广东省科技计划工业攻关项目(2010B080701035)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 相关作者：冯鉴强郭润民沈宁陈培熹莫利求更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第一医院广州医学院更多>>
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- 抑制环氧化酶-2-前列腺素E2通路介导硫化氢保护人皮肤角质形成细胞对抗化学性缺氧引起的损伤被引量：2
- 2012年
- 目的探讨环氧化酶（COX）-2-前列腺素（PG）E2通路在硫化氢（H2S）保护人皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）对抗化学性缺氧引起的损伤中的作用。方法用化学性缺氧模拟剂氯化钴（CoCl2）处理HaCaT细胞，建立缺氧引起皮肤损伤的体外模型。在CoCl2处理前，用不同浓度的H2S的供体硫氢化钠（NaHS）预处理30min，检测H2S对CoCl2引起的细胞损伤的影响；应用细胞计数试剂盒（CCK）-8法检测细胞存活率。酶联免疫法（ELISA）检测培养基中PGE2的水平。Western印迹法检测COX-1和COX-2蛋白的表达。结果500μmol／L CoCl2处理HaCaT细胞24h可以明显降低细胞存活率[（56．3±5．4）％]，促进PGE2的释放[（395．7±65．0）％]以及上调COX-2的表达（均P〈0．01）。CoCl2处理对HaCaT细胞内COX-1的表达无明显影响（P〉0．05）。在200～400μmol／L的浓度范围内，NaHS预处理可明显拮抗CoCl2引起的细胞存活率降低、PGE2的释放增加以及COX-2表达上调。选择性COX-2抑制剂（NS-398）也能抑制CoCl2处理引起的细胞存活率降低。结论H2S可保护人皮肤角质形成细胞对抗化学性缺氧引起的损伤，其机制与抑制COX-2-PGE2通路有关。
- 杨春涛董颀韩艳芳张辉郭润民胡芬冯鉴强莫利求
- 关键词：硫化氢角蛋白细胞环氧化酶-2前列腺素E2
- N-乙酰半胱氨酸保护PC12细胞对抗化学性低氧诱导的损伤被引量：2
- 2011年
- 目的探讨活性氧(ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否保护PC12细胞对抗化学性缺氧引起的损伤。方法应用化学性低氧模拟物氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞,建立化学性缺氧损伤PC12细胞的实验模型。在CoCl2处理PC12细胞前60 min将NAC加入培养基中,作为预处理。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测Caspase-3蛋白的表达水平。结果 600μmol/L CoCl2明显地损伤PC12细胞,表现为降低细胞存活率,增加凋亡细胞,激活Cas-pase-3及降低MMP。在CoCl2损伤PC12细胞前60 min,应用500μmol/L NAC作为预处理能明显地抑制CoCl2对PC12细胞的损伤作用,使细胞存活率显著升高,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3表达降低,并显著对抗CoCl2对MMP的抑制作用。结论NAC能明显地对抗化学性缺氧诱导的PC12细胞损伤,此保护作用与其改善MMP,抑制Caspase-3活化等机制有关。
- 张任权兰爱平胡芬郭润民沈宁冯鉴强
- 关键词：氯化钴N-乙酰半胱氨酸CASPASE-3线粒体膜电位PC12细胞
- 胍丁胺通过抑制大鼠脊髓JNK通路对抗慢性吗啡耐受
- 2011年
- 目的探讨脊髓c-Jun蛋白氨基末端激酶(c-Jun N-ter-minal kinase,JNK)在胍丁胺抗慢性吗啡镇痛耐受中的作用。方法 SD大鼠皮下注射吗啡(10 mg.kg-1,每日2次,连续9 d)建立慢性吗啡镇痛耐受模型。应用热水甩尾法测定甩尾潜伏期观察吗啡的镇痛效果。应用免疫印迹法(Westernblot)检测脊髓总JNK和磷酸化(p)-JNK蛋白表达;免疫组织化学染色法检测脊髓p-JNK的免疫反应性(immnunoreac-tivity,IR)。结果吗啡耐受大鼠脊髓背角p-JNK-IR明显增多,p-JNK蛋白表达也增多,而总JNK没有改变。胍丁胺(10 mg.kg-1)不仅拮抗吗啡镇痛耐受,而且明显地抑制脊髓背角p-JNK-IR增多及p-JNK蛋白表达上调。结论抑制慢性吗啡注射所引起的脊髓JNK的激活可能是胍丁胺抗吗啡镇痛耐受的作用机制之一。
- 叶裕良肖亮灿莫利求赵春梅陈培熹冯鉴强郭瑞鲜
- 关键词：吗啡胍丁胺JNK脊髓
- 胍丁胺对吗啡镇痛耐受大鼠脊髓和海马锌含量变化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察胍丁胺对吗啡耐受大鼠脊髓和海马组织中锌(Zn2+)含量变化的影响。方法采用SD成年雄性大鼠,建立慢性吗啡耐受大鼠模型,用热水甩尾法测定甩尾潜伏期观察痛反应的变化。动物随机分为4组:生理盐水(NS-NS)组、吗啡(NS-Mor)组、胍丁胺(Ag-NS)组、胍丁胺-吗啡(Ag-Mor)组。用原子吸收光谱法测定各组大鼠的脊髓和海马Zn2+含量。结果胍丁胺(10mg/kg)与吗啡合用具有显著的抗吗啡耐受作用,并阻断慢性吗啡耐受引起的脊髓和海马Zn2+含量的降低(P<0.001)。结论逆转吗啡耐受时脊髓和海马组织中Zn2+含量的减少,可能是胍丁胺抗吗啡耐受的机制之一。
