国家自然科学基金(30671894)
- 作品数：12 被引量：27H指数：3
- 相关作者：毕志刚陈文琦许惠娟李燕华康健更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学湖北中医药高等专科学校更多>>
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- 光老化成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCaT细胞增殖的影响
- 2009年
- 目的:评价紫外线诱导衰老成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCaT细胞增殖的促进作用。方法:连续UVB辐射诱导成纤维细胞发生应激性衰老(SIPS)。成纤维细胞接种后,制备细胞外基质(ECM)。将预处理的HaCaT细胞接种到包被ECM的平皿。流式细胞仪检测HaCaT细胞周期和凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果:UVB-SIPS成纤维细胞分泌的ECM对HaCaT细胞具有较强的促增殖作用,但对细胞凋亡无显著影响。结论:UVB-SIPS成纤维细胞分泌的ECM可以更强地促进HaCaT细胞的增殖。
- 康健陈文琦夏济平李燕华杨波纪超宋秀祖相文忠万寅生毕志刚
- 关键词：UVB细胞外基质成纤维细胞HACAT细胞
- 复方木尼孜其颗粒对变应性接触性皮炎小鼠模型的影响被引量：8
- 2010年
- 目的研究复方木尼孜其颗粒对变应性接触性皮炎(ACD)小鼠模型的影响。方法建立小鼠变应性接触性皮炎反应模型,观察使用不同浓度复方木尼孜其颗粒后的效果。结果复方木尼孜其颗粒高剂量组能明显抑制ACD小鼠的耳厚度、耳肿胀度,真皮中多形核细胞及单一核细胞数,以及ACD小鼠外周血γ干扰素(IFN)含量。结论复方木尼孜其颗粒能明显抑制二硝基氟苯(DNFB)诱导的变应性接触性皮炎。
- 纪超毕志刚
- 关键词：复方木尼孜其颗粒变应性接触性皮炎二硝基氟苯
- 光老化成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCAT细胞增殖影响及FAK/PI3-K/Akt信号途径的作用机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的探寻UVB诱导的衰老(UVB-SIPS)成纤维细胞分泌的细胞外基质(ECM)对HaCAT细胞增殖的影响以及FAK和PI3-K/Akt信号途径在其中所起的作用。方法连续亚细胞毒剂量UVB辐照诱导皮肤成纤维细胞衰老,制备由衰老成纤维细胞分泌的ECM,接种HaCAT细胞至ECM包被的平皿,观察空白ECM、未衰老的ECM和光老化的ECM对HaCAT增殖、凋亡等功能的影响。免疫印迹法检测细胞内FAK和Akt磷酸化水平的时相性变化。在干预研究中,采用细胞松弛素D和渥曼青霉素阻断FAK和PI3-K/Akt信号通路,对比观察对细胞功能和信号的影响。结果①3组均可见Akt轻度但无显著差异的磷酸化的增加;但U-VB-SIPS组的FAK信号发生最快最明显的增加。②2μM细胞松弛素D可明显抑制FAK和Akt磷酸化;同时,细胞的凋亡率也显著增加。③以400nM渥曼青霉素预处理细胞,明显抑制Akt磷酸化,同时3组的凋亡水平分别达15.8%、23.4%和21.8%。④细胞松弛素D和渥曼青霉素均明显抑制了光老化的ECM促细胞增殖效应。结论在本系统中FAK/PI3-K/Akt信号途径发挥抑制细胞凋亡的作用,阻断该信号通路可完全破坏UVB-SIPS成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCAT的促增殖作用。
- 杨盛波黄进华陈静鲁建云郑蓉康健毕志刚
- 关键词：光老化细胞外基质黏着斑激酶
- UVB照射诱导皮肤成纤维细胞早期衰老的研究被引量：7
- 2010年
