国家自然科学基金(81271748)
- 作品数：16 被引量：37H指数：3
- 相关作者：张胜权罗欣王芳金锐李磊更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽省精神卫生防治中心合肥市第四人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目合肥市科技计划项目更多>>
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- 羊毛固醇合成酶抑制剂对KCs细胞分化和凋亡的影响
- 2022年
- 目的探究单独应用羊毛固醇合成酶抑制剂(RO)或联合胆固醇(CH)刺激皮肤角质形成细胞(KCs)后对其分化及凋亡的影响。方法RO单独或联合CH于KCs共培养不同时间后,加入Ca^(2+)(1.8 mmol/L)处理1d,Western blot法分析KCs的分化相关蛋白角皮蛋白(INV)和兜甲蛋白的表达;RO单独或联合CH与KCs共培养不同时间后,流式细胞术检测KCs细胞凋亡变化和Western blot法验证凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达。结果RO下调KCs,Ca^(2+)诱导的分化标志蛋白INV的表达,对Loricrin表达抑制作用较弱,而CH没有表现出对RO的拮抗效应;RO诱导KCs细胞凋亡并呈时间依赖性,CH能够拮抗RO对KCs的诱导凋亡作用;RO单独应用时细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达均受到抑制,联合CH应用能部分拮抗RO对Bcl-2表达抑制作用,对Bax的表达抑制无显著影响;RO能时间依赖性降低Bcl-2/Bax的比值,CH能部分减弱RO对Bcl-2/Bax比值的影响。结论RO可能通过下调Loricrin、Bcl-2的表达,进而抑制KCs分化和诱导KCs细胞凋亡。
- 刘莉顾亚男李名聪黄依璇张胜权
- 关键词：胆固醇角质形成细胞细胞分化
- IL-10对HaCaT细胞中VEGF-A表达的影响
- 2013年
- 目的探讨白介素-10(IL-10)对皮肤角质形成(HaCaT)细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达的影响及其可能机制。方法培养HaCaT细胞,用不同剂量IL-10刺激后,通过荧光定量PCR(Real-time PCR)在mRNA水平上分析IL-10对HaCaT细胞中VEGF-A表达的影响;通过Western blot法分析IL-10对HaCaT细胞信号通路:丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)及磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)的影响,并通过MAPKs-ERK1/2特异性阻断剂PD98059及PI3K-AKT特异性阻断剂LY294002阻断这两个信号途径,进而分析IL-10影响HaCaT细胞中VEGF-A表达的可能机制。结果 Real-time PCR分析结果显示IL-10能抑制HaCaT细胞中VEGF-A转录水平的表达;Western blot法结果显示:IL-10能够增加ERK1/2和AKT的磷酸化水平。阻断剂研究显示IL-10抑制VEGF-A转录水平表达的作用不依赖MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径。结论 IL-10抑制HaCaT细胞中VEGF-A转录水平的表达,不依赖MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径发挥作用。
- 贾波罗欣李磊程丰伟王芳黄海良杨小萍张胜权
- 关键词：HACAT细胞IL-10信号途径
- LSS基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定被引量：2
- 2021年
- 探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因敲除鼠的繁育和基因型分析。将引进杂合子小鼠进行饲养并繁育,提取其基因组DNA,利用PCR反应扩增目的基因片段,鉴定出小鼠的基因型;Western blot分析并比较LSS基因敲除杂合子小鼠和野生型小鼠的肝脏、皮肤组织中LSS蛋白的表达情况。成功的繁育出LSS基因敲除小鼠,使用PCR鉴定其子代小鼠包括野生型(LSS^(+/+),Wt)、杂合子(LSS^(+/-)),未出现纯合敲除小鼠;Western blot结果表明:相较于野生型小鼠,LSS基因敲除杂合子小鼠在肝组织和皮肤组织中表达LSS蛋白量少;杂合子敲除鼠的生存能力比野生型小鼠弱。获得LSS基因敲除小鼠,PCR鉴定小鼠基因型具有简单、稳定的优点。
