国家自然科学基金(81171751)
- 作品数：11 被引量：49H指数：5
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- SDF-1/CXCR4信号轴促进退变椎间盘胞外基质降解的研究被引量：5
- 2017年
- [目的]探讨SDF-1/CXCR4信号轴对于退变椎间盘胞外基质的影响及其潜在的作用机制。[方法]分别从年龄相匹配的椎间盘突出症和脊柱骨折手术患者中获取椎间盘组织,通过术前磁共振(MRI)采用Pfirrmann分级对椎间盘样本进行退变程度分组。免疫组化和western blot检测两个组椎间盘组织SDF-1、CXCR4、MMP-3,MMP9,Collagen Ⅱ和Aggrecan的表达。对取自椎间盘突出症患者的组织进行分离,细胞原代培养。取第3~6代细胞加入100ng/ml SDF-1或转染CXCR4小干扰RNA(siRNA)后共培养24 h,荧光定量PCR和western blot检测CXCR4、Collagen Ⅱ和Aggrecan的表达,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。为进一步探讨其潜在的分子机制,NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)或CXCR4-siRNA转染髓核细胞后,观察NF-κB的主要基团P65磷酸化水平(p-P65)及核转移情况,胞外基质的表达和细胞凋亡水平是否发生改变。[结果]通过MRI的Pfirrmann分级标准,椎间盘突出组的分级为Grade Ⅲ~Ⅴ级,而脊柱骨折组的分级为Grade Ⅰ、Ⅱ级,分别定义为退变组和正常组。通过检测两组未进行处理的椎间盘组织发现,SDF-1、CXCR4、MMP-3和MMP-9在退变组中表达增高,而胞外基质的主要成分Collagen Ⅱ和Aggrecan表达则在退变组织中明显降低。而体外细胞实验结果显示,SDF-1处理后CXCR4的表达明显增高,同时伴随细胞凋亡的增高,而Collagen Ⅱ、Aggrecan的表达则显著降低,但这一作用可以随着CXCR4被siRNA靶向沉默后受到明显抑制。作者进一步采用PDTC或CXCR4-siRNA处理细胞后发现,SDF-1可以明显提高p-P65表达水平,促进P65基团的核转移,而这些作用随着CXCR4表达降低而受到抑制。此外PDTC抑制NF-κB活性后,细胞凋亡水平明显下降,而Collagen Ⅱ和Aggrecan的表达则明显上升。[结论]SDF-1/CXCR4信号轴在退变椎间盘中表达增高,它可以促进胞外基质的降解,增加细胞的凋亡水平,其潜在的机制通过调控NF-κB的活性
- 何斌沈皆亮许圣茜郝杰胡侦明
- 关键词：椎间盘退变SDF-1/CXCR4NF-ΚB胞外基质细胞凋亡
- 白藜芦醇恢复去分化正常髓核细胞表型的实验研究被引量：6
- 2013年
- 目的研究体外单层培养与藻酸盐微球立体培养对人正常髓核细胞分化的影响,并探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)恢复藻酸盐微球立体培养下去分化髓核细胞表型的调节机制。方法取6例腰椎爆裂骨折患者自愿捐赠的正常髓核组织分离培养髓核细胞,并行细胞鉴定;取单层培养的第1、3、5、7代髓核细胞分别行形态学观察、β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色观察细胞衰老情况及甲苯胺蓝染色观察蛋白多糖表达。分别取单层培养和藻酸盐微球立体培养的第1代髓核细胞检测细胞增殖情况。取立体培养1周的第7代髓核细胞随机分为立体培养空白组(A组)、RES组(B组)、沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2homolog 1,SIRT1)-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)+RES组(C组)、阴性对照-siRNA+RES组(D组),另设置髓核细胞单层培养空白组(E组),行相应培养后采用Western blot检测SIRT1、聚蛋白多糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原蛋白表达,实时荧光定量PCR检测SIRT1 mRNA表达水平。结果细胞鉴定提示培养细胞为髓核细胞。形态学观察及SA-β-gal、甲苯胺蓝染色示,在体外连续单层培养条件下,正常髓核细胞易发生去分化,且随着传代次数增加趋势愈明显。藻酸盐微球立体培养48 h内髓核细胞增殖显著低于单层培养(P<0.05),但能显著提高去分化髓核细胞SIRT1、Ⅱ型胶原与Aggrecan蛋白的表达,E组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);与A组相比,B组3种蛋白表达显著提高(P<0.05)。C组SIRT1 mRNA和蛋白表达均受明显抑制,显著低于B、D组(P<0.05),Ⅱ型胶原与Aggrecan蛋白表达也显著低于B、D组(P<0.05)。结论连续体外单层培养条件下,髓核细胞增殖速度较快,但在培养过程中易发生去分化现象;而在藻酸盐微球立体培养条件下,RES可以恢复去分化髓核细胞表型,合成更多细胞外基质,这一机制与
