广东省科技攻关计划(2006B20501005)
- 作品数：8 被引量：32H指数：4
- 相关作者：田素娟董斌林月霞袁茵黄树林更多>>
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- 抗氯霉素单克隆抗体4D10的特性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的对抗氯霉素单克隆抗体4D10进行纯化与特性鉴定,以获得可用于检测氯霉素残留试剂盒的单克隆抗体。方法用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体,用间接酶联免疫吸附试验、竞争ELISA等方法测定抗体效价、特异性、敏感性与亲和性以及抗体与其它氯霉素结构类似物的交叉反应率。结果纯化后抗体的纯度高达95%;对抗体进行相关性质的鉴定得出：4D10效价为1∶2.56×105,其亲和力常数可达2×108M-1,该抗体与CAP-BSA,CAP-OVA有反应,与BSA、OVA无反应;与氯霉素琥珀酸钠、氯霉素反应,而与其它氯霉素结构类似物无交叉反应。结论抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、特异性强、亲和力高,可利用该抗体制备检测氯霉素残留的ELISA试剂盒。
- 林月霞段涛董斌袁茵田素娟
- 关键词：氯霉素单克隆抗体
- 快速检测游离前列腺特异抗原ELISA方法的建立被引量：4
- 2007年
- 目的 建立快速检测人血清中游离前列腺特异抗原(f-PSA)的ELISA方法.方法 利用抗f-PSA的单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株,一株单抗2D1用于固相包被,另一株单抗2E4进行辣根过氧化物酶标记,采用二步法,建立定量测定人血清f-PSA的双抗体夹心ELISA法.对该法的敏感度、精密度、准确性、特异性进行了分析.应用该法与瑞典CanAg公司的f-PSA ELISA试剂盒同时检测了18例前列腺癌和25例前列腺增生患者血清标本的f-PSA含量,进行了两种方法检测结果的相关性分析.结果 以双抗体夹心ELISA法检测f-PSA,在f-PSA 0～20μg/L范围内线性良好;敏感度为0.025 μg/L;批内变异系数为4.5%～6.2%,批间变异系数为3.9%～7.2%;回收率为94.3%～111.1%;与α1抗糜蛋白酶结合的结合型PSA交叉率为0.7%;检测43份临床标本f-PSA含量的结果与瑞典CanAg公司f-PSA试剂盒检测结果的相关系数为0.995.结论 所建立的双抗体夹心ELISA方法是一种特异、敏感、简便实用的f-PSA快速检测方法,有助于在PSA低水平升高的重叠范围内(4～10μg/L)鉴别前列腺增生与前列腺癌.
- 田素娟徐海燕刘昊旻郑蓬举杨书豪黄树林
- 关键词：酶联免疫吸附测定前列腺特异抗原前列腺肿瘤前列腺增生
- 氯霉素竞争ELISA检测方法的研究被引量：4
- 2009年
- 用抗氯霉素的MAb2G2建立了检测氯霉素的竞争ELISA,对主要影响因素进行了研究,其回归方程为y=-0.3522x+0.5939,相关系数为R2=0.9906,检测线性范围为0.098ng/mL～25ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为1.848ng/mL,检测限为0.135ng/mL。与氯霉素琥珀酸钠交叉反应率为143%,与其它结构类似物和常见抗菌素的交叉反应率均小于0.01%。批内和批间变异系数分别为4.98%和9.42%,牛奶样的平均添加回收率为101.31%。所建立的检测氯霉素竞争ELISA法,符合检测氯霉素残留的要求,为氯霉素残留快速检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 田素娟董斌袁茵林月霞段涛孟民杰黄树林
- 关键词：氯霉素MAB竞争ELISA
- 纳米胶体金的制备及粒径的测定被引量：12
- 2010年
- 目的利用柠檬酸三钠作为还原剂,制备颗粒均一、分布均匀的纳米胶体金。方法通过考察反应时间、搅拌速度以及初始沸腾时间3个因素来确定最佳的制备条件,以紫外吸收峰、粒径及透射电镜扫描结果进行综合评价。结果胶体金溶液的最佳制备条件为:在200 r/min的搅拌速度加热至沸腾,沸腾后立即加入还原剂,反应12 min后停止搅拌;所制得的胶体金的粒径为20 nm左右。结论采用优化条件所制得的胶体金颗粒均一、分布均匀。
- 徐欢董斌林月霞田素娟杜欣娥
- 关键词：胶体金纳米粒
- 食品中沙门菌的检测被引量：3
- 2007年
