国家科技重大专项(2008ZX08010-002)
- 作品数：8 被引量：40H指数：5
- 相关作者：李海燕崔喜艳刘晓庆丁志鑫吴昌银更多>>
- 相关机构：吉林农业大学华中农业大学中国农业科学院作物科学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大豆rbcL基因克隆、序列分析及原核表达被引量：11
- 2011年
- 利用叶绿体基因组保守性的特征,根据菜豆、豌豆、烟草的rbcL基因序列设计引物,从大豆叶绿体DNA中克隆rbcL基因,全长序列为1 488bp,包括1 449bp的开放阅读框,编码482个氨基酸。相似性比较显示,此序列与其它10个物种rbcL基因核苷酸的同源性为85.37%～95.31%,氨基酸的同源性为90.87%～96.47%。将该基因与表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,阳性菌液IPTG诱导后经10%SDS-PAGE分析,结果显示,诱导表达出分子量约为60kD的特异融合蛋白。
- 刘晓庆崔喜艳丁志鑫李海燕
- 关键词：大豆RBCL基因基因克隆原核表达
- 去除选择标记基因的Cre/lox重组系统在植物中的应用被引量：2
- 2009年
- 获得无选择标记基因的转基因植物越来越受到研究者的重视。目前,应用得较广泛的去除选择标记基因的方法有共转化法和位点特异性重组法,其中位点特异性重组系统中Cre/lox重组系统研究最多。以下介绍了Cre/lox位点特异性重组系统的原理、特点及其近几年在植物中的应用,针对本实验室在这一领域的研究情况,重点阐述了Cre/lox系统的应用前景。随着植物反应器研究领域的不断壮大,去除筛选标记基因是植物反应器研究的必然趋势。
- 刘秀明孟欣欣李海燕杨晶付宏歧李校堃
- 关键词：转基因植物
- 2种PCR方法扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列比较被引量：6
- 2011年
- 比较了扩增已知序列5′侧翼序列的2种PCR方法。方法一是反向PCR(IPCR),以大豆基因组酶切后的DNA片段自身环化产物做模板,用2对特异引物反向扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列。方法二是热不对称交错PCR(TAIL-PCR),以大豆基因组DNA为模板,用3个巢式特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环。IPCR和TAIL-PCR 2种试验方法分别扩增获得438 bp和867 bp特异产物。经测序发现:2片段两侧均含有设计的引物,其部分序列均与已知序列相一致,两者也有部分序列完全相同,但TAIL-PCR技术简单,重复性好,能够在短时间内获得目标片段,TAIL-PCR技术在克隆侧翼序列时优于IPCR。
- 刘晓庆丁志鑫刘晶崔喜艳
- 关键词：反向PCR大豆
- NaCl胁迫下大豆mRNA表达谱分析
- 世界人口的持续增长使粮食生产面临着严峻的挑战,发展粮食生产的主要途径之一是扩大种植面积,然而,由于各种非生产用地不断增加以及土壤侵蚀、沙化、盐碱化、沼泽化和土壤污染等问题日趋严重,使耕地面积在逐年下降,因此,扩大耕地面积...
