国家自然科学基金(31140072)
- 作品数：13 被引量：35H指数：3
- 相关作者：刘学政左中夫朱德淼刘万鹏吴遥更多>>
- 相关机构：辽宁医学院辽宁中医药大学锦州医科大学更多>>
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- 三七三醇皂苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用被引量：12
- 2013年
- 目的探讨三七三醇皂苷(PTS)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组及治疗组,糖尿病组及治疗组腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病动物模型,治疗组给予PTS 50 mg·kg-1·d-1灌胃,1个月后免疫荧光组化双标检测Nogo受体与RGC特异性标志物Brn3a的共存情况,Western blot检测视网膜Nogo受体表达,试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)含量,HE染色观察RGC数量。结果 Brn3a与Nogo受体于视网膜内大量共存。与对照组相比,糖尿病组视网膜Nogo受体表达上调,MDA含量增加,RGC数量减少(均P<0.001);与糖尿病组相比,治疗组视网膜Nogo受体表达减少,MDA含量降低,RGC数量增加(P<0.001)。结论 PTS可能通过抑制糖尿病大鼠视网膜RGC内Nogo受体的表达,抑制视网膜氧化应激,从而保护糖尿病视网膜RGC。
- 朱德淼刘学政
- 关键词：皂苷类视网膜神经节细胞髓磷脂蛋白质类氧化性应激
- NgR-Rock信号通路在高糖损伤RGC中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨NgR-Rock信号通路在高浓度葡萄糖损伤视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中的机制。方法:实验分4组:对照组、高糖组、SiNgR组(高糖培养基中加入AAV2-siNgR病毒)和SiRNA空白组(高糖培养基中加入阴性核甘酸序列)。在培养的第3d观察细胞生长状态;Western blot检测NgR、Rock及F-actin的表达;MTT法检测细胞活力;利用F-actin免疫组织化学染色显示细胞形态。结果:与对照组相比,高糖组及SiRNA空白组细胞体积缩小,突起较少,细胞折光性增强;NgR及Rock的表达明显上调,F-actin表达减少,细胞活力下降(P<0.05);而SiNgR组与对照组相比NgR、Rock及F-actin的表达,细胞活力无明显改变(P>0.05)。结论:NgR-Rock信号通路激活可能是导致高糖环境中RGC损伤的重要机制之一。
- 韩玉芝刘学政左中夫
- 关键词：视网膜神经节细胞NGRF-ACTIN细胞活力
- NgR-Rhoa-Rock信号通路在早期糖尿病大鼠RGC凋亡中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的:研究NgR-Rhoa-Rock信号通路在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。方法:健康SD大鼠,以50mg/kg体质量单次腹腔注射1%链脲佐菌素的方法处理,以血糖值大于16.7mmol/L定为糖尿病模型;然后随机分成3组,每组10只。另取10只健康SD大鼠作对照组。再依次对4组大鼠进行双侧眼球玻璃体腔内注射NgR小干扰病毒10μL(siRNA组)、NgR小干扰病毒稀释液10μL(DM组)、NgR小干扰病毒阴性对照液10μL(siRNA空白组)、NgR小干扰病毒稀释液10μL(正常对照组),正常喂养。期间对血糖、体质量等一些生命指标进行观查、测量并记录。12wk后,行视网膜Western blot检测NgR、Rhoa的表达,HE染色、TUNEL染色。结果:Western检测:与正常对照组相比,DM组和siRNA空白组中NgR、Rhoa表达明显增加(P<0.01),而siRNA组无明显变化(P>0.05);与DM组和siRNA空白组相比,siRNA组NgR、Rhoa表达明显下调。HE染色:与正常对照组相比,三组模型鼠均有不同程度节细胞排列紊乱、形态不规则、间距不一致;与DM组和siRNA空白组相比,siRNA组节细胞在排列顺序、外形大小等有一定程度改善。TUNEL染色:与正常对照组相比,三组模型鼠均有节细胞凋亡;与DM组和siRNA空白组相比,siRNA组凋亡细胞数量较少,细胞外形有明显改善。结论:DM时大鼠视网膜NgR、Rhoa表达上调,抑制NgRRhoa-Rock可以改善糖尿病视网膜神经节细胞的凋亡。
- 付云杰刘学政
- 关键词：糖尿病视网膜神经节细胞凋亡
- 黄芪甲苷对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞的影响被引量：9
- 2015年
- 目的探讨黄芪甲苷(AS)对糖尿病大鼠视网膜氧化应激的影响及其对Müller细胞的保护作用。方法利用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组及AS治疗组,3个月后试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,免疫组化及Western blot检测视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)变化,Western blot检测Müller细胞功能性蛋白酶——谷氨酰胺合成酶(GS)表达变化。结果与对照组相比,糖尿病组视网膜MDA含量增加,GSH含量减少,GFAP表达增加,GS表达减少(均<0.01),AS治疗组视网膜MDA及GSH含量、GFAP及GS表达较糖尿病组均无明显变化(均>0.05)。结论 AS抑制糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应,恢复视网膜Müller细胞功能性蛋白酶GS的表达。
