广东省自然科学基金(06301124)
- 作品数：8 被引量：24H指数：4
- 相关作者：刘启才李晓艳李冰彭燕周问渠更多>>
- 相关机构：广州医学院中山大学附属第一医院中山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金广州市属高校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- siRNA沉默LBH基因促进人支气管上皮细胞周期进展被引量：2
- 2011年
- 目的:利用合成的小分子干扰RNA(siRNA)转染人支气管上皮细胞16HBE,观察LBH(limb-budand heart)基因表达下调对16HBE细胞周期及相关基因表达的影响。方法:脂质体2000转染靶向LBH基因的siRNA到16HBE细胞,荧光定量RT-PCR检测siRNA转染后LBH基因表达,流式细胞术检测LBH基因沉默后16HBE细胞周期的改变,荧光定量RT-PCR及Western blotting检测LBH基因沉默后细胞周期素E1和E2表达水平。结果:50 nmol/L siRNA转染16HBE细胞48 h后,LBH基因的表达水平只有对照组的14%;siRNA转染16HBE细胞48 h,其G1期细胞百分率比对照组减少9.28%,而S期细胞百分比增加14.08%;16HBE细胞在50nmol/L siRNA的转染后,细胞周期素E2的表达水平为对照组的2倍,而细胞周期素E1的表达没有发生明显改变。结论:靶向于LBH基因的siRNA能有效沉默16HBE细胞中LBH基因的表达,LBH基因的表达下调促进了16HBE细胞周期G1/S期的进展;细胞周期素E2的表达上调参与了LBH沉默导致的细胞周期G1/S期的进展。
- 刘启才王颖峰杨春祥李晓艳彭燕彭杰李冰李立
- 关键词：RNA干扰基因16HBE细胞细胞周期
- 利用荧光素酶标记的肿瘤细胞建立活体成像动物模型被引量：6
- 2013年
- 目的建立稳定表达荧光素酶的人乳腺癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用脂质体将携带荧光素酶基因的质粒转染到人乳腺癌细胞株MCF-7中,G418筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株。扩增后接种于裸鼠,建立裸鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程。结果获得了高水平稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系MCF-7具有相似的生长特性。将稳定表达荧光素酶的克隆接种于裸鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程。结论成功建立了稳定表达荧光素酶的乳腺癌单克隆细胞株。采用活体动物成像系统构建的裸鼠皮下移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。
- 张绘宇郑国兵张金栋刘启才
- 关键词：荧光素酶生物发光移植瘤活体成像裸鼠
- 稳定沉默细胞周期素依赖性激酶-8基因抑制结肠癌细胞SW480生长的研究被引量：1
- 2013年
- 目的 观察细胞周期素依赖性激酶-8（CDK8）基因的稳定沉默对SW480增殖及生长的影响,并探讨其机制.方法 慢病毒感染SW480后筛选出单克隆；荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测基因表达；噻唑蓝（MTT）比色法和裸鼠成瘤检测细胞的增殖和移植瘤的生长；流式细胞术分析细胞周期和凋亡.结果 CDK8基因沉默组细胞培养4d后的生长抑制率为NC对照组的39.6％,裸鼠移植瘤的体积比NC对照组减小86.8％；CDK8基因沉默组细胞的凋亡率和G0/G1期细胞百分率分别为6.55％和56.46％；显著高于NC对照组（P＜0.05）.结论 CDK8基因稳定沉默能显著抑制SW480细胞的增殖和移植瘤的生长,细胞凋亡及细胞周期阻滞与CDK8沉默效应有关.
- 剧永乐张金栋朱达坚耿岩陈小伍刘启才
- 关键词：结肠癌慢病毒载体基因沉默
- NP9对鼻咽癌细胞系CNE1基因表达谱的影响被引量：5
- 2008年
- 目的:确定NP9表达对鼻咽癌CNE1细胞基因表达谱的影响。方法:稳定表达NP9基因和稳定转染空载体的CNE1细胞分别作为基因芯片分析的实验组和对照组,用高通量的基因芯片筛选实验组细胞的差异表达基因,荧光定量逆转录PCR验证部分基因表达差异。结果:所分析的14500个基因中,266个检测出有表达差异,其中82个基因呈现表达上调(RA>1),184个基因显示表达下调(RA<1)。显著上调和下调的基因分别为34个(RA>1.5)和75个(RA<1.5)。结论:NP9基因的表达导致了CNE1细胞中与细胞周期调控、细胞增殖和分化、细胞信号转导、细胞黏附相关基因表达的改变,为NP9的功能及分子机制研究提供了新的线索。