- 李名聪孙晓梅李昱昊周宏罗欣张胜权
- 关键词：基因敲除小鼠基因型鉴定
- 羊毛固醇合成酶抑制剂RO对KCs细胞增殖的影响被引量：2
- 2021年
- 目的研究羊毛固醇合成酶抑制剂(RO)单独或联合胆固醇(CH)使用对皮肤角质形成细胞(KCs)细胞增殖及细胞周期的影响。方法 RO不同剂量作用KCs一定时间,采用MTS比色法检测KCs细胞增殖的变化;使用一定浓度的RO单独或联合CH作用KCs不同时间,使用MTS比色法和流式细胞仪检测记录KCs细胞增殖和细胞周期的变化;单独使用相同浓度RO或联合CH经过不同时间刺激KCs后通过蛋白质免疫印迹法对细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE表达水平进行分析。结果 RO抑制KCs细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性;联合使用CH降低RO对KCs的增殖抑制作用;RO可时间依赖性增加KCs细胞周期在G1期比例,联合使用CH缓慢增加KCs周期在G1期比例;RO可时间依赖性降低细胞周期调控蛋白CyclinB1、CyclinE的表达,联合使用CH部分拮抗RO下调CyclinE,并具有时间效应,而CyclinB1的表达没有受到明显的影响。结论 RO可能通过影响CyclinB1、CyclinE的表达使KCs细胞周期G1期阻滞进而抑制KCs增殖。
- 刘莉顾亚男周宏李名聪罗欣张胜权
- 关键词：CH细胞增殖细胞周期蛋白
- 甲羟戊酸激酶基因真核及shRNA表达载体构建及其对BxPC-3细胞周期蛋白表达的影响被引量：5
- 2016年
- 目的 构建甲羟戊酸激酶（MVK）基因真核及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞中,观察其对细胞周期蛋白的影响。方法 从BxPC-3细胞中提取总RNA,逆转录PCR（RT-PCR）法获得目的基因MVK以及通过化学合成MVK（751~779）和MVK（1089~1117）位点寡核苷酸片段,构建真核表达及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞,筛选稳定表达细胞系。Westernblot法分析转染后对BxPC-3细胞周期蛋白的影响。结果 成功获得MVK基因真核表达（pcD-NA3.1-mvk）及两个针对MVK shRNA表达载体（piLenti-RNAi-shRNA1/2）。通过抗生素筛选及Westernblot分析获得了稳定的MVK过表达及低表达细胞株。Westernblot分析显示：过表达MVK的细胞株及MVK knockdown的细胞株中细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE表达量与正常及对照细胞相比均显著降低。结论 MVK过表达及低表达均抑制Bx-PC-3细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E的表达。
- 金锐王芳栾康罗欣张胜权
- 关键词：基因重组细胞周期蛋白BXPC-3SHRNA
- 甲状腺激素受体相互作用因子4基因多态性与阿尔茨海默病的相关性研究被引量：7
- 2016年
- 目的 探索甲状腺激素受体相互作用因子4 （TRIP4）基因rs4776494多态性与阿尔茨海默病的相关性.方法 运用病例对照研究设计,收集安徽及周边地区77例拟诊为阿尔茨海默病患者和80例正常健康对照.通过聚合酶链反应（PCR）及测序的方法,比较病例组和对照组TRIP4rs4776494的等位基因及基因型频率的差异.并对每例研究对象进行简易精神状态检查表（MMSE）、临床痴呆评定量表（CDR）、痴呆伴精神行为异常（BPSD）量表检测.结果 TRIP4基因rs4776494的TT、CT和CC基因型在病例组和对照组中的频率公布[TT、CT、CC基因频率分别是AD组：57/77（74.02％）、18/77 （23.38％）、2/77（2.6％）;正常组：38/80（47.5％）、39/80（48.75％）、3/80（3.75％）]均差异有统计学意义（P＜0.01）.病例组中TRIP4基因携带者BPSD出现率明显高于非携带者（P＜0.05）.结论 TRIP4（rs4776494）T型等位基因是AD的风险基因.TRIP4基因可能在一定程度上促进了患者精神症状的发生.
