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尼罗罗非鱼AFLP技术体系的优化被引量：3: 2006年; 对AFLP技术从限制性内切酶水解、扩增条件、检测方法3个方面作了一些改进,建立了一套稳定的且简便易行的实验条件,同时用这种改进的AFLP技术体系对尼罗罗非鱼基因组DNA的多态性进行了初步研究,得到了良好的DNA的多态性检测效果,不仅分辨力较高,而且带型稳定。; 杨东余来宁; 关键词：分子标记 AFLP技术尼罗罗非鱼

中华鲟胚胎细胞的冷冻保存及其核移植被引量：1: 2007年; 为了保存濒危鱼类中华鲟种质资源,对其囊胚细胞和原肠细胞进行了冷冻保存和核移植试验。用二甲亚砜(DMSO)、1,2-丙二醇(PG)、羟乙基淀粉(HES)3种抗冻剂,配制4种冷冻保护液:CP1(12%D)、CP2(10%P)、CP3(8%D+6%E)、CP4(7%P+6%E),冷冻细胞存活率分别为47.4%±4.7%、64.4%±3.6%、54.7%±4.7%、76.7%±5.7%,CP4保存效果最好,说明添加非渗透型抗冻剂羟乙基淀粉能提高冷冻保存细胞的存活率。比较了两种冷冻方法,发现细胞在-7℃平衡30min之后直接投入液氮的一步冷冻降温法是可行的。对不同发育时期的胚胎细胞冷冻存活率进行了比较,结果表明原肠细胞冷冻存活率(64.4%±11.8%)明显比囊胚细胞的(57.1%±11.2%)高(P<0.05)。用冷冻复苏后的囊胚细胞和原肠细胞作供体,以中华鲟未受精卵作受体进行核移植,各移植了469和392枚卵,分别获得了5尾和2尾克隆鱼,核移植成功率分别为1.1%和0.5%。表明可通过冷冻保存胚胎细胞结合核移植技术保存鱼类种质资源。; 余来宁危起伟张繁荣杨东姚雁鸿刘红艳; 关键词：中华鲟胚胎细胞冷冻保存核移植

中华鲟生长激素基因的cDNA序列结构与进化分析被引量：2: 2009年; 采用RT-PCR方法从中华鲟脑垂体RNA中克隆出645bp的生长激素(growth hormone,GH)cDNA全序列,推导出的GH由214个氨基酸组成,其中前24个氨基酸为信号肽部分。与其它脊椎动物的37个极端保守的氨基酸残基相比,中华鲟有1个氨基酸的差异,即152位上的天冬氨酸变为谷氨酸。中华鲟GH氨基酸保守区可分为5个区域,GD1～GD4区域位于分子外侧,为GH与受体结合区域,与GH活性有关,GD5位于分子内部,与GH分子结构和稳定性有关。中华鲟与俄罗斯鲟的GH序列遗传距离最小,为0.012;与弓鳍鱼、4种哺乳动物和欧洲鳗鲡的遗传距离分别为0.202、0.249～0.260和0.370;而与其它11种硬骨鱼类的遗传距离较大,为0.514～0.601。NJ系统进化树结果显示,中华鲟、俄罗斯鲟、弓鳍鱼、4种哺乳动物和欧洲鳗鲡聚成一支,而其它11种硬骨鱼类聚为另一支。以上结果表明,中华鲟GH与俄罗斯鲟、弓鳍鱼、哺乳动物和欧洲鳗鲡的GH更为相似,而与其它硬骨鱼类的GH同源性较低。; 刘红艳张繁荣杨东余来宁; 关键词：中华鲟生长激素 CDNA序列进化分析

中华鲟囊胚细胞的长期保存及其克隆胚胎发育观察被引量：2: 2008年; 为保存濒危鱼类中华鲟种质资源,在0、-20、-80、-196℃4种不同的温度下对其囊胚细胞进行了长期保存试验,细胞存活期分别为10d、30d和2年,在液氮中(-196℃)保存2年后仍有60.7%存活率;用冷冻复苏后的细胞进行核移植,并对克隆胚胎的发育进行了观察.共移植417枚卵,获得2尾克隆幼鲟,成功率为0.48%,表明长期冷冻保存的囊胚细胞仍具有发育全能性,通过克隆技术能获得存活个体.此项技术为濒危物种的保护开辟了新途径.; 余来宁杨东危起伟张繁荣姚雁鸿刘红艳; 关键词：中华鲟囊胚细胞克隆胚胎发育

RAPD和AFLP在分析尼罗罗非鱼遗传多样性研究中的应用比较被引量：12: 2006年; 比较了RAPD和AFLP标记技术在尼罗罗非鱼遗传多样性研究中的应用。共筛选20个RAPD引物和7个AFLP引物组合,检测到AFLP标记的有效等位基因数和平均多态信息量稍低于RAPD标记,但AFLP标记的多态性检测效率显著高于RAPD标记。两种分子标记所得遗传相似系数接近。结果表明:AFLP和RAPD适宜于基因组DNA检测,但AFLP优于RAPD。; 杨东余来宁; 关键词：AFLP RAPD 尼罗罗非鱼

尼罗罗非鱼Dmrt1基因克隆及在不同组织中的表达被引量：7: 2008年; Dmrt1基因是Dmrt基因家族的一个重要成员,在动物性别决定过程中发挥重要作用。参照小鼠Dmrt1基因DM保守区及有关文献,设计了1对简并引物,扩增了尼罗罗非鱼的Dmrt1基因,并对扩增产物进行了亚克隆与测序。结果在雌雄尼罗罗非鱼个体中各获得1个预期的基因片段,长度为140bp,序列无性别差异。序列同源性分析表明,尼罗罗非鱼Dmrtl基因DM盒区核苷酸序列与人和鼠相应基因的同源性为78%;编码的氨基酸序列与人和鼠相应基因编码序列的同源性为89%,充分显示了Dmrt1基因在进化上的高度保守性。进一步根据获得的Dmrt1序列,设计1对特异引物,采用RT-PCR技术对尼罗罗非鱼不同组织Dmrt1基因的表达进行了研究。结果发现,Dmrt1只在精巢中特异表达,在卵巢、眼、肠、鳃及心脏组织中无表达,提示该基因在性别分化和功能维持上可能具有重要作用。; 杨东余来宁; 关键词：尼罗罗非鱼 DMRT1

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国家自然科学基金(30370701)