国家自然科学基金(30728028)
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 相关作者：钱其军吴孟超刘佳李林芳苏长青更多>>
- 相关机构：第二军医大学浙江理工大学中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性被引量：3
- 2009年
- 目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1。EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6μg/L)。染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论:通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。
- 钱炎珍黎江李林芳刘辉刘韬姜梨华施乐华苏长青吴孟超钱其军
- 关键词：肝癌细胞系原代培养生物学特性
- 首株来源于转移灶的人胆囊癌细胞系EH-GB1的建立及鉴定
- 2010年
- 目的建立转移性胆囊癌细胞系，鉴定并研究其生物学特性。方法从人胆囊癌转移灶取材，将标本分离成单细胞悬液，用含15％胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养，培养成功后命名为EH-GB1细胞。电镜下观察EH—GB1细胞的形态，绘制细胞生长曲线。SCID小鼠皮下接种EH-GB1细胞，观察EH—GB1细胞的成瘤能力。采用免疫组化法，检测小鼠移植瘤组织中CA19-9的表达。分别用携带绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白报告基因（Red2）的慢病毒感染EH-GB1细胞，观察EH—GB1细胞表达GFP和Red2的情况。结果EH—GB1细胞体外连续传代20代以上，形态上具有典型的恶性上皮细胞特征，倍增时间约为24h。SCID小鼠皮下接种EH—GB1细胞后的成瘤率为100％。移植瘤细胞中CA19—9呈强阳性表达。EH—GB1细胞感染携带GFP或Red2基因的慢病毒后，可稳定地表达GFP和Red2。结论EH—GB1细胞有望成为首株来源于转移灶的稳定的人胆囊癌细胞系，转染并持续表达GFP和Red2的EH-GB1细胞是胆囊癌临床与基础研究中的理想实验模型。
- 李林芳胡还章刘辰王敬晗吴红平金华君苏长青姜小清刘佳顾坚忠吴孟超钱其军
- 关键词：胆囊肿瘤细胞系小鼠
- 肿瘤干细胞:起源与争论被引量：12
- 2007年
- 近年来,随着干细胞理论在肿瘤研究中的广泛应用,人们逐渐认识到在绝大多数癌症中,肿瘤细胞很可能起源于一种肿瘤起始细胞———肿瘤干细胞,它在机体内具有自我更新并形成肿瘤的能力。肿瘤干细胞的存在已在多种肿瘤类型与细胞系中得到证实,并鉴定出相应的分选方法,但人们对它的起源却莫衷一是,干细胞突变、细胞融合、胚胎干细胞残留等都有可能是肿瘤干细胞产生的原因。通过多年对肝癌的研究,笔者提出肝癌干细胞来源的假说:认为干细胞在修复肝炎病毒所致肝损伤的过程中,在病毒与炎症的双重刺激下,干细胞与突变肝细胞之间发生细胞融合、交换,最终产生肝癌干细胞。随着相关研究的不断深入,肿瘤干细胞学说在理论与技术上也面临着诸多质疑与挑战,其中有观点认为,干细胞可能只是被趋化至癌变部位并因其可塑性而表现出恶变表型,但并未在实质上参与肿瘤的发生与发展。
- 钱其军刘佳吴孟超
- 关键词：肿瘤干细胞肝癌干细胞基因突变细胞融合
- 无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性的影响被引量：4
- 2011年
- 在无血清条件下培养KES小鼠胚胎干细胞,研究LIF在无血清条件下对小鼠胚胎干细胞增殖及多能性维持的影响。联合使用小分子物质SU5402、PD184352和CHIR99021或单独使用LIF培养小鼠胚胎干细胞,检测无血清条件下LIF对小鼠胚胎干细胞自我更新能力和全能性的影响。结合使用极限稀释法培养KES细胞单克隆,统计不同培养体系下单克隆的形成率。结果显示:无血清条件下,单独使用LIF,不能维持小鼠胚胎干细胞的自我更新能力和全能性;使用含有3种小分子药物SU5402,PD184352和CHIR99021(3i)的无血清培养液可以维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,传代60代以上仍可保持全能性;添加LIF的3i培养系统显著提高了小鼠胚胎干细胞的单克隆形成率。表明在无血清条件下,LIF不能单独维持小鼠胚胎干细胞的多能性。3i培养体系可以维持胚胎干细胞的全能性而不需要LIF;3i条件下,LIF可以显著促进胚胎干细胞体外增殖和单克隆形成。
- 李恩书彭新荣钱其军
- 关键词：无血清培养LIF