- 陈龙徐小童杜远吴晓平王莹王玉梅孔晓明王克永张胜权张许来
- 关键词：阿尔茨海默病单核苷酸多态性
- TLR7激活对Hela细胞增殖的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨Toll样受体7(TLR7)在Hela细胞中的表达以及激活TLR7后对Hela细胞增殖和MAPKs-ERK1/2及PI3K-AKT两条信号通路的ERK和AKT磷酸化水平的影响。方法采用Real-time PCR分析TLR7在Hela细胞中的表达;使用不同浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;Western blot分析Gardiquimod对Hela细胞ERK1/2及AKT蛋白磷酸化水平的影响。结果 TLR7在Hela细胞中呈组成性弱表达;TLR7激动剂Gardiquimod可促进Hela细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性;Gardiquimod激活TLR7后可以显著增加Hela细胞中ERK1/2和AKT的蛋白磷酸化水平。结论 TLR7激动剂Gardiquimod能够活化MAPK-ERK1/2和PI3K-AKT信号通路的ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平,并促进Hela细胞的体外增殖。
- 李磊程丰伟王芳金锐罗欣张胜权
- 关键词：TOLL样受体7HELA细胞细胞增殖信号通路
- TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖被引量：1
- 2018年
- 目的探讨Toll样受体7(TLR7)信号通路激活对人宫颈癌Hela细胞周期蛋白表达及对细胞增殖的影响。方法使用不同浓度的Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测同一浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对Hela细胞周期的影响;Western blot分析Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平的影响。结果 TLR7的激活促进Hela细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;Gardiquimod可时间依赖性增加细胞周期在S期的比例;Cyclin B1、Cyclin E的表达水平随着Gardiquimod作用时间的增加而增加。结论 TLR7激动剂Gardiquimod可能通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平,进而促进Hela细胞增殖。
- 刘莉李磊顾亚男周宏罗欣张胜权
- 关键词：HELA细胞细胞周期蛋白细胞增殖
- 法尼基转移酶抑制剂和香叶基香叶基转移酶抑制剂对皮肤角质形成细胞增殖的抑制作用
- 2020年
- 目的探讨法尼基转移酶抑制剂(FTI)和香叶基香叶基转移酶抑制剂(GGTI)对皮肤角质形成细胞(KCs)增殖的影响。方法使用不同浓度的FTI、GGTI对KCs进行处理,细胞活力测定实验(MTS)法分析KCs增殖受各处理组的影响;利用流式细胞术检测各加药组细胞周期受一定浓度FTI、GGTI的影响;Western blot分析各加药组细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE和P21及pAKT和pERK1/2表达量受一定浓度FTI、GGTI的影响。结果MTS显示FTI、GGTI对KCs增殖有抑制作用,并呈浓度依赖性,FTI(5μmol/L)、GGTI(5μmol/L)时KCs细胞活力最小,抑制率分别为14.7%、24.5%。流式周期结果表示FTI、GGTI阻滞KCs在G1、G2、S各期不明显。Western blot结果表明FTI、GGTI均能够下调CyclinB1,并且可以上调P21和CyclinE的表达。同时,FTI、GGTI能促进P13K-AKT信号通路的激活,抑制MAPKS-ERK1/2信号通路的激活。结论FTI、GGTI对原代KCs的增殖有抑制作用。
- 周宏李名聪顾亚男朱婷婷罗欣张胜权
- 关键词：法尼基转移酶抑制剂皮肤角质形成细胞
- 胺丁羟磷酸盐抑制皮肤角质形成细胞的增殖作用被引量：1
- 2019年
- 目的 探讨胺丁羟磷酸盐(ALD)对皮肤角质形成细胞(KCs)增殖的影响及中间产物是否拮抗其影响。方法 一定浓度的ALD、甲羟戊酸(MVA)、胆固醇(CH)、法尼基焦磷酸(FPP)、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)单独或联合处理KCs,细胞活力测定实验(MTS)法分析各处理组对KCs细胞增殖的影响;利用流式细胞术检测各加药组对细胞周期的影响;Western blot分析各加药组对细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、Cyclin E和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂(P21)及磷酸化的蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化的胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)表达量的影响。结果 MTS实验表明ALD对KCs增殖有显著抑制作用,而上游产物MVA与其有协同效应;下游产物中仅CH有部分补救作用。流式细胞术检测结果显示KCs被ALD阻滞在细胞分裂间期G1期,而仅CH可减弱ALD导致的G1期阻滞。Western blot结果表明ALD显著下调Cyclin B1,同时上调Cyclin E和P21的表达。此外,ALD能促进磷脂酰基酶3-激酶-蛋白激酶B(P13K-AKT)信号通路,抑制丝裂原激活蛋白激酶-胞外信号调节激酶(MAPKS-ERK1/2)信号通路的激活。结论 ALD显著抑制原代KCs的增殖,CH对这种抑制有部分的补救作用。
- 顾亚男周宏朱婷婷李名聪罗欣张胜权
- 关键词：皮肤角质形成细胞
