山西省自然科学基金(2008011063)
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王伟李江姣聂宇梁爱华许静更多>>
- 相关机构：山西大学中国医学科学院阜外心血管病医院中国医学科学院阜外心血管医院更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- Rab11的结构特征、效应因子与功能被引量：3
- 2008年
- Rab11是Rab小分子GTP酶家族的成员。在细胞内膜泡再循环途径中,Rab11作为重要调节因子,介导膜泡从内体向质膜的运输。近年来随着对Rab11研究的深入,人们发现该蛋白质在多种细胞生命活动中发挥着关键作用。现对Rab11的结构、效应蛋白及功能等方面进行了综述。
- 李江姣聂宇党旭红王伟
- EoRab43参与游仆虫细胞内大核周围的物质运输被引量：3
- 2009年
- Rab家族蛋白是真核细胞内膜泡运输途径中重要的调节因子。EoRab43是八肋游仆虫中一种编码非典型Rab蛋白的基因。本研究依据已获得的EoRab43基因序列设计引物,从八肋游仆虫大核DNA中扩增了EoRab43基因的3′端153bp片段,即EoRab43153bp(对应于EoRab43蛋白的C末端50个氨基酸,EoRab43C),构建重组表达质粒pGEX-EoRab43153bp转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,纯化后的融合蛋白GST-EoRab43C免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。经检测,制备的抗体具有较高的效价及良好的特异性。利用制备的抗体对EoRab43在游仆虫细胞内进行免疫荧光定位,结果显示该蛋白主要定位于该生物细胞内大核染色体的周围。
- 李江姣聂宇梁爱华党旭红王伟
- 关键词：八肋游仆虫大核免疫荧光定位膜泡运输
- 八肋游仆虫Rab家族基因克隆和多样性分析被引量：1
- 2010年
- Rab蛋白是在真核细胞内膜泡运输过程中起重要调节作用的一类小分子Ras-like蛋白,为Ras超家族中最大的家族。Rab家族成员在不同的生物中表现出数量的多样性和功能上的分化。为进一步了解Rab蛋白的多样性及其在真核细胞内膜泡运输网络中的功能,本研究利用游仆虫大核染色体特异的端粒结构和基因大小的染色体结构特征,通过简并引物PCR方法从八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)中克隆到9种新的Rab基因,分别为EoRab1A、EoRab2b、EoRab2c、EoRab2d、EoRab6、EoRab7、EoRab2-like、EoRabL2和EoRan(GenBank登陆号为HM371131～HM371139)。序列分析表明,游仆虫中Rab基因家族成员既包括具有维持细胞结构核心功能保守基因,又包括为适应环境而进化出的特殊功能的新基因。
- 李江姣聂宇许静王伟
- 关键词：八肋游仆虫RAB克隆多样性膜泡运输
- 八肋游仆虫大核基因组中组蛋白基因H4A和H4B的克隆及分析
- 2012年
- 组蛋白作为核小体的基本组分,是染色质的结构和功能必需的。组蛋白的变体和修饰共同参与染色质修饰及基因的表达调控。真核生物细胞中的5种组蛋白在进化中高度保守,然而纤毛虫的组蛋白H4与其他真核生物相比有较大的差异。本实验应用PCR技术从八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)中获得了2种组蛋白H4基因,分别为H4A和H4B,GenBank登录号为:JN715068和JN715069。序列分析表明,H4A基因开放阅读框324 bp,预测编码107个氨基酸,分子量为11.6 ku,等电点为10.99。而H4B基因编码框384 bp,编码127个氨基酸,分子量为14.4 ku,等电点为9.93。Blast结果显示,H4A序列与其他生物中H4的一致性相对较高,达81%～94%,而H4B的一致性为36%～70%。H4A和H4B的一致性仅为44.7%。实时荧光定量PCR表明,H4A的转录本高于H4B。结果提示:在进化过程中八肋游仆虫可能进化出特殊的组蛋白H4基因,不同的组蛋白H4可能发挥不同的功能。
- 杨旭霞许静梁爱华王伟
- 关键词：八肋游仆虫克隆转录
- 游仆虫EoRab2a蛋白的表达、纯化及定位分析
- 2011年
- Rab GTPase家族蛋白是真核细胞内膜系统转运途径中重要的调控因子,不同的Rab家族成员在细胞具有功能多样性。为了解Rab2的功能,八肋游仆虫EoRab2a基因连接入原核表达质粒pGEX-6P-1中,获得重组表达质粒pGEX-6P-1-EoRab2a。质粒pGEX-6P-1-EoRab2a转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,大肠杆菌BL21(DE3)/pGEX-6P-1-EoRab2a高效表达了可溶性GST-EoRab2a蛋白。融合蛋白GST-EoRab2a经亲和层析获得电泳纯蛋白。纯化后的GST-EoRab2a免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。ELISA和Western blotting检测显示制备的抗体效价1∶25600,特异性良好。免疫荧光定位表明EoRab2a在游仆虫细胞质中点状分布,推测参与内质网与高尔基体间膜泡转运。
- 许静李江姣聂宇梁爱华王伟
- 关键词：八肋游仆虫原核表达纯化免疫荧光定位
- EoRab11a在游仆虫及HEK293T细胞中的定位
- 2010年
- Rab11是一种在真核生物细胞生命活动过程中发挥多种调控作用的小分子GTP酶.EoRab11a是八肋游仆虫中的Rab11蛋白同源物,为了解EoRab11a蛋白在细胞中的功能,本研究将EoRab11a基因克隆到哺乳动物表达载体pEGFP-C2中,构建重组表达质粒pEGFP-C2-EoRab11a,转染HEK293T细胞并观察其细胞定位.在间期HEK293T细胞中,EoRab11a定位于细胞核附近;在游仆虫细胞中,EoRab11a具有相似的分布模式.在HEK293T细胞的胞质分裂过程中,EoRab11a在分裂沟附近、分裂沟收缩区、以及最后形成的中间体处分布,提示EoRab11a可能参与了胞质分离过程中分裂沟及中间体处的膜泡运输事件.
- 李江姣聂宇许静梁爱华王伟
- 关键词：八肋游仆虫细胞定位胞质分裂
