国家自然科学基金(81171545)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：中山大学孙逸仙纪念医院贵阳医学院中山大学更多>>
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- 电穿孔介导马尔尼菲青霉转化体系的建立和优化被引量：4
- 2014年
- 目的建立和优化马尔尼菲青霉电穿孔转化体系,为其基因功能研究提供良好平台。方法直接使用马尔尼菲青霉缺陷株SPM4(pyrG-,niaD-)萌发孢子进行电穿孔转化,并通过改变孢子龄、孢子萌发时间、质粒浓度、电场强度等影响因素对体系进行优化。结果适合SPM4电穿孔转化条件为:孢子龄为6 d,孢子萌发时间为4 h,电场强度为5 kV/cm。上述条件下分别使用1μg环状或线性化质粒DNA转化SPM4,平均可得到21个和13个转化子。结论马尔尼菲青霉电穿孔转化效率高,重复性好,针对SPM4萌发孢子,环状质粒较线性化质粒电穿孔转化效率高。
- 陈阳霞顾桉菁梁宇恒马团席丽艳
- 关键词：马尔尼菲青霉电穿孔
- 马尔尼菲青霉病诊断研究进展被引量：5
- 2014年
- 马尔尼菲青霉病是由马尔尼菲青霉引起的一种地域性流行的系统性真菌病,易发生于免疫受损个体,尤其是艾滋病患者。近年来随着我国艾滋病发病率的上升,流行区域的马尔尼菲青霉病患者逐渐增多,如不能早期诊断和及时治疗,病死率极高。
- 陈阳霞席丽艳
- 关键词：马尔尼菲青霉病
- 构建以eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体
- 2016年
- 目的:构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法:利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin(100μg/mL)抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3'-AOX/5'-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果:以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论:成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。
- 陈志文冯姣蒋敏敏陈春梅肖星何娅易修文陈庭金席丽艳
- 关键词：绿色荧光蛋白毕赤酵母克隆
- 原生质体介导马尔尼菲青霉基因转化体系的优化
- 2016年
- 目的 优化原生质体介导的马尔尼菲青霉转化体系,为其基因功能研究提供良好的平台。方法 通过原生质体介导将构巢曲霉（Aspergillus nidulans）pyrG基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD（pyrG-,ligD-）中,在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子,运用PCR验证重组子,通过改变影响转化效率的酶解时间、培养基浓度、质粒浓度、不同配方的原生质体洗涤液STC和不同配方的原生质体助融剂PTC 5个条件对体系进行优化。结果 PCR验证A.nidulans pyrG基因成功的插入ligD中,转化子可稳定传代。最适合ligD原生质体转化效率的条件为：酶解时间6h,PTC（60%PEG-4000,100mmol/L Tris-HCl pH8.0,100mmol/L CaCl2）,每100μL原生质体（106-107/mL）加入2.5μg质粒,0.6 mol/L蔗糖SD/SDU筛选/再生培养基,每1μg质粒转化子可达68个左右。结论 成功优化了原生质体介导马尔尼菲青霉转化体系的条件,优化后该方法转化效率高,为基因功能研究提供良好平台。
- 陈春梅冯姣陈志文肖星蒋敏敏史茗岚贺莉雅蔡文莹席丽艳李希清
- 关键词：马尔尼菲青霉原生质体