- 目的探讨UVB诱导的细胞衰老与肿瘤发生的关系。方法噻唑蓝（MTT）法检测UVB辐射后的细胞增殖情况，筛选诱导衰老适宜的亚毒性剂量和照射次数。染色法检测衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA β-gal）活性。RT—PCR检测衰老相关基因纤维结合素（FN）、骨结合素（ON）和平滑肌22（SM22）的表达。结果以10mJ／cm^2的亚毒性剂量连续5次照射人成纤维细胞后，衰老的生物学特征得以明显表现：①MTT法检测显示细胞增生能力的减弱。②照射组具有SAB—gal活性的阳性细胞明显增加，照射组和对照组的阳性率分别为82．0％和33．7％（P〈0．01）。③3种衰老相关基因FN、ON和SM22的表达亦明显增强，分别约为对照组细胞的2．7、2．0、2．3倍（P〈0．05）。结论反复亚毒性剂量UVB照射人成纤维细胞，初步建立一种UVB诱导的应激诱导的早期衰老（SIPS）模型。
- 陈文琦许惠娟毕志刚
- 关键词：紫外线成纤维细胞细胞衰老
- UVB应激性衰老成纤维细胞分泌细胞外基质对HaCaT细胞ERK信号的影响
- 2010年
- 目的探讨UVB诱导的衰老（UVB—SIPS）成纤维细胞分泌的细胞外基质（ECM）对HaCaT细胞增殖的影响以及细胞外信号调节激酶（ERK）信号途径的作用。方法采用辐射诱导人皮肤成纤维细胞衰老，分别制备由未衰老和衰老成纤维细胞分泌的ECM包被的培养皿（分别定为PRE—ECM组、SCIP—ECM组）。以空白培养皿（NON—ECM组）为参照，在HaCaT细胞接种于培养皿后，采用MTF法和流式细胞法检测其细胞增殖、细胞周期等指标的变化；免疫印迹法分析ERK活化水平。干预性研究ERK信号通路对上述功能的影响。结果三组中，SCIP—ECM组可诱导最强烈的ERK1／2的活化。采用U0126抑制ERK信号活化可完全抑制衰老成纤维细胞来源的ECM的促细胞增殖效应。阻断HaCaT细胞的ERK活化，NON—ECM组、PRE—ECM组和SCIP—ECM组S＋G2／M期细胞的比例明显下降，分别由处理前37．40％、41．34％和43．31％减少至29．41％、36．48％到39．96％。结论UVB—SCIP成纤维细胞分泌的ECM通过刺激ERK磷酸化促进HaCaT细胞增殖。
- 康健陈文琦夏济平李燕华杨波纪超宋秀祖相文忠万寅生毕志刚
- 关键词：细胞衰老细胞外基质
- p53相关的细胞周期调控在UVB诱导的皮肤成纤维细胞早衰中的作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨中波紫外线(UVB)诱导皮肤成纤维细胞(HSF)应激诱导的早衰(SIPS)后细胞周期调控的变化。探讨p53相关的生长停滞、细胞凋亡相关基因表达在UVB诱导的SIPS中的变化情况。方法对UVB诱导发生SIPS的HSF,流式细胞仪检测细胞周期;Western blot法检测衰老信号通路中p53,p21,p16的表达;实时荧光定量PCR芯片检测与p53相关的生长停滞(p53,p21,p16,p19)、凋亡(bax,bcl-2)基因的mRNA表达水平。结果流式细胞仪对UVB诱导的SIPS模型进行细胞周期检测发现,大部分细胞发生了G1期阻滞;衰老通路中p53,p21和p16的表达都明显增加;实时荧光定量PCR芯片检测发现,与生长停滞相关的抑癌基因p53,p21,p16,p19的表达均上调;p53下游的凋亡相关基因中的抑凋亡基因bcl-2表达稍上调,而凋亡基因bax表达下调。结论G1期阻滞和衰老信号通路蛋白表达增加进一步印证了UVB诱导HSF发生的SIPS。p53信号通路相关基因的表达变化提示UVB诱导的SIPS可能具有与p53相关的抗凋亡作用,但其中p53信号通路所起的作用还需更进一步的实验探索。
- 陈文琦许惠娟毕志刚
- 关键词：中波紫外线P53
