国家自然科学基金(30570756C0303021)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- rAAV2／1-Acrp30病毒的纯化、扩增与活性检测被引量：3
- 2009年
- 目的将大鼠脂联素基因（Acrp30）克隆到腺相关病毒（AAV）载体中，经包装、纯化、扩增后获得rAAV2／1-Acrp30病毒，并进行活性检测。方法筛选阳性克隆获得pSNAV2．0-Acrp30，EcoRⅠ／SalⅠ双酶切鉴定，并行测序。转染BHK21细胞，G418筛选培养，获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc／△UL2感染，包装此细胞株并收获病毒载体rAAV2／1-Acrp30。行DNA斑点杂交法测定病毒滴度，SDS-PAGE分析判断病毒纯度，Western blot法检测目的蛋白脂联素在HEK293细胞中的表达活性。结果PCR电泳及酶切鉴定表明，pSNAV2．0-Acrp30重组成功，基因测序显示装入pSNAV2．0质粒中的Acrp30基因正确。rAAV2／1-Acrp30病毒的大致滴度为1．0×10^12μg／ml，HEK293细胞分泌蛋白浓度为50ng／ml，病毒载体纯度在95％以上。结论实验获得的脂联素病毒载体滴度高、感染性好，可试用于GK（Cow—Kakizaki）大鼠脂联素转基因治疗。
- 李强翔钟惠菊欧阳石谭华清王敏龙国祥李果
- 关键词：扩增活性检测
- 动脉粥样硬化GK大鼠主动脉病变超声及超微结构变化的研究
- 2010年
- 目的观察动脉粥样硬化(AS)的GK大鼠主动脉病变超声及超微结构变化。方法 88只雄性GK大鼠随机分为GK对照组(Con组)和糖尿病AS模型组(AS组),每组44只。实验期间观察大鼠体重、血糖、血压等一般情况变化。成模4周时超声观察颈动脉。实验结束时,测定各组体重、尿量、FPG、2hPG、Ins、血清脂联素(APN)、HbA_1c,同时随机取主动脉用电镜观察主动脉超微结构及病理改变。结果成模4周时,超声发现AS组大鼠颈动脉可见不同程度的AS超声改变。8周时,与Con组比较,AS组大鼠体重增加缓慢,尿量[(69.5±15.6)vs(47.2±15.0)ml]、FPG [(18.7±3.6)vs(12.1±4.0)mmol/L]、2hPG[(20.4±3.1)vs(14.4±2.6)mmol/L]、胰岛素[(61.8±5.5)vs(42.0±4.7)mU/L]、HbA_1c[(8.9±1.9)vs(5.0±1.1)]明显升高(P<0.05),血清APN下降[(1.8±0.2)vs(2.9±0.4)mg/L,P<0.05]。电镜下主动脉超微结构观察显示:Con组主动脉硬化,血管内皮细胞质内未见小脂滴空泡,各种细胞器存在,内弹力膜存在,中层平滑肌细胞质内无脂滴空泡;AS组出现主动脉肥大,内皮细胞内脂滴空泡沉积,动脉和中膜内有泡沫细胞形成,病理显示明显的主动脉及动脉内膜病变。结论通过复合因素干预GK大鼠,并结合电镜和超声观察,可能用来构建糖尿病大鼠早期主动脉病变模型。
- 李强翔钟惠菊杨翊翔王涛李果王敏
- 关键词：动脉粥样硬化超声超微结构
- rAAV2/1-Acrp30对动脉粥样硬化的GK大鼠NF-κB及黏附分子的影响
- 2009年
- 目的观察rAAV2/1-Acrp30对动脉粥样硬化GK大鼠模型血清可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)、可溶性血管内皮黏附分子(sVCAM-1)水平和NF-κB表达的影响,从血管炎症的角度探讨脂联素对糖尿病大血管病变的作用。方法将造模成功的30只动脉粥样硬化的GK大鼠分为三个处理组:①模型1组,后肢肌肉注射盐水;②模型2组,后肢肌肉注射空病毒rAAV2/1;③治疗组,后肢肌肉注射rAAV2/1-Acrp30。治疗8周后处死所有大鼠,比较三组之间血清sICAM-1,sVCAM-1及主动脉处NF-κBp65 mRNA的表达水平。结果治疗组和模型1组、模型2组比较,血清sVCAM-1、sICAM-1显著降低(P<0.05)。治疗组和模型1组、模型2组比较,主动脉NF-κBp65 mRNA表达显著下调(P<0.05)。结论rAAV2/1-Acrp30可通过抑制NF-κB的表达,减轻炎症反应而对糖尿病大血管病变产生保护作用。
- 钟惠菊张颖李强翔李果
- 关键词：脂联素2型糖尿病大血管病变核转录因子可溶性细胞间黏附分子