- 刘启才李晓艳彭燕李晓岩李冰
- 关键词：鼻咽肿瘤基因基因表达CNE1细胞
- 荧光素酶标记的肺癌细胞系的建立及动物模型验证被引量：3
- 2011年
- 目的建立一株稳定表达萤火虫荧光素酶的人肺癌细胞系并通过裸鼠成瘤模型进行验证。方法酶切并连接萤火虫荧光素酶基因到真核表达载体pRc/CMV2上构建pRc/CMV2-luc重组质粒,脂质体2000转染到肺癌细胞株A549,经G418筛选得到抗性克隆,荧光素酶活性检测筛选出荧光素酶活性最高的稳定细胞克隆。小动物活体影像系统检测确定稳定细胞克隆生物发光能力和细胞数量的关系,建立裸鼠皮下成瘤模型并分析移植瘤的发光强度和肿瘤生长的相关性。结果重组质粒pRc/CMV2-luc转染A549细胞后,经G418筛选的抗性克隆传代至40代时,确定3株荧光素酶活性较高的阳性克隆,最高的9号克隆,1×105个细胞的RLU值为9.44×105。小动物活体影像系统检测发现阳性克隆的发光强度与细胞数量呈正相关(R2=0.99);9号克隆皮下接种裸鼠形成接种瘤,其发光强度与肿瘤的生长正相关。结论成功构建了稳定表达萤火虫荧光素酶的A549细胞系,该细胞系可在小鼠活体水平动态监测其发生、发展。
- 刘启才郑国兵李晓艳彭燕张金栋周问渠李冰
- 关键词：荧光素酶肺癌细胞A549
- 用于活体影像技术稳定表达荧光素酶的肺癌细胞系的建立被引量：5
- 2010年
- 目的:建立稳定表达萤火虫荧光素酶的人肺癌细胞系并进行体外验证。方法:亚克隆萤火虫荧光素酶基因到真核表达载体pRc/CMV2上,构建重组质粒pRc/CMV2-luc+,转染到肺癌细胞株spc-a-1,经过G418筛选获得单细胞抗性克隆。抗性克隆连续传代,并通过荧光素酶活性检测筛选出高水平表达荧光素酶的稳定细胞克隆,在体外检测细胞的生物发光能力与细胞数量的相关性。结果:构建的pRc/CMV2-luc+真核表达质粒转染spc-a-1细胞后,经G418筛选出多个抗性克隆;传代至40代时确定有3株细胞的荧光素酶活性最高;活体影像系统体外检测证实阳性细胞株发光强度与数量呈正相关。结论:结果表明成功构建了稳定表达萤火虫荧光素酶的spc-a-1细胞系。
- 郑国兵刘启才李晓艳周问渠彭燕李冰
- 关键词：细胞克隆荧光素酶G418
- 整合荧光素酶的稳定细胞克隆建立裸鼠肺癌静脉移植瘤模型的探索被引量：4
- 2012年
- 目的:应用建立的整合荧光素酶的稳定细胞克隆构建裸鼠肺癌模型,并用活体成像技术检测肿瘤成瘤及变化。方法:细胞计数分析其生长特性,体外测定不同数量的细胞的发光强度;尾静脉注射接种BLAB/c nu/nu裸鼠,活体成像系统监测裸鼠体内肿瘤的生长及转移,肿瘤组织切片验证移植瘤的病理特性。结果:在稳定表达荧光素酶的SPC-A-1-luc+细胞基因组中能有效扩增到荧光素酶基因;该细胞系具有与母细胞相同的生长曲线,体外检测发现其发光强度与细胞数量呈正相关;尾静脉接种裸鼠后肺部成瘤率为100%,且信号强度随时间递增。结论:建立了稳定整合Luciferase基因的肺腺癌细胞株SPC-A-1-luc+稳定克隆,尾静脉接种后可有效构建肺部肺腺癌成瘤模型,并可动态监测肿瘤的生长及转移。
- 张金栋吕景礼周问渠刘启才李晓艳
- 关键词：荧光素酶SPC-A-1细胞移植瘤活体成像
- 慢病毒介导荧光素酶表达的人鼻咽癌细胞小鼠模型的建立被引量：2
- 2013年
- 目的:建立荧光素酶标记的人鼻咽癌细胞裸鼠模型,活体成像系统监测肿瘤的生长并与肿瘤的体积进行对比。方法:构建表达荧光素酶基因2(luc2)的慢病毒载体,与辅助质粒共转染293T细胞以制备慢病毒,感染人鼻咽癌SUNE1细胞后经嘌呤霉素筛选获得表达luc2的细胞株。活体成像设备体外检测不同数量细胞的发光强度,最后以5×106个细胞皮下接种BALB/c nu/nu裸鼠,活体成像系统动态记录接种后肿瘤的信号并与肿瘤的体积对比。结果:成功构建慢病毒表达质粒pLenti-luc2并包装出慢病毒颗粒,病毒感染后嘌呤霉素筛选6天得到鼻咽癌细胞株SUNE1-luc2。细胞株传代后有稳定的发光强度,且经活体检测的每秒光子数与细胞数成正相关(R2=0.96);活体成像观察发现裸鼠接种第2天接种部位的发光强度就达到3.2×108,而且成瘤过程中发光强度的变化与肿瘤大小一致。结论:成功构建适用于活体成像的人鼻咽癌SUNE1细胞的裸鼠成瘤模型,该模型从细胞接种开始即可有效动态监测鼻咽癌皮下瘤的生长及转移,从而为鼻咽癌的成瘤机制及药物干预研究提供一个新的手段。
- 吕景礼李二毛李晓艳周问渠刘启才
- 关键词：荧光素酶慢病毒活体成像