- 叶裕良肖亮灿莫利求赵春梅郭瑞鲜陈培熹冯鉴强
- 关键词：吗啡胍丁胺脊髓海马
- JNK信号通路介导化学性缺氧对PC12细胞的损伤作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨C-Jun蛋白氨基末端激酶(C-Jun N-termi-nal kinase,JNK)通路在化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)对PC12细胞损伤中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞以建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;JC-1染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测JNK蛋白的表达水平。结果 600μmol.L-1CoCl2作用PC12细胞不同时间(12～48 h)后,可时间依赖性地抑制PC12细胞的存活率;600μmol.L-1的CoCl2处理PC12细胞48 h时,可引起细胞出现核固缩等典型的凋亡特征;CoCl2能明显的降低PC12细胞的MMP;CoCl2能诱导JNK的磷酸化,特异性的JNK阻断剂SP600125可抑制CoCl2对PC12细胞的上述损伤作用。结论 CoCl2可引起PC12细胞损伤,此作用可能与其诱导JNK磷酸化有关。
- 兰爱平莫利求郑东诞胡芬郭润民沈宁郭瑞鲜冯鉴强陈培熹
- 关键词：线粒体膜电位SP600125PC12细胞
- 硫化氢通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶抑制阿霉素引起的心肌细胞损伤被引量：4
- 2013年
- 目的研究硫化氢(H2S)是否通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(DOX)引起的损伤。方法应用DOX处理心肌细胞建立心肌细胞损伤模型。为观察H2S的保护作用,在DOX处理心肌细胞前,应用400μmol/L硫氢化钠(NaHS,为H2S的供体)预处理细胞30 min。Western blot法测定p38MAPK蛋白的表达水平;应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)比色法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果在15~60min的时间范围内,5μmol/L DOX呈时间依赖性地上调心肌细胞磷酸化p38MAPK的表达水平;在DOX作用心肌细胞前,400μmol/L NaHS预处理30 min能明显地抑制DOX对p-p38MAPK表达的上调作用,并能显著地阻断DOX引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高、凋亡细胞数量和ROS生成均减少;与NaHS的保护作用相似,p38MAPK的抑制剂SB203580(3μmol/L)预处理60 min能保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的损伤。结论 p38MAPK通路参与DOX对心肌细胞的损伤作用;H2S可通过抑制p38MAPK通路保护心肌细胞对抗DOX诱导的损伤。
- 徐文明郭润民林建聪沈宁陈培熹冯鉴强
- 关键词：硫化氢P38丝裂原活化蛋白激酶阿霉素心肌细胞活性氧
- 热休克蛋白90在氯化钴对抗血清-葡萄糖剥夺引起的心肌细胞损伤中的作用被引量：2
- 2012年
- 目的观察氯化钴(CoCl2)对血清-葡萄糖剥夺(SGD)诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响,探讨热休克蛋白90(HSP90)在其中的作用。方法用SGD的方法处理H9c2心肌细胞,建立缺血性损伤的心肌细胞模型。在SGD过程中同时给予CoCl2处理;在应用SGD和CoCl2之前给予HSP90抑制剂(17-AAG)预处理。处理结束后,检测细胞存活率、HSP90的表达、细胞内活性氧(ROS)以及线粒体膜电位(ΔΨm)。结果 SGD处理可引起H9c2心肌细胞损伤,表现为细胞存活率降低、胞内ROS水平升高及ΔΨm丢失。SGD处理还可降低H9c2心肌细胞内HSP90的表达。在50～100μmol.L-1浓度范围内,CoCl2处理可保护H9c2心肌细胞对抗SGD引起的存活率降低,100μmol.L-1CoCl2还可对抗SGD引起的ROS水平升高和ΔΨm丢失。100μmol.L-1CoCl2可时间依赖性地促进胞内HSP90的表达。在50～200μmol.L-1浓度范围内,CoCl2处理可对抗SGD诱导的HSP90表达下调,其中100μmol.L-1的CoCl2具有最强的拮抗作用。17-AAG通过抑制HSP90的作用可明显减弱CoCl2诱导的上述心肌细胞保护作用。结论 CoCl2可保护H9c2心肌细胞对抗SGD引起的损伤,其机制之一与上调HSP90表达有关。
- 何金莲董颀林春喜张梅王秀玉郭润民沈宁冯鉴强杨春涛
- 关键词：氯化钴心肌保护热休克蛋白90氧化应激线粒体膜电位
