国家自然科学基金(81072147)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 相关作者：王黎阳赵浏阳柳满然彭琼乐孙艳更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳腺癌前病变组织原代成纤维细胞生物学特征初步研究被引量：2
- 2012年
- 目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。
- 孙艳彭琼乐王黎阳赵浏阳袁泉李俊柳满然
- 关键词：微环境成纤维细胞细胞周期
- 人端粒酶蛋白催化亚单位基因逆转录病毒真核表达质粒的构建及其对人乳腺癌相关成纤维细胞增殖的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建人端粒酶蛋白催化亚单位(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)逆转录病毒真核表达质粒,并检测其在人乳腺癌相关的成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)中的表达及其对CAF增殖的影响。方法扩增pIRES-EGFP-hTERT质粒,酶切回收hTERT片段,正向克隆至逆转录病毒载体pBABE-puro上,构建重组质粒pBABE-puro-hTERT,转染PT67细胞,进行逆转录病毒的包装。将PT67细胞上清感染原代培养的人乳腺癌CAF,荧光定量PCR和Westernblot分别检测hTERT基因在人乳腺癌CAF中的转录和表达,流式细胞术检测细胞的增殖情况。结果重组质粒pBABE-puro-hTERT经酶切和测序证实构建正确;与未处理的人乳腺癌CAF和感染pBABE-puro的细胞相比,感染重组质粒的人乳腺癌CAF中hTERT基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显增强,其增殖指数也明显增加(P<0.05)。结论成功构建了hTERT基因逆转录病毒真核表达质粒,其能增强人乳腺癌CAF的增殖能力,为乳腺癌微环境CAF的研究提供了良好的细胞模型。
- 彭琼乐王黎阳赵浏阳孙艳柳满然彭惠民
- 关键词：逆转录病毒乳腺癌细胞增殖
- 人乳腺癌微环境中癌相关成纤维细胞的生物学特征被引量：4
- 2013年
- 目的:研究人乳腺癌微环境中癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated ibroblasts,CAFs)的增殖、黏附、迁移、侵袭和凝胶收缩能力。方法:首先通过蛋白质印迹法检测细胞中纤黏蛋白(ibronectin,FN)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth-muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白(ibroblast activation protein,FAP)的表达来鉴别验证原代分离培养的CAFs与正常成纤维细胞(normal ibroblasts,NFs)。然后采用罗氏xCellingence活细胞分析系统、细胞计数法和CCK-8(cell counting kit-8)法比较CAFs与NFs的增殖差异。再通过细胞黏附实验、罗氏xCellingence分析系统、Transwell小室侵袭实验和凝胶收缩实验分别比较CAFs与NFs细胞的黏附、迁移、侵袭和收缩的能力。结果:原代分离培养的人乳腺癌CAFs细胞和NFs细胞均生长状态良好,增殖活跃,生长曲线的线型及趋势均符合细胞生长特点,但CAFs细胞的增殖能力明显高于NFs细胞。与NFs细胞相比,CAFs细胞的黏附、迁移、侵袭和收缩能力均明显增强。结论:人乳腺癌微环境中的CAFs细胞与NFs细胞的增殖与迁移存在明显差异,与NFs细胞相比,CAFs细胞具有较强的增殖、黏附、迁移、侵袭和收缩能力。
- 彭琼乐罗浩军孙艳韩明利王黎阳赵浏阳柳满然
- 关键词：乳腺癌肿瘤形成过程细胞黏附肿瘤侵润细胞收缩
- 人乳腺癌相关成纤维细胞对MDA-MB-231细胞的影响
- 2013年
- 目的探讨人乳腺癌相关成纤维(cancer associated fibroblasts,CAFs)细胞对MDA-MB-231细胞生长、增殖和侵袭的影响。方法实验分2组:MDA-MB-231细胞单独培养组(对照组)和MDA-MB-231与CAFs细胞共培养组(实验组)。以细胞计数法观察人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞生长的影响;运用流式细胞术检测人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞周期的影响;采用条件培养基,通过Transwell小室侵袭实验观察人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。结果与对照组比较,实验组MDA-MB-231细胞的生长速度明显增强(P<0.05),细胞周期S期细胞百分比[(32.35±4.50)%]和细胞增殖指数PI[(42.91±2.44)%]明显增高(P<0.05);在CAFs细胞的条件培养基下,MDA-MB-231细胞的侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论人乳腺癌CAFs细胞能够显著促进MDA-MB-231细胞的生长、增殖和侵袭。
- 彭琼乐杨得志赵浏阳王黎阳孙艳柳满然
- 关键词：MDA-MB-231细胞
- 人乳腺癌相关成纤维细胞的原代培养及其生物学特性被引量：9
- 2012年
- 目的原代培养人乳腺癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF),并检测其生物学特性。方法采用胶原酶消化培养法对26份乳腺癌患者标本进行原代细胞分离培养,倒置显微镜下观察人乳腺癌CAF的形态学特性,免疫荧光染色法鉴定所分离培养的人乳腺癌CAF纤维连结蛋白(Fibronectin,FN)和成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activated protein,FAP)的表达,并通过MTT法和细胞计数法绘制细胞生长曲线。结果胶原酶消化法的最适酶浓度为0.12%,最适消化时间为10 h。原代培养23份成功,3份失败。培养成功的细胞贴壁生长,形态完整,生长状态良好,背景清晰,有明显的对数生长期,并可传代培养。培养的细胞FN和FAP表达阳性,表明原代培养的CAF为乳腺癌CAF。结论胶原酶消化培养法适合人乳腺癌CAF的原代培养,通过该方法可建立理想的人乳腺癌CAF体外实验模型。
- 彭琼乐孙艳赵浏阳王黎阳柳满然彭惠民
- 关键词：乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞原代培养
