河北省自然科学基金(C2006000465)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：陈佳马俊莲宋春丽于丛丛唐霞更多>>
- 相关机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 上西早生柿ETR5基因片段的克隆与植物表达载体的构建被引量：5
- 2007年
- 从上西早生(Uenishiwase)柿叶片中,提取了基因组DNA。以基因组DNA为模板,经PCR扩增,克隆到一个549 bp的ETR5的DNA片段。序列分析表明,上西早生柿基因与洋梨ETR5的核苷酸同源性为79.0%,氨基酸同源性为81.0%;并且含有其他植物ETR5的保守氨基酸区和不变氨基酸残基,表明克隆到的序列是上西早生柿ETR5的基因片段。设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ETR5-Uenishiwase片段。2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断。连接片断经双酶切消化后,连接到植物表达载体pBI221上,构建成Uenishiwase-ETR5基因的植物表达载体。
- 陈佳马俊莲张子德唐霞
- 关键词：上西早生乙烯受体植物表达载体
- 上西早生柿ETR5基因RNAi植物表达载体构建及遗传转化研究被引量：8
- 2010年
- 据已测序的上西早生柿ETR5基因序列,设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ETR5-Uenishiwase基因片段。2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断。连接片断经双酶切消化后,定向连接到植物表达载体pSMAK321的35S启动子和NOS终止子之间,构建成Uenishiwase-ETR5基因的RNA干扰植物表达载体。载体质粒经酶切鉴定正确后通过冻融法转入根癌农杆菌EHA101中。以上西柿组培苗叶片为外植体,优化遗传转化体系,结果表明:农杆菌重悬液和共培养基中均添加200μmol/L的AS及Spc梯度筛选能有效提高转化率。转化植株经PCR检测得到7株阳性植株。
- 于丛丛马俊莲宋春丽陈佳
- 关键词：RNAI植物表达载体转基因