- 焦伟炜刘学政
- 关键词：糖尿病视网膜病变氧化应激黄芪甲苷MÜLLER细胞
- Nogo受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨Nogo受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响及机制。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导30只糖尿病模型。分为对照组、糖尿病组、siNgR组、siRNA空白组,每组10只。siNgR组糖尿病大鼠玻璃体内注射Nogo受体反义核苷酸序列;siRNA空白组糖尿病大鼠玻璃体内注射阴性核苷酸序列。1个月后,免疫荧光组化检测Nogo受体与RGC标志物Brn3a的共存;以TUNEL染色观察RGC凋亡;试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)含量;Western blot检测视网膜Nogo受体及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达。结果 Nogo受体大量表达于视网膜RGC内,对照组、糖尿病组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为(3.68±0.47)、(8.07±1.24)、(7.54±1.53)及(5.12±0.62)μmol/g蛋白,RGC凋亡率分别为(5.1±0.2)%、(49.3±2.7)%、(45.6±1.8)%及(12.4±0.6)%,Nogo受体相对表达量分别为(0.18±0.07)%、(0.45±0.12)%、(0.40±0.09)%及(0.16±0.09)%,caspase-3相对表达量分别为(0.16±0.05)%、(0.40±0.18)%、(0.42±0.12)%及(0.17±0.08)%。与对照组相比,糖尿病组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡明显,Nogo受体及caspase-3表达上调,MDA含量增加(P<0.05)。与糖尿病组相比siNgR组视网膜RGC凋亡减少、Nogo受体及caspase-3表达下调、MDA含量降低(P<0.05)。结论 Nogo受体表达上调参与了糖尿病视网膜RGC凋亡,其机制可能与Nogo受体上调caspase-3表达、诱发视网膜氧化应激有关。
- 朱德淼刘学政
- 关键词：糖尿病视网膜神经节细胞细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3NOGO受体CASPASE
- 糜蛋白酶抑制剂保护糖尿病仓鼠肾功能的机制研究
- 2016年
- 目的观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机理。方法链脲佐菌素腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。通过分子生物学技术、免疫组织化学技术、免疫印记技术检测各组动物糜蛋白酶,RAS成分:ACE、肾素、ANG-I、ANG-II;氧化应激水平:8-Ohd G,NOX-4,p22phox,以及TGF-β1的表达情况。结果糜蛋白酶抑制剂抑制了糖尿病仓鼠肾内ANG-II升高,同时明显降低了8-OHd G分泌水平。NOX-4和p22phox染色表明糖尿病组血管球和肾小管区域氧化产物显著增高,而糜蛋白酶抑制剂抑制氧化产物的升高(P<0.01)。Western blot证实了糖尿病组血管球NOX-4和p22phox蛋白的水平较对照组高,糜蛋白酶抑制剂显著降低了其表达。血管球TGF-β1表达糖尿病组高于对照组,同样糜蛋白酶抑制剂治疗后大大降低了TGF-β1水平。结论糜蛋白酶抑制剂能保护糖尿病仓鼠的肾功能,其机制是通过降低肾内ANG-II水平和氧化应激水平来保护糖尿病肾脏损伤。
- 张孟姝刘金磊刘学政周红丽张荣明
- 关键词：氧化应激糖尿病仓鼠
- Nogo受体在早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨Nogo受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。方法:链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组,对照组;DM组;siNgR组:DM大鼠玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列;siRNA空白组:DM大鼠玻璃体内给予阴性核苷酸序列。1mo后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western-blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果:对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.74±0.49,7.21±0.96,6.41±1.34及4.02±0.53nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(P<0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(P>0.05)。结论:NgR表达增加是糖尿病RGC凋亡的重要原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达有关。
