中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(HSY201204)
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 相关作者：刘红柏卢彤岩徐黎明尹家胜曹永生更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鱼类传染性造血器官坏死病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用被引量：7
- 2014年
- 将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV检测方法。针对IHNV的聚合酶蛋白基因(polymerase protein,L)设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,反应产物添加SYBR Green I荧光染料后,肉眼观察阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本表现为红棕色。2%琼脂糖凝胶电泳检测结果与可视化检测结果一致。该方法实现了检测结果的可视化。特异性分析显示该方法不与传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)及病毒性出血性败血症病毒(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)发生交叉反应,并且可检测不低于10 pfu的IHNV RNA。本研究所建立的IHNV RT-LAMP可视化检测方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、不依赖任何专门的仪器设备的优点,其检测结果直观可视化,可实现现场高通量快速检测。
- 刘淼徐黎明卢彤岩赵景壮曹永生刘红柏尹家胜张金凤冯剑
- 关键词：RT-LAMP
- 传染性造血器官坏死病病毒高效RT-PCR检测方法的建立被引量：6
- 2013年
- 传染性造血器官坏死病毒（Infectious haematopoietic necrosis virus，IHNV），属弹状病毒科（Rhabdoviridae），诺拉弹状病毒属（Novirhabdovirus），IHNV是该属代表种。IHNV病毒粒子含有一条全长约为11kb的线状、反义、单股RNA。
- 徐黎明刘红柏徐进卢彤岩
- 关键词：RT-PCR检测
- 鱼类传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白的截短表达及免疫原性检测被引量：5
- 2014年
- 目的研究鱼类传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)糖蛋白不同区域对免疫原性的影响。方法本研究通过DNAStar 6.0软件分析糖蛋白跨膜区、疏水性及抗原性后,对其进行截短表达;纯化后的糖蛋白制备兔抗血清,ELISA检测兔抗血清的效价,用间接免疫荧光技术检测纯化后蛋白的免疫原性。结果 SDS-PAGE结果显示,截短糖蛋白相对分子质量(Mr)为40 000,纯化后的糖蛋白经高效液相色谱检测纯度达到90%。利用纯化后的蛋白制备兔抗血清,ELISA结果显示,所制备的兔抗血清与糖蛋白的反应效价为1∶80 000,与IHNV-Sn株细胞培养物的反应效价为1∶20 000;间接免疫荧光结果显示,兔抗血清与IHNV-Sn分离株及参考毒株均能发生特异性的反应。结论实验所表达的糖蛋白与天然的病毒表面糖蛋白具有几乎相同的免疫原性。
- 赵景壮徐黎明刘淼曹永生尹家胜刘红柏卢彤岩
- 关键词：蛋白表达糖蛋白免疫原性
- 虹鳟IgM重链恒定区的表达及兔抗血清的制备被引量：2
- 2014年
- 为了能够成功表达虹鳟IgM,本研究利用生物信息学软件对虹鳟IgM的亲水性及抗原性进行了分析,根据GenBank收录的虹鳟IgM重链恒定区,参照生物信息学分析结果,设计用于扩增截短的IgM基因的引物,以虹鳟头肾RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增虹鳟截短的IgM重链恒定区部分基因片段,连接原核表达载体pET-27b,利用大肠杆菌Rosetta进行表达。SDS-PAGE及HPLC结果显示,纯化后截短的IgM大小约为47.7 ku,且纯度达到90%。利用其制备兔抗血清后ELISA分析结果显示,所制备的兔抗血清与本研究所表达的截短IgM蛋白的反应效价为1∶40 000,与虹鳟血清提取的全长IgM反应效价为1∶20 000并且呈现出抗原计量依赖性。研究表明,重组IgM蛋白与虹鳟血清中的天然IgM重链恒定区具有近似的结构,利用其所制备的兔抗血清能够与虹鳟鱼体中的天然IgM发生特异性反应。
- 赵景壮徐黎明刘淼曹永生尹家胜刘红柏卢彤岩
- 关键词：虹鳟IGM基因克隆抗血清
