国家自然科学基金(81171492)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 有汗性外胚叶发育不良一家系致病基因突变筛查被引量：1
- 2012年
- 目的:寻找有汗性外胚叶发育不良家系GJB6、GJB2和CTSC突变基因。方法:抽提外周血DNA,PCR扩增GJB6、GJB2和CTSC基因编码区的所有外显子,扩增产物纯化后直接双向测序,并与基因组序列进行比对分析,查找有无突变。结果:候选基因编码区所有外显子均未发现突变结论:GJB6、GJB2和CTSC基因编码区序列与本研究中有汗性外胚叶发育不良家系发病无关,致病基因待进一步研究。
- 王占想宋亚丽陈楠王震英张莉
- 关键词：GJB2基因
- 一残毁性掌跖角化病家系GJB2基因突变研究被引量：2
- 2012年
- 目的对一个中国汉族残毁性掌跖角化病家系进行GJB2基因突变检测，以明确其致病基因。方法收集该家系5例患者、4例正常人和100例非该家系成员外周血和家系患者临床资料。提取基因组DNA，PCR扩增包括GJB2基因整个编码序列在内的1015bp，扩增产物纯化后应用ABI PRISM3730XL自动测序仪直接双向测序，Sequencher4．10．1Demo软件与基因组序列进行比对分析，查找有无突变基因。结果该家系所有患者GJB2基因均存在一个杂合错义突变196G→C，导致第一细胞外区域（E1）第66位天冬氨酸被组氨酸替代（即D66H），而家系中4例正常人和100例非家系成员正常人对照的DNA测序结果均未发现此突变。结论GJB2基因中D66H错义突变是中国汉族人群中残毁性掌跖角化伴耳聋的致病原因之一。
- 王占想陈楠宋亚丽王震英郭小璇张莉
- 关键词：皮肤角化病掌跖突变
- 先天性甲肥厚合并疑似Ogna型单纯型大疱性表皮松解症一家系调查被引量：1
- 2019年
- 患者男,23岁,双足底反复糜烂、疼痛10年,行走困难半月。皮肤科检查:患者全部指(趾)甲肥厚,呈黑褐色,甲远端隆起,甲下有硬性角质样物质填充。双足底角化明显,浸渍呈乳白色,双足跖及侧缘见弥漫性丘疱疹,散在糜烂面,手腕及额部见水疱。前臂、肘部伸侧散在毛囊性丘疹及细碎脱屑,舌表面弥漫性白斑。符合先天性甲肥厚临床表现。抽取患者及其父母、祖母外周血行全基因组外显子测序,结果显示,患者及其父亲存在先天性厚甲综合症K6a型KRT6A基因1号外显子第516~518位碱基缺失(c.516-518delCAA),同时存在PLEC基因27号外显子第3970位碱基替换(c.3970C>T)。该突变型可能致Ogna型单纯型大疱性表皮松解症。患者祖母存在与患者相同的PLEC基因突变。诊断:先天性甲肥厚且疑似Ogna型单纯型大疱性表皮松解症。予阿维A治疗9个月,患者指甲颜色、足底症状明显缓解,腕部散在粟粒样水疱消失。目前随访中。
- 郭可盈李晓莹张莉
- 关键词：先天性厚甲阿维A
- GJB6基因突变体过表达慢病毒载体的构建及其在HaCaT细胞中的表达被引量：2
- 2015年
- 目的;明确GJB6目的基因蛋白Cx30在GJB6 3种突变体A88V、G11R和V37E在HaCaT细胞中的表达。方法:构建GJB6基因突变体的慢病毒载体,并转染至HaCaT,应用荧光倒置显微镜检测其表达。结果:突变体中G11R和A88V经过多次转染实验,能够明确观察到HaCaT细胞细胞膜上有Cx30蛋白的荧光表达;而V37E突变型荧光表达极弱或无。结论:3种突变体的Cx30表达量不同,初步推测突变体编码的蛋白质或不能定位于角质形成细胞膜或不能形成功能性的Cx30,从而影响了HaCaT细胞正常的增殖和分化。
- 姬灿灿王震英燕鹏荣陈楠吴静张永飞宋亚丽张莉
- 关键词：HACAT细胞
- 人GJB6基因Tet—onHaCaT细胞稳定株的构建与鉴定
- 2016年
- 目的以Tet—on慢病毒为载体建立稳定表达GJB6基因及其突变体的HaCaT细胞株，为后续研究有汗性外胚层发育不良的发病机制奠定实验基础。方法利用PCR技术扩增人GJB6基因野生型与突变型（A88V）基因，重组Tet—Oil慢病毒质粒，经基因测序及酶切技术对其鉴定，再将重组慢病毒转染入HaCaT细胞，经嘌呤霉索筛选出稳定表达编码缝隙连接蛋白Cx30的GJB6基因的细胞株。细胞株加四环素诱导后，通过RT—PCR检测GJB6基因的mRNA表达量，同时通过Western印迹检测Cx30与FLAG标签肽的表达，从而对稳定表达GJB6基因的HaCaT细胞株进行鉴定。用CCK8法检测GJB6基因野生型与突变型经四环素诱导表达后对细胞增殖的影响。结果经酶切、测序鉴定，重组慢病毒质粒构建成功。RT—PCR检测到稳定转染的HaCaT细胞中GJB6基因mRNA表达量明显增加，感染野生型Tet—on慢病毒的HaCaT细胞组（wT组）加四环素GJB6基因表达丰度是wT组不加四环素的113．369倍（P〈0．05），感染突变型（A88V）Tet—on慢病毒的HacaT细胞组（MU组）加四环素GJB6基因表达丰度是MU组不加四环素的3．249倍（P〈0．05）；Western印迹可检测到经四环素处理的WT组和MU组稳定表达Cx30与FLAG，而未经四环素处理的细胞和感染阴性对照病毒的HaCaT细胞组（NC组）未检测到Cx30与FLAG目的条带。NC组加与不加入四环素在4、8、12、24、36、48h时的A值差异均无统计学意义（P〉0．05）；wT组加与不加入四环素在4、8、12、24、36h时的A值差异均有统计学意义（P〈0．05）；MU组加与不加入四环素在4、8、12、24、36、48h时的A值差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建出稳定表达GJB6基因野生型及其突变体A88V的HaCaT细胞株。
- 路雨婷王震英宋亚丽姬灿灿张莉
- 关键词：外胚层发育不良症连接蛋白类HACAT细胞
