广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0443004-36)
- 作品数：3 被引量：10H指数：3
- 相关作者：田春林刘晓泉万孝玲杨雯秦小虎更多>>
- 相关机构：广西医科大学广西壮族自治区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫表面抗原SAG4基因的克隆、表达和鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的对弓形虫表面抗原SAG4基因进行克隆、表达和免疫反应性分析。方法根据弓形虫RH株SAG4基因序列(GenBank登录号为AF340224.1)设计引物,体外扩增目的基因,并将其克隆至pMD19-T载体,经PCR和双酶切鉴定并测序,亚克隆至pET28a(+)质粒,转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析SAG4重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Westernblot-ting)分析该蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清的免疫反应性。结果扩增获得的目的基因片段为537bp。生物信息学分析表明重组基因编码产物为弓形虫SAG4抗原,是一种外膜蛋白。重组菌经IPTG诱导后,以包涵体的形式稳定表达SAG4。Westernblotting分析结果表明,诱导表达的蛋白能被弓形虫慢性感染小鼠血清识别,其相对分子质量(Mr)约为18740。结论重组蛋白SAG4有一定的免疫反应性。
- 杨雯万孝玲田春林王卫群刘晓泉
- 关键词：弓形虫克隆表达免疫反应性
- 刚地弓形虫SAG4基因的体外扩增及序列分析被引量：4
- 2007年
- 目的:扩增刚地弓形虫R.H株SAG4基因,对SAG4基因编码序列进行结构和初步的功能预测。方法:提取弓形虫R.H株基因组DNA,然后进行目的基因的PCR体外扩增、序列测定和分析。结果:从弓形虫R.H株基因组DNA中扩增出575bp的基因片断,利用生物信息学技术鉴定其为R.H株SAG4基因分子片段,转译后的蛋白质结构稳定,能形成多个结构域。结论:成功地获得了刚地弓形虫R.H株SAG4基因片段,为弓形虫病的抗原诊断及分子疫苗研究奠定基础。
- 田春林石焕焕秦小虎刘晓泉万孝玲
- 关键词：扩增刚地弓形虫
- 弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆表达、纯化与鉴定被引量：4
- 2010年
- 目的:构建弓形虫SAG1基因原核表达质粒,诱导表达重组蛋白SAG1,分离纯化并检测其免疫反应性。方法:设计一对特异引物,体外扩增SAG1目的基因(双酶切纯化后)定向克隆至质粒pET29a(+)中,转化到大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,采用PCR、双酶切和测序等方法鉴定,并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况,经镍离子柱纯化重组蛋白后,用蛋白质印迹(Western blotting)分析与小鼠弓形虫阳性血清的免疫反应性。结果:重组质粒经PCR、双酶切反应和测序鉴定,产物的大小与结构均与预期值相符,经IPTG诱导后,稳定表达相对分子量(Mr)为28950的蛋白,纯化后的重组蛋白经Western blotting分析显示,与小鼠弓形虫感染血清有特异性反应条带。结论:成功构建重组表达质粒pET29a(+)-SAG1,使弓形虫表面抗原SAG1在体外获得表达,分离纯化的SAG1重组蛋白有免疫反应性。
- 杨雯田春林朱穗京刘晓泉
- 关键词：弓形虫SAG1基因克隆表达免疫反应性
