国际科技合作与交流专项项目(2009DFA32720)
- 作品数：10 被引量：39H指数：4
- 相关作者：薛强邹明强杜景娇郭浩董英更多>>
- 相关机构：中国检验检疫科学研究院江苏大学大连医科大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目“十一五”国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 3种新城疫病毒核酸扩增检测方法的比较研究
- 2012年
- 本研究利用3种方法对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行检测,并对这3种检测方法的灵敏度和特异性作出比较。根据新城疫病毒的融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP实时浊度仪进行检测。通过对恒温水浴中的反应温度、反应时间及反应液中Mg2+浓度进行优化获得最佳反应条件,结果用凝胶电泳分析;用优化的温度进行LAMP实时浊度仪检测,同时都与PCR方法进行比较。结果显示,获得了最佳反应条件,水浴LAMP方法最低检测限是1.58pg,比PCR高100倍,而LAMP实时浊度仪检测灵敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低检测限是0.158pg。3种方法对其他非新城疫病毒均无检出。结果表明,新城疫病毒水浴LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,有望在核酸扩增领域取代PCR技术,LAMP浊度仪法检测灵敏度更高,但是所需仪器和试剂比较昂贵。
- 杜景娇薛强邹明强郭浩滕文锋
- 关键词：环介导等温扩增技术新城疫病毒聚合酶链反应
- 诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 旨在建立诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法。选取诺如病毒较为保守的RdRp基因作为扩增对象,经RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针及生物素标记引物。生物素标记引物的扩增产物经热变性后与固定在硝酸纤维素膜上的探针进行杂交反应,经显色后判定结果。出现明显的蓝紫色斑点为诺如病毒阳性,如无斑点则为阴性。对5份临床样品进行检测,并以RT-PCR对比验证。结果显示,利用反向斑点杂交法对重组质粒的检测限为100拷贝/μL,在5例实际样品检测中有1例为阳性,与RT-PCR判定结果一致。建立了诺如病毒的RT-PCR-反向斑点杂交检测方法,该方法特异性好,灵敏度高,操作简便,具有重要的应用价值。
- 田甜董英薛强邹明强王伟
- 关键词：诺如病毒反转录-聚合酶链式反应反向斑点杂交
- 改良逆转录环介导等温扩增检测技术快速实时检测H9亚型禽流感病毒被引量：4
- 2012年
- 利用改良逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术建立一种快速、灵敏的检测方法用于H9亚型禽流感病毒检测。根据H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区序列中的8个区段设计6条特异性引物,在恒温条件下进行核酸扩增反应,并以琼脂糖凝胶电泳和目视检查绿色荧光两种方法对扩增结果进行判定。结果表明,RT-LAMP的最小检测限为100 fg,灵敏度比PT-PCR高100倍,且与H5亚型、H7亚型禽流感病毒,新城疫病毒(NDV)无交叉反应。目视检查绿色荧光与常规琼脂糖凝胶电泳的判定结果一致。整个扩增检测过程在35 min内即可完成。利用临床样本对RT-LAMP法进行验证,结果与RT-PCR一致。由实时浊度分析得到的标准曲线,计算出临床样本中的病毒质粒拷贝数均在2×107-2×104之间。因此,本研究建立的RT-LAMP方法快速、灵敏、特异性强,是H9亚型禽流感病毒的一种高效检测方法。
- 但晓雅董英邹明强薛强杜景娇
- 关键词：H9亚型禽流感病毒
- 新城疫检测技术的研究新进展被引量：10
- 2012年
- 新城疫作为禽类重要的传染病之一,从发现至今已有80多年的历程,给养殖业带来不可估量的经济损失,因此对于该病的研究具有重要的意义。文章简要介绍了新城疫的几种免疫分析方法和分子生物学检测方法。
- 杜景娇薛强邹明强郭浩
- 关键词：新城疫免疫分析分子生物学技术
- 环介导等温扩增(LAMP)技术的应用现状被引量：1
- 2012年
- LAMP技术具有简便、快速、高效、特异性强等优点,尤其适用于人类和动物疾病的检测,本文重点论述了目前LAMP方法在病原微生物检测、临床诊断、胚胎性别鉴定以及转基因食品等领域的应用及研究情况。表明该方法已具有成功应用的现实性,为快速基因检测提供了一种新的技术途径,可望作为常规检测工具。
- 郭浩杜景娇云彩麟刘小雷于东升
- 关键词：环介导等温扩增病原微生物检测胚胎性别鉴定转基因食品
- 禽流感病毒检测技术的研究新进展被引量：4
- 2012年
- 禽流感已被列为世界卫生组织(WHO)的流感大流行警告5级,中国将其列为一类传染病。该病的暴发不仅对养禽业造成毁灭性的危害,而且严重威胁到人类生命安全。为此快速准确的诊断对禽流感的防控具有重大的意义,文章就禽流感诊断方法的研究进展作一综述。
- 杜景娇薛强邹明强郭浩滕文锋
- 关键词：禽流感免疫分析分子生物学技术
- 禽流感病毒分子生物学检测技术研究进展被引量：10
- 2012年
- 禽流感(avian influenza,AI)是A型流感病毒引起的一种禽类传染病,同时也是一种人和动物之间的高度传染性疾病。近年来,禽流感病毒的分子生物学检测技术发展迅速,文章就此进行了综述。
- 但晓雅董英邹明强薛强
- 关键词：分子生物学
- 环介导等温扩增技术的改进及其在病原微生物检测中的应用研究进展被引量：8
- 2012年
- 环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年来发展出来的一种新型核酸扩增技术。自建立以来,该技术不断改进和发展,并广泛应用于病原微生物的检测,文章将就此展开综述。
- 但晓雅薛强邹明强董英
- 关键词：病原微生物
- 新城疫病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立被引量：1
- 2011年
- 为建立一种新城疫病毒(NDV)的简便、快速、高灵敏度的检测方法,本研究根据NDV融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,在恒温水浴中进行核酸扩增反应,对反应温度、反应时间以及反应液中Mg2+浓度进行优化,获得最佳反应条件,结果经凝胶电泳分析并在可见光下直接观察。整个RT-LAMP检测用时0.5 h,检测敏感度比RT-PCR高100倍,对禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒无交叉反应。本研究建立的NDV RT-LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强,操作简单等特点,有望在核酸扩增检测方法中取代RT-PCR技术。
- 杜景娇薛强邹明强滕文锋郭浩但晓雅
- 关键词：新城疫病毒
- H5和H9亚型禽流感病毒反向斑点杂交同步检测法的建立被引量：1
- 2010年
- 【目的】建立H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交鉴别诊断方法。【方法】在H5和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的保守区段内,选择设计2对引物,RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pGEM-T-H5与pGEM-T-H9。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针与生物素标记引物。将探针通过紫外交联方法固定在带正电荷的尼龙膜上,用生物素标记引物扩增特异性片段,扩增产物经热变性后与探针进行杂交,杂交后显色,出现明显蓝紫色斑点的判定为阳性,无斑点判定为阴性。【结果】利用建立的反向斑点杂交方法检测,H5、H9亚型禽流感病毒的血凝效价分别可达到2-9.6和2-11.9,杂交特异性好,且2亚型间无交叉反应。【结论】建立了H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交检测方法,该方法灵敏度高、特异性好,可以实现H5与H9亚型禽流感病毒的鉴别诊断。
- 王伟薛强邹明强柴同杰田甜
- 关键词：反向斑点杂交H5H9亚型禽流感病毒血凝素灵敏性