- 沈皆亮胡侦明钟小明王大武徐林飞
- 关键词：髓核细胞细胞表型白藜芦醇
- 白藜芦醇干预对已退变椎间盘终板软骨细胞SIRT1表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨不同浓度及不同时间的白藜芦醇干预对退变椎间盘终板软骨细胞沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达的影响。方法老年患者的终板软骨细胞培养、传代,P2代细胞随机分组,分别用不同浓度及不同作用时间的白藜芦醇干预,终止培养后检测SIRT1蛋白及mRNA表达水平。结果与空白对照组相比较,DMSO组SIRT1蛋白及mRNA表达无显著差异(P>0.05);白藜芦醇干预的浓度在12.5μmol/L、作用24 h,以及浓度在50μmol/L、作用12 h以上时能够显著促进已退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1蛋白及mRNA(P<0.05)。结论白藜芦醇干预可促进退变椎间盘终板软骨细胞表达SIRT1蛋白及mRNA,且该作用呈现浓度、时间依赖关系;0.1%DMSO对细胞表达SIRT1蛋白无抑制作用。
- 钟小明胡侦明沈皆亮甘强郝杰
- 关键词：白藜芦醇退变SIRT1SIRT1MRNA
- 低强度脉冲超声通过PI3K/Akt通路促进人退变髓核细胞合成细胞外基质被引量：7
- 2013年
- 目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人退变髓核细胞合成细胞外基质的影响及机制。方法取人腰椎退变髓核组织,进行髓核细胞的分离、培养、鉴定,取P3代细胞转至藻酸钙凝珠培养。实验分组如下:LIPUS组:超声刺激1周,20 min/d;对照组:不予超声刺激同条件培养1周;LY294002组:超声刺激并加入LY294002共培养1周。应用ELISA法检测上清中髓核细胞分泌的aggrecan和Ⅱ型胶原(Col2α1);RT-PCR法检测细胞中aggrecan和Col2α1在mRNA水平的表达差异;Western blot法检测细胞中aggrecan、Col2α1、Akt及p-Akt的表达差异。结果予以LIPUS刺激后,上清中的aggrecan和Col2α1浓度较对照组升高(P<0.05),细胞内aggrecan和Col2α1在mRNA及蛋白水平的表达与对照组比较均有增高(P<0.05),Akt的表达无明显变化(P>0.05),p-Akt的表达增高(P<0.05),加入特异性抑制剂LY294002后,aggrecan和Col2α1的合成明显降低(P<0.05)。结论低强度脉冲超声能通过PI3K/Akt信号通路促进藻酸钙凝珠立体培养的人退变髓核细胞合成细胞外基质。
- 张晓军胡侦明郝杰沈皆亮
- 关键词：低强度脉冲超声PI3K/AKT通路细胞外基质
- 血红素氧合酶-1通过NF-κB信号通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡被引量：9
- 2018年
- 目的探讨血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的作用及机制。方法采用免疫组化和Western blot检测正常(LVF组,标本来源于年轻的椎体骨折行手术治疗的患者)及退变(IDD组,标本来源于椎间盘退变性疾病行手术治疗的患者)人椎间盘髓核组织中HO-1和磷酸化的P65(p-P65)的表达差异;体外培养退变髓核细胞,通过IL-1β处理增加髓核细胞凋亡,再用载HO-1质粒的慢病毒及小干扰RNA处理髓核细胞后检测凋亡的变化;通过P65抑制剂PDTC抑制p-P65表达后检测髓核细胞凋亡的变化。结果免疫组化结果显示,HO-1在IDD组中的阳性表达率为(18.58±0.59)%,明显低于LVF组(58.26±2.48)%(P<0.05),而p-P65在IDD组中的阳性表达率为(40.27±2.03)%,明显高于LVF组(19.75±1.98)%(P<0.05)。IL-1β能增加退变髓核细胞的凋亡,同时引起p-P65表达增加,HO-1-si RNA抑制HO-1表达后可以进一步提高髓核细胞凋亡率(P<0.05),而过表达HO-1处理细胞后能够降低IL-1β引起的凋亡增加,同时降低p-P65表达(P<0.05)。使用P65抑制剂PDTC抑制髓核细胞P65信号通路后,髓核细胞凋亡率明显降低,此时沉默HO-1不能增加髓核细胞凋亡。结论 HO-1能够通过NF-κB通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡。
- 张雪梅江维
- 关键词：血红素氧合酶-1P65髓核凋亡
- HO--1通过诱导自噬抑制NF--κB通路缓解IL--1β介导的人源髓核细胞凋亡
- 目的：探讨血红素氧合酶-1(HO-1)通过自噬调控人椎间盘髓核细胞凋亡的作用机制。 方法：收集16例腰椎间盘突出症患者和6例腰椎骨折患者手术切除的椎间盘髓核组织，首先通过免疫组化和Westernblot技术分析两组样本...
