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“重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09402302): 作品数：19 被引量：47H指数：4; 相关作者：李秀玲王潇潇宋冬梅温智恒杨永娟更多>>; 相关机构：北京天坛生物制品股份有限公司北京生物制品研究所有限责任公司兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>; 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项北京市科委基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>

高效毛细管电泳检测脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜残余量被引量：2: 2018年; 目的采用毛细管区带电泳法(capillary zone electrophoresis,CZE)测定脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的含量。方法以25 mmol/L四硼酸钠(p H 8.0)为背景电解质,以20 cm×50μm I.D.未涂层的毛细管为色谱分离柱,于200 nm波长检测脑膜炎球菌结合疫苗原液中二甲亚砜的残余量。结果DMSO在不同溶液中质量浓度为1~100 mg/L的线性范围内线性关系良好,R2≥0.998 9。加标回收率为98.07%~103.13%,变异系数为0.38%~2.57%。结论该方法简单、快速、经济、环保,不受混合物组分中其他物质的干扰,适用于快速检测结合疫苗中DMSO的残余量。; 朱衍志马路萍吕玉婷崔保峰赵一欢杨淼刘晓凡罗树权; 关键词：毛细管区带电泳二甲亚砜脑膜炎球菌结合疫苗

TaqMan MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA方法的适用性验证及应用: 2014年; 目的对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行适用性验证及应用。方法对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行特异性、灵敏度、精密性、准确性验证,并应用该方法检测3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液、纯化液和原液中Vero细胞残余DNA含量,计算Vero细胞残余DNA去除率。结果 Taq Man MGB探针实时定量PCR能够特异性扩增Vero细胞基因组DNA长串连重复序列;DNA浓度在10-1~10-6 ng/μl范围内标准曲线线性良好,相关系数为0.996,扩增效率为93.54%;检测灵敏度为10-6 ng/μl,高于斑点杂交法;检测高（10-2 ng/μl）、中（10-4 ng/μl）、低（10-6 ng/μl）浓度阳性对照DNA模板的试验内变异系数（CV）为0.145%~3.110%,试验间CV为0.624%~2.359%;检测不同浓度阳性对照DNA的回收率在101.5%~109.4%之间,均在定量方法可接受的回收率范围内;在斑点杂交检测灵敏度范围内,同一样品采用Taq Man MGB探针实时定量PCR法与斑点杂交法半定量检测的结果吻合。3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液纯化后可有效去除Vero细胞残余DNA,总去除率约为100%。结论 Taq Man探针实时定量PCR法特异性、精密性、准确性良好,灵敏度高,可作为斑点杂交法的替代方法,用于实验室内部的质量控制。; 刘宇王潇潇宋冬梅温智恒鲁卫卫陈蕾李秀玲; 关键词：TAQ 斑点杂交 VERO细胞残余DNA

不同形式脊髓灰质炎病毒颗粒的免疫原性: 2016年; 目的评价不同形式的脊髓灰质炎病毒（poliovirus,PV）颗粒的免疫原性。方法采用蔗糖密度梯度超速离心法分别将经56℃加热1.5 h处理和未经加热的PV进行分离纯化,收集相应组分,进行电镜观察及SDS-PAGE分析,并测定各组分的D抗原及蛋白含量。用不同PV颗粒组分分别免疫大鼠,均经腿部肌肉注射,共接种3次,每次间隔21 d,于免疫前和第1、2次免疫后21 d经眼眶采血,末次免疫后21 d经心脏穿刺采血,分离血清,微量细胞病变（CPE）抑制法检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV中和抗体几何平均滴度（GMT）。结果未经加热处理的PV可分离获得EP（蔗糖浓度16%~19%）和FP（蔗糖浓度22%~24.5%）两种病毒颗粒,电镜观察分别为空心颗粒和实心颗粒,EP经SDS-PAGE分析可见VP0、VP1和VP3病毒蛋白条带,FP可见VP1、VP2、VP3和VP4条带;经56℃加热处理的PV可分离获得HP（蔗糖浓度15%~17%）一种病毒颗粒,电镜观察为空心颗粒,SDS-PAGE分析可见VP0、VP1、VP2、VP3病毒蛋白条带。EP、FP免疫大鼠后,均可诱导产生针对PV的中和抗体,但EP诱导产生的中和抗体GMT低于FP;HP不能诱导产生中和抗体。结论未经加热的PV可分离获得EP和FP两种病毒颗粒,均具有免疫原性;经加热处理的PV仅分离获得HP一种病毒颗粒,不具有免疫原性。; 郭会杰宋冬梅吴蕴怡鲁卫卫温智恒田龙张越马淑花张中洋李秀玲; 关键词：脊髓灰质炎病毒病毒颗粒免疫原性