- 目的:检测超市奶类和肉类制品中沙门菌的污染情况,初步评价检测食品中沙门菌的检测方法。方法:样品经增菌后,用科玛嘉显色培养基培养、ELISA法、国标法对超市的奶类和肉类制品中的沙门菌进行平行检测,并对其灵敏性和特异性、符合率进行比较分析。结果:检测320份奶类制品和肉制品,科玛嘉显色培养基培养、ELISA法、国标法阳性样品数分别为23份、26份、20份,其阳性率分别为7.2%、8.1%、6.3%。科玛嘉显色培养基培养的敏感性和特异性分别为100%、99%,与国标法的符合率达99.1%。ELISA法的敏感性和特异性分别为100%、98%,与国标法符合率98.1%。ELISA法与科玛嘉显色培养基培养的符合率为99.1%。157份奶类制品,科玛嘉显色培养基培养、ELISA法、国标法检测阳性样品数分别为6、6及5份,阳性率分别为3.8%、3.8%和3.2%,有2份检测结果不一致。163份肉类制品,阳性样品分别为17、20、15份,阳性率分别为10.4%、12.3%和9.2%,有5份肉食品检测结果不一致。结论:科玛嘉显色培养基培养、ELISA法和国标法对超市的奶类和肉类制品中的沙门菌进行平行检测,符合率高。利用科玛嘉显色培养基培养、ELISA法,可以快速、方便地对食品中沙门菌的污染进行批量初筛,科玛嘉显色培养基鉴别培养特异性好,更适合食品沙门菌的分离与初筛检测。
- 田素娟徐海燕王战争黄树林
- 关键词：奶制品肉制品沙门菌科玛嘉显色培养基ELISA
- 氯霉素全抗原的合成与鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:为获得较高偶联率氯霉素全抗原,探索和优化碳二亚胺法(EDC)合成氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白(BSA)全抗原合成条件。方法:采用单因素设计,优化影响合成的主要因素:蛋白浓度、CAP与BSA的摩尔比例、反应体系pH值,通过紫外法和三硝基苯磺酸(TNBS)法测定合成后的偶联率。结果:EDC法合成氯霉素全抗原较优条件为BSA浓度15mg/ml、CAP:BSA=70:1、pH7.4,可得到偶联率为15左右的氯霉素全抗原。结论:EDC法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原,以用来进行抗体制备。
- 董斌袁茵段涛林月霞田素娟
- 关键词：氯霉素牛血清白蛋白偶联
- 抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选被引量：2
- 2009年
- 目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法以CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法大量制备单抗。捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞4D10。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目90-110条,间接ELISA检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56×105,纯度达95%,该细胞连续培养生物学性状稳定。结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高,为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。
- 林月霞董斌袁茵段涛田素娟
- 关键词：氯霉素细胞融合单克隆抗体间接ELISA
- 氯霉素全抗原结合比的定量检测研究被引量：5
- 2007年
- 目的探讨简便、快速定量检测氯霉素(CA)全抗原结合比的方法。方法以牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,采用混合酸酐法将之与氯霉素琥珀酸酯(CA-HS)偶联,合成CA-BSA全抗原。应用紫外分光光度法对CA-BSA全抗原进行定性鉴定;分别采用自行改进的三硝基苯磺酸(TNBS)法和紫外分光光度法对CA-BSA全抗原结合比进行定量检测。结果紫外分光光度法检测显示CA-BSA的最大吸收峰高于相同蛋白浓度的BSA最大吸收峰,表明CA-BSA全抗原偶联成功。TNBS法测得的CA-BSA全抗原结合比为26,紫外分光光度法测得的CA-BSA全抗原结合比为23,两种方法的检测结果基本一致。结论TNBS法和紫外分光光度法用于氯霉素全抗原结合比的定量检测均具有快速、灵敏、方便和可靠的特点。TNBS法对半抗原在紫外区无吸收的全抗原结合比测定也可以胜任,因此适用范围更为广泛。
- 王文佳董斌田素娟袁茵黄树林
- 关键词：氯霉素三硝基苯磺酸