- 左中夫刘万鹏刘学政
- 关键词：糖尿病视网膜病变视网膜神经节细胞凋亡NGR
- 糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾功能保护作用的实验研究
- 2017年
- 目的:观察糜蛋白酶抑制剂对糖尿病仓鼠肾脏的保护作用,进而探讨其保护肾脏损伤的机制。方法:(1)通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射法制备仓鼠糖尿病模型。实验分为5组,每组8只。(2)通过Western blot检测各组动物糜蛋白酶抗体、血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin I-converting enzyme,ACE)、过氧化物酶4(NADPH oxidase-4,NOX-4)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶亚单位p22phox的表达情况。(3)通过免疫荧光检测各组动物糜蛋白抑制剂对血管紧张素系统(reninangiotensin system,RAS)的成分,氧化应激的影响。(4)通过q RT-PCR及Western blot检测糜蛋白抑制剂对人血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ANG-Ⅱ)来源的基质蛋白合成影响。结果:(1)免疫组化结果显示糖尿病组仓鼠肾小管和血管球糜蛋白酶表达明显。qRT-PCR结果显示糜蛋白酶m RNA水平较对照组普遍增高(P<0.01)。而胰岛素治疗后降至正常水平。(2)糜蛋白酶抑制剂抑制了糖尿病仓鼠肾内ANG-Ⅱ升高,同时明显降低了8-羟化脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHd G)分泌水平。(3)NOX-4和p22phox染色表明糖尿病组血管球和肾小管区域氧化产物明显增高,而糜蛋白酶抑制剂抑制氧化产物的升高(P<0.01)。(4)Western blot证实了糖尿病组血管球NOX-4和p22phox蛋白的水平较对照组高,糜蛋白酶抑制剂明显降低了其表达。(5)血管球转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)表达糖尿病组高于对照组,同样糜蛋白酶抑制剂治疗后大大降低了TGF-β1水平。结论:糜蛋白酶抑制剂能保护糖尿病仓鼠的肾功能,其机制是通过降低肾内ANG-Ⅱ水平和氧化应激水平来保护糖尿病肾脏损伤。
- 张孟姝刘金磊刘学政周红丽张荣明
- 关键词：肾脏氧化应激糖尿病仓鼠
- 抑制NGR对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用
- 2013年
- 目的探讨抑制Nogo蛋白受体(NGR)对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法尾静脉注射1%链脲佐菌素50mg/kg建立30只SD大鼠DM模型,分别向双侧眼球玻璃体腔内注射NGR小干扰RNA(siRNA)病毒10μl(A组,10只)、病毒稀释液10μl(B组,10只)和病毒阴性对照液10μl(C组,10只);另取10只正常SD大鼠(D组),同法注射病毒稀释液10μl。12周后,免疫组化法检测NGR在视网膜中的定位,Western blot检测NGR的表达,DNAladder检测各组细胞凋亡情况。结果 NGR主要表达于RGC。与D组相比,B、C组NGR表达明显上调(P<0.01),A组表达无明显变化(P>0.05)。B、C组RGC呈现明显的DNA ladder带,而A、D组未见明显DNA ladder带。结论抑制NGR的表达可减少DM的RGC凋亡。
- 刘万鹏刘学政左中夫
- 关键词：糖尿病视网膜神经节细胞
- 姜黄素对高浓度葡萄糖培养的RF/6A细胞活力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨姜黄素对高浓度葡萄糖培养的猴脉络膜-视网膜内皮细胞(rhesus choroidoretinal endothelial cell,RF/6A)活力的影响及其机制。方法:RF/6A分4组培养(n=6):对照组;高浓度葡萄糖组(培养基添加30mmol/L葡萄糖);姜黄素组(培养基添加30μmol/L姜黄素);姜黄素-葡萄糖组(培养基添加30mmol/L葡萄糖及30μmol/L姜黄素)。以噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测培养1,3,5d后各组细胞活力的变化;试剂盒检测分组5d后各组细胞丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western-blot检测分组5d后各组增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及抑癌基因p27蛋白(protein 27,p27)表达。结果:与对照组相比,高浓度葡萄糖组RF/6A活性明显降低,MDA含量增加,SOD活力降低,PCNA表达下调,p27表达上调(P<0.01);而姜黄素组及姜黄素-葡萄糖组RF/6A活力、MDA含量、SOD活力、PCNA与p27的表达均无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素维持高浓度葡萄糖培养的RF/6A活力,可能与姜黄素抑制高浓度葡萄糖诱发的氧化应激,恢复RF/6A的PCNA及p27蛋白表达有关。
- 张强左中夫刘学政
- 关键词：高浓度葡萄糖姜黄素氧化应激细胞活力
