中国博士后科学基金(2004035557)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：宋忆淑费向东李玉新贺冰宋志宇更多>>
- 相关机构：东北师范大学长春市双阳区医院吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 可见光照射致培养的视网膜色素上皮细胞凋亡的超微结构观察被引量：5
- 2005年
- 目的研究可见光照射导致培养的视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞凋亡的超微结构变化。方法以卤钨灯为光源,(1970±200)Lx的光照强度,持续光照30min为光损伤实验条件,以透射电镜观察为检测手段,观察可见光照致RPE细胞损伤的超微结构变化。结果光照后培养的RPE细胞,出现了细胞凋亡早期的特征性改变;在相同时间点,细胞表现了不同程度的损害;随着培养时间的延长,细胞出现损害的程度逐渐加重,受损的细胞数目逐渐增多。结论一定强度的可见光照射可导致培养的RPE细胞发生细胞凋亡的特征性超微结构改变,细胞受损具有非同步性及不可逆趋势。
- 宋忆淑贺冰费向东李玉新张晓光
- 关键词：光刺激色素上皮超微结构细胞凋亡
- 新基因s-lap编码区的克隆及其重组表达质粒PHB/s-lap的构建被引量：2
- 2004年
- 目的 :克隆新基因 s- lap编码区序列并构建其重组表达质粒。方法 :利用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR )方法 ,以可见光损伤早期的培养的猪视网膜色素上皮 (RPE)细胞 ds c DNA为模板 ,扩增新基因 s- lap编码区序列 ;利用基因重组技术构建 PHB/ s- lap重组表达质粒。结果 :经测序证实获得了正确的新基因 s- lap编码区序列 ,酶切鉴定及 DNA序列分析表明已经将 s- lap基因编码区序列克隆到 PHB表达载体 ,成功地构建了 PHB/ s- lap重组表达质粒。结论 :成功地克隆了新基因 s- lap编码区序列 ,并构建了其重组表达质粒 PHB/ s- lap。
- 宋忆淑宋志宇费向东贺冰李玉新谭大鹏
- 关键词：克隆
- RPE细胞光损伤相关新基因s-lap编码区克隆及s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞中的表达与定位被引量：2
- 2005年
- 目的 克隆新基因s lap编码区序列 ,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。方法 分析s lapcDNA序列 ,建立视网膜色素上皮 (retinalpigmentep ithelium ,RPE)细胞光损伤模型 ,RT PCR克隆其编码区序列 ,构建了带有绿色荧光蛋白的目的基因真核表达重组质粒 pcDNA3 .1 GFP/s lap ,转染B16黑色素瘤细胞 ,观察s lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。结果 s lapcDNA序列含有编码10 1个氨基酸的开放读码框架 ,有 2个可能的N 糖基化位点 ,1个可能的caseinkinaseII磷酸化位点和 2个可能的PKC磷酸化位点 ;成功地克隆了s lap蛋白编码区序列 ,构建了其真核表达载体 ,荧光显微镜观察 ,在转染 pcDNA3 .1 GFP质粒的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光呈网状分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染s lap/GFP融合基因的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 新基因s lap编码的蛋白质可在B16黑色素瘤细胞中获得表达 ,并以细胞核内高表达。
- 宋忆淑李玉新费向东鲍永利谭大鹏
- 关键词：融合蛋白
- s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达与定位被引量：2
- 2005年
- 目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s- lap/ GFP融合基因转入 Hela细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达。结果 :s- lap/ GFP重组质粒序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜显示 ,在转染 GFP基因的 Hela细胞中 ,荧光呈网状均匀分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染 s- lap/ GFP融合基因的 Hela细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 :s- lap/ GFP融合蛋白可在人 Hela细胞中表达 ,并主要定位于细胞核。
- 宋忆淑宋志宇费向东贺冰李玉新
- 关键词：HELA细胞
- 猪RPE细胞原代培养及其透射电镜观察被引量：2
- 2006年
- 目的建立视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium RPE)细胞体外培养及其超微结构研究方法,为在细胞和分子水平上对RPE细胞进行研究奠定基础。方法采用酶消化法对RPE细胞进行取材和培养,利用光镜和透射电镜观察及分析培养的RPE细胞。结果建立了可获得大量RPE细胞的培养方法,对培养的细胞进行了系统的观察和分析培养的细胞贴壁生长,细胞内可见大量黑色素颗粒。结论成功的进行了RPE细胞培养,为各种损伤致RPE细胞形态学改变的研究奠定了基础。
- 张秋阳宋志宇宋忆淑闫敬军
- 关键词：色素上皮细胞培养透射电镜
