“十五”国家科技攻关计划(2003BA712A)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 相关作者：陈水平姜涛秦成峰秦鄂德邓永强更多>>
- 相关机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Hendra病毒的实时PCR检测方法的建立被引量：2
- 2005年
- 目的:建立针对Hendra病毒的敏感、特异和快速的实时PCR法,为Hendra病的早期诊断提供依据。方法:采用常规PCR法和实时PCR法分别对构建的Hendra病毒全长G基因的重组质粒DNA进行扩增,并比较两种方法的敏感性。结果与结论:应用常规PCR方法可检测到100fg/μl的含Hendra病毒特异序列的重组质粒DNA,而实时PCR法则可检测到0.1fg/μl的DNA,后者的敏感性比常规PCR法的提高了1000倍,该方法不但操作上更加简便、快速,还可避免交叉污染,适于对Hendra病毒特异序列的检测。
- 邓永强姜涛于曼陈水平秦成峰秦鄂德
- 关键词：实时PCR质粒
- 3种重要脑炎病毒的多重RT-PCR检测方法的建立被引量：6
- 2007年
- 目的:建立针对西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalomy-elitis virus,VEEV)和亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)的多重RT-PCR检测方法。方法:分别针对WNV的NS1基因、VEE的NSP2基因和HeV的G基因设计3对引物,建立了同时检测WNV,VEEV和HeV的多重RT-PCR方法。以不同滴度的病毒评估该检测方法的敏感性,同时以中国地区流行的与脑炎相关的黄病毒属和甲病毒属成员为模板验证该检测方法的特异性。结果与结论:所建立的3种病毒的多重RT-PCR方法可同时或分别特异扩增WNV,VEEV和HeV的454 bp,541 bp和723 bp基因片段,敏感度分别达到10 PFU/ml,100 PFU/ml和100 fg/ml;而对中国流行的与脑炎相关黄病毒和甲病毒如日本脑炎病毒、森林脑炎病毒、黄热病毒、登革病毒、东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒的扩增均为阴性。结果表明所建立的多重RT-PCR敏感性和特异性良好,可用于3种脑炎病毒的快速鉴定和甄别。
- 姜涛邓永强于曼陈水平秦成峰秦鄂德
- 关键词：多重RT-PCR西尼罗病毒委内瑞拉马脑炎病毒
- 实时RT-PCR检测西尼罗病毒被引量：8
- 2005年
- 目的建立西尼罗病毒快速、敏感和特异的实时RTPCR法,用于西尼罗病毒疾病的早期诊断。方法对Vero细胞增殖的西尼罗病毒分别进行常规RTPCR和实时RTPCR法扩增,以PFU/ml为参考标准,比较二者的敏感性和特异性。并用实时RTPCR法检测西尼罗病毒感染的小鼠组织标本。结果采用所建立的实时RTPCR法和常规RTPCR法可分别检测到0.02PFU/ml和2PFU/ml的西尼罗病毒RNA,前者的敏感性比后者高100倍。而对其他黄病毒科成员的检测均为阴性,表明该方法是特异的。采用这种实时RTPCR法可从西尼罗病毒感染小鼠的血液、脾脏、肾脏和脑组织标本中检测出病毒核酸,且在感染后第2天最先自血液和脾脏中检测到病毒,在感染后1周的脑组织中的病毒滴度最高。结论本研究建立的实时RTPCR法具有很高的敏感性和特异性,因此该方法可用于西尼罗病毒疾病的早期监测和流行病学研究。
- 邓永强姜涛于曼秦成峰陈水平祝庆余秦鄂德
- 关键词：RT-PCR法西尼罗病毒感染VERO黄病毒科PFU