- 邹略滔
- 关键词：血红素氧合酶-1椎间盘髓核细胞NF-ΚB信号通路
- 文献传递
- 白藜芦醇通过上调SIRT1促进退变髓核细胞胞外基质合成被引量：5
- 2012年
- 目的:研究白藜芦醇(RES)对人退变椎间盘髓核细胞(DNPCs)合成细胞外基质(ECM)的影响。方法:对人退变椎间盘髓核组织进行分离、单层培养细胞鉴定、藻酸盐培养。取原代藻酸盐培养细胞分别用0、12.5、25、50、100、200μmol/L的RES分别刺激DNPCs 12、24、48 h,Western blot法检测沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating typeinformation regulation 2 homolog 1,SIRT1)、Ⅱ型胶原(Colla2α1)、蛋白聚糖聚合物(aggrecan)蛋白表达,real-time荧光定量PCR检测SIRT1 mRNA表达水平。用SIRT1-siRNA转染后再与100μmol/L RES共培养24 h,观察Colla2α1、aggrecan的蛋白表达。结果:RES上调SIRT1 mRNA和蛋白水平的表达,促进DNPCs合成ECM的表达,与对照组相比具有统计意义(P<0.05)。siRNA靶向沉默SIRT1表达后,再加入RES刺激,观察到Colla2α1与aggrecan的蛋白表达与对照组相比显著下降(P<0.05)。结论:RES可刺激DNPCs ECM的合成,且呈现一定的量效关系,这种调节作用与SIRT1的活性有关。
- 沈皆亮胡侦明钟小明张晓军江维
- 关键词：白藜芦醇细胞外基质SIRT1
- 椎间盘退变相关基因研究进展被引量：1
- 2015年
- 在全球日益老龄化的趋势下,椎间盘退变作为一种与年龄相关的疾病,因其高发病率和高致残率日益成为一个严重的社会-经济问题。现今临床上对其诊疗手段及其效果都非常有限,尤其对于退变早期的椎间盘还缺乏有效的介入方法。基因治疗的兴起,为椎间盘退变的治疗带来了新的方法学选择,现就椎间盘退变相关基因的研究进展作一综述,以期为其潜在治疗靶点的选择提供一定的理论依据。
- 任宏磊胡侦明沈皆亮郝杰
- 关键词：椎间盘退变基因治疗靶点
- 白藜芦醇通过调节SIRT1活性促进退变椎间盘终板软骨细胞合成细胞外基质被引量：4
- 2012年
- 目的探讨白藜芦醇(Res)干预对退变椎间盘终板软骨细胞(DEC)合成细胞外基质的影响。方法老年腰椎间盘突出症患者的终板软骨细胞培养、传代,P2代细胞随机分为5组,即Res组、二甲基亚砜对照组、Res+尼克酰胺(Nam)组、Res+siRNA转染组及空白对照组。各组进行对应处理后检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、Ⅱ型胶原(COLA2)、蛋白聚糖聚合物(aggrecan)及SIRT1 mRNA表达水平。结果 Res干预上调DEC SIRT1 mRNA及蛋白的表达,促进细胞外基质(COLA2、aggrecan)的合成;Nam及siRNA干预分别有效抑制了SIRT1酶活性及SIRT1 mR-NA的表达,并抑制了细胞外基质的合成。结论 Res可促进DEC合成细胞外基质,抑制椎间盘软骨终板退变,其机制与调节SIRT1活性有关。
- 钟小明胡侦明沈皆亮王大武甘强郝杰
- 关键词：白藜芦醇SIRT1退变
- 沉默信息调节因子2同源蛋白1通过Akt/PKB通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡被引量：6
- 2012年
- 沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1/sirtuin 1)是组蛋白去乙酰化酶,参与表观遗传修饰调节,促进多种细胞的生存,但目前对椎间盘髓核细胞的作用未见研究.为了阐明临床不同来源的椎间盘髓核手术标本SIRT1的表达变化,用免疫组化、定量RT-PCR、Western blot方法对中老年腰椎间盘突出症病人及青壮年腰椎骨折病人术中髓核标本进行研究,表明老年人髓核SIRT1的mRNA及蛋白质水平均显著低于青壮年的髓核.同时,用resveratrol(SIRT1激动剂)、烟碱(SIRT1抑制剂)、SIRT1-siRNA对培养的退变髓核细胞进行处理或转染后,用流式细胞仪检测凋亡率变化,结果表明resveratrol能显著促进退变髓核细胞生存,相反,当烟碱或SIRT1-siRNA转染后则显著促进髓核细胞凋亡.为了进一步分析SIRT1抑制退变髓核细胞凋亡的分子机制,应用Western blot及抑制剂方法研究表明,当SIRT1-siRNA转染髓核细胞后能降低磷酸化Akt蛋白的表达,而白藜芦醇处理则促进磷酸化Akt蛋白的表达,当用LY294002(PI3K抑制剂)或Akt-siRNA转染后显著抑制髓核细胞的生存率.研究结果表明,SIRT1通过Akt通路能显著抑制髓核细胞凋亡,为深入揭示退变性椎间盘疾病的病理生理及生物治疗提供新的思路和靶点.
- 王大武胡侦明郝杰何斌甘强钟小明沈皆亮方济
- 关键词：髓核细胞凋亡AKT通路椎间盘