- 王佳琦杨娜李海燕
- 关键词：大豆耐盐性表达谱分析盐胁迫
- 文献传递
- 1个新水稻组成型启动子的克隆与功能鉴定被引量：7
- 2012年
- 根据基因芯片数据库和RT-PCR验证得到1个高活性的水稻组成型表达基因(TIGR Locus:LOC-Os07g34589),用PCR技术从籼稻品种明恢63基因组中克隆得到其上游启动子PSUI1,长度为1 941bp;将其与β-glucuronidase(GUS)报告基因融合构建植物表达载体DX2181b-PSUI1,利用玉米Ubiquitin启动子融合GUS报告基因构建表达载体DX2181b-PUbi作为对照,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将DX2181b-PSUI1和DX2181b-PUbi转化粳稻品种中花11。组织化学染色表明,含DX2181b-PSUI1的转基因植株中,GUS基因在幼苗期叶片、叶鞘、根,抽穗期叶片、叶鞘、茎秆、颖壳、雄蕊和成熟期的叶片、叶鞘、茎秆、胚、胚乳中均有表达,说明PSUI1为组成型启动子。对GUS表达活性进行定量分析表明,PSUI1启动子的活性约为玉米Ubiquitin启动子活性的1/3～1/2,但是PSUI1表现出了更好的表达稳定性。
- 魏晶毛伟华林拥军陈浩
- 关键词：水稻组成型启动子GUS报告基因GUS染色
- 超量表达水稻miRNA 167a调控株型的研究被引量：6
- 2011年
- 本研究将水稻MIR167基因家族成员之一MIR167a基因构建到玉米Ubiquitin基因组成型启动子下游,采用农杆菌介导的遗传转化方法实现了miRNA167a在水稻品种中花11号中的超量表达。Southern杂交进一步获得了单拷贝基因插入的转基因植株。Ubi::MIR167a超量表达植株表现为矮化、分蘖角度增大、有效分蘖数减少的株型变化,进一步分子检测表明突变表型与miRNA167a表达量呈共分离。通过生物信息学预测手段及表达量分析,初步确定ARF8为miRNA167a直接靶基因。本研究初步解释miRNA167a在调控水稻株型尤其是分蘖角度方面有重要功能。
- 韦懿陈志辉陈国兴熊立仲吴昌银
- 关键词：水稻MIRNA株型调控
- 水稻穗形态建成基因PMM1的遗传分析与初步定位被引量：5
- 2012年
- 在水稻粳稻品种中花11T-DNA插入突变体库中鉴定了3个穗形态突变体,它们均表现为植株半矮、叶夹角变小、一次枝梗轮生、复粒、粒长变短、粒宽变宽等突变表型。基因双突变杂交F1表型考查证明这3个突变体为等位突变体,T-DNA标签共分离检测表明这3个突变体的表型与T-DNA插入无关。通过与籼稻品种珍汕97配置3个杂交组合,由经典的孟德尔遗传分离比显示,突变性状受1对隐性基因(panicle morphological mutant 1,PMM1)控制。采用基因图位克隆的方法,已将基因PMM1定位在第4染色体长臂上的RM3866-1和X4(InDel)标记之间,其两侧物理图距为147kb左右。
- 李雪梅何宗顺余四斌陈国兴吴昌银
- 关键词：水稻T-DNA标签基因定位图位克隆
- 银中杨DREB2A基因RNA干扰载体构建及转化农杆菌的研究被引量：1
- 2010年
- 应用Gateway技术体系替代传统载体构建方法,构建了银中杨(Populus albaxp)DREB2A基因的RNA干扰载体,并将其转入根癌农杆菌EHA105中。该RNAi表达载体的构建对进一步研究杨树DREB2A转录因子基因的功能具有重要意义。
- 王磊王磊张闯迟晓娟宋黎黎张闯
- 关键词：RNA干扰载体GATEWAY技术
- 番茄果实成熟相关基因SlPEL和SlAPL的表达特性被引量：2
- 2010年
- 分析27个代表番茄不同发育阶段和生物反应的组织特异性及含有152 635个独立EST数据库的数码表达,发现果胶裂解酶基因(pectate lyase,SlPEL)和番茄AP2 Like(SlAPL)的转录受果实成熟的调节。以授粉后不同发育时期的番茄(品种为美味樱桃)果实为试材,用半定量PCR和荧光实时定量PCR分析SlPEL的表达模式,结果表明,授粉后12d,其表达水平明显上升;授粉后16～18d,达到第一个小高峰;28d到最高峰;从28d到完全成熟逐步下降到第一个小高峰的水平。SlAPL的表达模式与SlPEL类似,但其表达启动的时期迟于SlPEL。从授粉后25d,SlAPL转录启动;授粉后28～32d,其转录水平上升到第一个小高峰;39d达到最高峰,以后到完全成熟略有下降。该研究也印证利用EST的数据库进行基因数码表达分析的可行性。
- 肖东肖阳蔡应繁邓小峰吴锁伟郑旭李晚忱吴翠平费章君牛应泽杨建平
- 关键词：番茄
- 紫色幼叶和紫色叶脉融合基因及其作为可视筛选标记基因在番茄转化技术中的应用
- 传统的抗抗生素抗性基因等选择性标记的存在是引发公众对转基因植物安全性担忧的主要因素之一,而利用新型安全的可视性筛选标记替代传统的抗性选择标记是解决这一问题的有效途径。本研究克隆了拟南芥幼叶特异性和叶脉特异性两种启动子,与...
- 金凤党利洁李姝柴文婷李鹏丽王宁宁
- 关键词：植物转基因技术
- 文献传递
