巢细胞增殖斑点叉尾鮰病毒,然后将经过超速离心纯化的病毒免疫4周龄BABL/C雌鼠。每2周免疫1次,第4次免疫2周后,经眼眶采血,分离血清,通过酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,并利用间接免疫荧光试验和与病毒孵育试验检测所制备多克隆抗体的生物活性。结果表明,制备的多克隆抗体ELISA效价为1∶25 600,间接免疫荧光试验证明该多克隆抗体特异性良好,同时与病毒的孵育试验证明该多克隆抗体具备中和活性,能够有效阻断斑点叉尾鮰病毒对细胞的感染。; 吴兵罗宇良王敏曹胜波王卫民陈龙黄锋涛刘学芹; 关键词：多克隆抗体效价生物活性

鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyhv-2)膜糖蛋白基因ORF25的原核表达及多克隆抗体的制备: 根据GenBank上公布的鲤疱疹病毒II型(Cyhv-2)基因序列,设计合成其膜糖蛋白基因ORF25的特异性引物,以本实验室分离鉴定的Cyhv-2基因组为模板,通过PCR扩增ORF25基因,再将其克隆至PGEX-KG原核...; 刘广鑫李泽明林蠡袁军法李莉娟王敏刘学芹; 关键词：原核表达多克隆抗体; 文献传递

斑点叉尾病毒囊膜蛋白ORF6在昆虫细胞中的表达被引量：4: 2010年; 为构建基于杆状病毒表达系统的CCV新型亚单位疫苗,将CCV的囊膜蛋白基因ORF6克隆至杆状病毒转座载体pFastBacTM 1质粒中,并将阳性重组转座质粒转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得重组子rBacmid-ORF6。在脂质体介导下将该重组子转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒AC-ORF6。AC-ORF6感染的sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见重组杆状病毒呈多粒包埋,经间接免疫荧光、Western-blotting检测,CCV的ORF6蛋白可以在感染了AC-ORF6的sf9细胞中表达。研究表明,获得了插入ORF6基因的重组杆状病毒,并且该基因可以在重组杆状病毒介导下在昆虫细胞中表达,从而为基于CCV ORF6的杆状病毒亚单位疫苗研究奠定了基础。; 黄锋涛熊海林曹胜波熊传喜王敏王卫民吴兵刘玉林刘学芹; 关键词：杆状病毒昆虫细胞

自噬促进鲤春病毒血症病毒在鲤上皮瘤细胞中的复制: 为阐明自噬在鲤春病毒血症病毒(SVCV)感染宿主细胞EPC(鲤上皮瘤细胞)中的作用,我们利用透射电镜、共聚焦荧光和蛋白印迹等技术从形态和数量上对SVCV感染EPC细胞的自噬活性进行了检测,并利用自噬调节剂、RNA干扰对自...; 柳力月吴术盛刘广鑫林蠡袁军法李莉娟王敏王焕岭刘学芹; 关键词：自噬鲤春病毒血症病毒; 文献传递

斑点叉尾鮰病毒“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达检测被引量：2: 2011年; 根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到"自杀性"DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1(+)中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰(Ictalurus punc-tatus)"自杀性"DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切鉴定以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。将重组质粒转染人胚肾细胞(293T),间接免疫荧光试验表明ORF6均获得表达,但"自杀性"DNA疫苗的表达效果不如常规DNA疫苗,该研究为这2种疫苗进一步的鱼体试验奠定了基础。; 熊海林尹殿卯王卫民王敏李莉娟刘玉林刘学芹吴兵黄锋涛

草鱼呼肠孤病毒诱导FHM细胞发生凋亡的研究: 2012年; 为探究草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)能否引起细胞凋亡,采用GCRV分别感染草鱼肾细胞(Ctenopharyngodon idellus kidney cell,CIK)和胖头鲤细胞(Fathead minnow cell,FHM),在不同时间观察细胞病变效应。结果表明,GCRV能感染这2种细胞并引起细胞病变,且CIK细胞对GCRV更为敏感;GCRV感染可以导致CIK细胞的快速融合并裂解,而FHM细胞感染后则很少有细胞融合;利用DAPI、Annexin V-FITC染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记[terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)dUTP nick end labeling,TUNEL]技术进一步证实GCRV能够诱导FHM细胞发生凋亡,但不诱导CIK细胞发生凋亡。本研究发现GCRV可以诱导FHM细胞发生凋亡,并推测GCRV在感染不同类型的细胞时,可以通过不同机制促使细胞死亡,从而为进一步研究GCRV的致病机制提供线索。; 黎琴黄锋涛王敏王卫民刘学芹; 关键词：草鱼呼肠孤病毒细胞凋亡

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国家自然科学基金(30901118)