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鹿结核病流行株与卡介苗差异基因原核表达质粒的构建及表达: 2014年; 以吉林农业大学经济动物疾病实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株的基因组为模板,应用PCR方法从已构建的鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库中扩增RD1区的Rv3872、Rv3873、Rv3874、Rv3875和Rv3878 5段目的基因,分别与p MD18-T Simple Vector连接,经PCR、酶切鉴定后的阳性重组克隆质粒与原核表达载体p GEX-4T-1连接并进行原核表达,采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物的反应原性进行初步研究。基因测序结果显示差异基因与期望的序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达,获得以可溶形式表达的目的蛋白,经SDS-PAGE分析目的蛋白的相对分子量与理论值相符,经Western blot鉴定纯化好的目的蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,为其在鹿结核病血清诊断学中的应用奠定了试验基础。; 王文玉曾范利时坤李健明刘红娜杜锐; 关键词：差异基因原核表达反应原性

结核分支杆菌Rv3117基因的克隆与原核表达: 2015年; 以结核分支杆菌H37Rv株染色体DNA为模板,应用Rv3117基因特异性引物对该基因进行PCR扩增,获得约800bp的DNA片段。将PCR纯化产物克隆至pMD-18T Vector中,构建出重组质粒pMD-18T-Rv3117。以EcoRⅠ和SamⅠ双酶切pMD-18T-Rv3117重组载体和pGEX-4T-1原核表达载体,并将纯化的Rv3117基因亚克隆至pGEX-4T-1中,构建出原核重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3117。将pGEX-4T-1-Rv3117重组质粒转化至感受态E.coli BL21中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约30ku目的蛋白带。Western blot分析结果显示,该蛋白能与抗结核分支杆菌阳性血清发生特异性反应。研究结果为结核病临床诊断抗原的筛选奠定了基础。; 刘杨宋纪伟曾范利时坤李健明杜锐; 关键词：结核分支杆菌克隆原核表达

鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因基因文库的构建: 2012年; 应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为testerDNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,testerDNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交。将获得的消减PCR产物与pMD-18连接,JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选。结果表明,RsaI酶切产生的酶切产物在0.1～2.0 kb之间,将消减PCR产物克隆后,挑取208个转化子,构建了鹿结核病流行株与卡介苗的差异基因文库。结果表明,应用抑制性消减杂交技术,构建鹿结核病流行株与卡介苗基因组差减文库,可为鹿结核病自然感染和卡介苗免疫的鉴别诊断及鹿结核病的综合防治奠定基础。; 刘东旭时坤李健明杜锐; 关键词：卡介苗抑制性差减杂交基因文库

卡介苗与结核菌野毒株的基因差异的研究进展: 2011年; 人类结核已经存在数千年之久,无一个国家能幸免于难,尤其是第三国家。人们在感染结核病的同时也能感染艾滋病,这给人类的健康带来了巨大的挑战。现阶段,预防结核病的唯一方法就是接种BCG-减毒牛型结核分枝杆菌活疫苗。该疫苗是在1908年,由Leon Calmette和Camile Guerin将一株牛型结核分枝杆菌强毒株经历13年230次传代培养,使其毒力发生变异,成为对人无致病性,而保持了良好的免疫原性的菌株。本文主要是探讨结核分枝杆菌,牛型结核分枝杆菌和卡介苗之间的基因的差异。为卡介苗的改良和结核病的检测提供有益借鉴。; 刘东旭时坤李健明杜锐; 关键词：卡介苗结核分枝杆菌基因差异

鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库的构建: 应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为testerDNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,testerDNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交。将获得...; 刘东旭时坤李健明杜锐; 关键词：卡介苗抑制性差减杂交基因文库; 文献传递

沈阳地区鹿结核病和布鲁菌病的血清学调查: 2011年; 为了解结核病和布鲁菌病在沈阳地区鹿群中的流行传播状况,从沈阳地区随机采集鹿血清样本1 055份,分别用平板凝集法检测鹿布鲁菌病和间接ELISA法检测鹿结核病的血清阳性率。经检测,沈阳地区的鹿群中结核病的血清阳性率为99.24%,鹿布鲁菌病的血清阳性率为20.19%。本次调查结果为沈阳地区鹿结核病和布鲁菌病的防控提供了流行病学资料。; 于淼曾范利时坤李健明刁燕刘晓刘东旭杜锐; 关键词：结核病布鲁菌病血清学调查

应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果被引量：1: 2014年; 为评价牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果,用BVDV-E2截短基因重组卡介苗pMV361-E11、pMV361-E12、pMV361-E13、pMV361-E21、pMV361-E22、pMV361-E23及卡介苗、BVDV灭活苗和生理盐水对试验小鼠进行腹腔免疫,在三免后14d取其脾脏对T、B淋巴细胞、树突状细胞及Th1细胞等细胞因子进行流式细胞术检测,评价各重组卡介苗的免疫效果。结果显示,pMV361-E23重组卡介苗组中各细胞因子的表达量尽管有个别因子在同组中不是最高,但均高于同组生理盐水的表达量(除INF-γ检测中略低外);pMV361-E12组中IL-12的含量高达9.7。表明pMV361-E23和pMV361-E122组截短重组卡介苗免疫效果较好,为预防牛病毒性腹泻病以及新型疫苗的研制奠定基础。; 杨宇航宋纪伟时坤曾范利李健明刘红娜王文玉郝俊伟刘东旭杜锐; 关键词：重组卡介苗流式细胞术免疫效果

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究被引量：2: 2014年; 为评价表达牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2基因重组卡介苗(rBCG)的初步免疫效果,本研究分别将rBCG-pMV261-E2和rBCG-pMV361-E2免疫实验用大耳白兔,通过间接ELISA方法和T淋巴细胞转化试验分别检测兔体内体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示在体液免疫方面,两组rBCG均从第7 d开始产生BVDV抗体,抗体水平逐渐上升,在42 d达到峰值,并且rBCG-pMV361-E2刺激所产生的抗体水平始终高于rBCG-pMV261-E2;而rBCG血清中的抗结核菌抗体水平与正常BCG无显著差异,与BVDV阳性对照组和阴性对照组之间则差异显著;在细胞免疫方面,与阴性对照组相比,两组rBCG与BVDV灭活苗相同,免疫实验兔后淋巴细胞对特异性刺激均有明显的增殖。表明两组rBCG免疫实验兔后均使其产生了体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研制BVDV新型基因工程疫苗奠定基础。; 李健明杨宇航王慧慧曾范利时坤张妍刘菲杜锐; 关键词：E2基因重组卡介苗

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