- 紫外线调节血管内皮生长因子分泌机制的研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨中波紫外线(UVB)增强血管内皮生长因子(VEGF)分泌的信号途径。方法:采用流式细胞仪检测表皮生长因子受体(EGFR)和磷酸化EGFR表达。ELISA检测上清液中VEGF水平。结果:UVB照射后15min可以检测到磷酸化EGFR表达,30min时达最高峰,1h开始下降,2～8h降至基础水平,而EGFR表达量不变。UVB(30mJ/cm2)分别照射EGFR+/-、EGFR+/+和EGFR-/-小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),结果显示EGFR+/+MEF组VEGF分泌明显高于EGFR+/-MEF组和EGFR-/-MEF组,U-VB对EGFR-/-MEF的VEGF分泌促进作用不明显。EGFR磷酸化酶抑制因子PD153035可明显抑制VEGF分泌,1μmol/L有抑制作用,5μmol/L抑制作用增强。磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)高度选择性抑制剂LY294002及不可逆抑制剂wortmannin均可明显抑制VEGF分泌。结论:紫外线通过EGFR-PI3K-蛋白激酶(AKT)途径增强VEGF分泌。
- 李燕华毕志刚
- 关键词：紫外线中波磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B
- 蛋白酶激活受体2在特应性皮炎患者皮损组织中的表达与分布研究被引量：2
- 2009年
- 目的:观察蛋白酶激活受体(PAR)2及其相关蛋白在特应性皮炎(AD)患者皮损组织中的表达,探索AD的发病机制。方法:AD患者15例,正常对照10例,应用免疫组化方法(ABC法),对皮肤组织中PAR2的表达及组织分布进行测定。结果:AD患者皮损组织呈现以慢性皮炎为主的病理改变:表皮突向下增生延长,棘层肥厚,细胞增生明显;真皮浅层血管周围淋巴单一核细胞浸润,患者非皮损组织未见明显的炎性细胞浸润,但可见轻度棘层细胞增生。PAR2表达水平在AD患者皮损组织中明显升高,但在AD患者非皮损组织中变化并不显著。结论:在AD患者中,PAR2表达水平异常增加,由于PAR2表达的增加主要见于AD患者的皮损组织,由此推测,PAR2的激活和表达主要与AD的早期急性炎症反应有直接关联。
- 苏忠兰张美华王宏伟毕志刚
- 亚毒性剂量UVB照射和过表达p53对皮肤细胞光致癌相关基因表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨亚毒性剂量的中波紫外线(UVB)照射和过表达p53对人皮肤成纤维细胞(HSF)在光致癌相关基因表达的影响。方法以反复多次的亚毒性剂量UVB照射正常HSF细胞株和已构建成功的p53稳定过表达HSF细胞株,定制实时定量PCR芯片,检测光致癌发生相关基因的表达。结果 UVB照射和过表达p53在促进衰老基因表达方面,UVB照射的作用更为显著;过表达p53使抑凋亡基因bcl-2下调,促凋亡基因bax上调,UVB照射则可加强过表达p53的诱导凋亡作用;过表达p53可下调癌基因HIF-1α,VEGF和hdm2的表达,UVB照射可促进p53的肿瘤抑制作用。结论过表达p53可使p53依赖的细胞凋亡和抑制肿瘤作用明显增强,亚毒性剂量的UVB还可加强这种作用,从而有助于抑制皮肤肿瘤发生。在UVB作用下,过表达p53可能更倾向于诱导凋亡,而非衰老。
- 陈文琦毕志刚许惠娟
- 关键词：P53UVB人皮肤成纤维细胞
- RNA干扰p53基因表达对人皮肤成纤维细胞衰老的影响被引量：3
- 2012年
- 目的建立抑制p53基因表达的人皮肤成纤维细胞（HSF），探讨抑制p53表达对HSF衰老的影响。方法脂质体转染法将针对p53的shRNA的真核表达质粒pGCsi—p53导入HSF中，经G418筛选抗性克隆，扩大培养，建立稳定转染克隆细胞系。用RT—PCR、实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。通过SA β—gal染色法检测细胞衰老，MTT法检测细胞增殖能力。结果成功建立RNA干扰抑制p53表达的HSF细胞系，转染细胞中p53基因及蛋白水平明显下调（P〈0．01）。sAB—gal染色结果显示，转染组衰老细胞百分比（13．47％±1．01％）与对照组（18．10％±0．66％）相比降低（P〈0．05），MTF检测结果显示，转染组细胞增殖能力较对照组加快（P〈0．05）。结论抑制p53表达能够延迟HSF的衰老，促进细胞增殖。
- 陈文琦许惠娟毕志刚
- 关键词：成纤维细胞细胞衰老基因P53RNA干扰