肠道病毒71型抗原定量检测方法的建立: 2017年; 目的建立肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）抗原的定量检测方法,用于EV71疫苗生产过程中EV71抗原含量的监测.方法用EV71抗原免疫新西兰兔制备抗EV71多克隆抗体,纯化后用辣根过氧化物酶标记.采用双抗体夹心ELISA法建立抗原检测系统.以EV71国家抗原标准品为定量标准,建立剂量反应曲线,确定该方法的线性范围和定量限,并对该方法的特异性、精密度、准确性、稳定性及适用性等进行验证.结果建立的ELISA法的线性范围为5～80 U/ml,定量限为5 U/ml,线性决定系数均大于0.990 0;不同浓度样品回收率为85.0％～110.0％,变异系数均小于15％;置于2～8℃及37℃3、6d的抗体包被板对不同浓度样品的检测值变异系数均小于15％;该方法可特异性检测EV71原液,与非EV71样品无交叉反应.结论建立了EV71抗原定量检测方法,为EV71疫苗生产工艺过程的质量控制奠定了基础.; 陈蕾吴蕴怡鲁卫卫马淑花郭会杰刘宇宁海京田龙陈明戴新宪李秀玲; 关键词：酶联免疫吸附测定

A群C群脑膜炎球菌结合疫苗稳定性被引量：2: 2014年; 目的：评价A群C群脑膜炎球菌结合疫苗原液和成品的稳定性。方法分别将A群、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗各选取连续3批，分别放置于37℃、20～25℃和2～8℃3种温度下，在一定的时间取样进行主要项目测定，在关键时间点进行全面检测。结果A群结合疫苗原液于2～8℃保存9个月，20～25℃保存4周，37℃保存4d；C群结合疫苗原液于2～8℃保存9个月，20～25℃保存6个月，37℃保存4周；A群C群脑膜炎球菌结合疫苗于2～8℃保存2年3个月，20～25℃保存6个月，37℃可以保存9周；各项检测指标均符合质量标准的要求。结论在2～8℃条件下，A群、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液存放6个月，A群C群脑膜炎球菌结合疫苗存放2年，其质量稳定。; 赵俊吴丽洁贾泽杜磊陈超李世慧张娜; 关键词：脑膜炎球菌结合疫苗稳定性有效期

A群脑膜炎球菌兔抗血清的制备及鉴定: 2016年; 目的制备A群脑膜炎球菌兔抗血清内部参考品,并进行鉴定。方法用新鲜培养的A群脑膜炎球菌混悬液按确定的免疫方案免疫日本大耳白兔,免疫完成后,按确定的采血时间点,经颈动脉采血,分离血清,进行凝集试验,观察兔抗血清凝集反应情况;采用免疫双扩散和ELISA法检测兔抗血清效价,同时利用火箭免疫电泳和ELISA法鉴定兔抗血清的血清学特异性。结果确定免疫方案为基础免疫4周后,加强免疫2周;免疫完成后第6天为最佳采血时间点。6份自制A群脑膜炎球菌兔抗血清的凝集试验效价均达到1︰160,与相应的多糖能够产生沉淀线的最大稀释倍数均不低于1︰8,与A群脑膜炎球菌荚膜多糖反应的抗体滴度均在106及以上,与C、Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖之间无交叉反应。结论自制的A群脑膜炎球菌兔抗血清可作为A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的定性和定量检测的内部参考品,同时也为其他多糖类疫苗血清抗体的制备提供了参考。; 刘鹏张海峰郭蓉薛红刚; 关键词：A群脑膜炎球菌

重组H5N1流感血凝素杆状病毒滴度荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用被引量：2: 2021年; 目的建立用于重组H5N1流感血凝素杆状病毒滴度检测的荧光定量PCR(qPCR)法,并进行验证及初步应用。方法利用Bac-to-Bac技术构建重组穿梭质粒(rBacmid-H5),以其为模板,梯度PCR扩增H5基因,优化退火温度和引物浓度,建立qPCR检测方法,对该方法的专属性、重复性进行验证,确定线性范围及检测限。应用建立的qPCR方法对H5杆状病毒连续传代4次以及连续培养0-6 d的样品进行检测,并与免疫荧光法进行比较。结果在退火温度55℃,1μL 10 mmol/L引物条件下,建立了qPCR法,该方法检测H5基因,专属性良好;模板浓度在1.15×10^(3)-4.25×10^(9)copies/μL之间,线性关系良好,R^(2)=0.999;6次重复检测重组H5杆状病毒培养3 d样品,RSD为1.01%,重复性较好。H5病毒连续传代4次,病毒滴度保持相对稳定,培养0-6 d病毒滴度在第3天达到较高值,且检测值均高于免疫荧光法。结论建立了qPCR法进行H5N1流感血凝素重组杆状病毒滴度的特异性检测。; 吴清胜吴相英姚春萍李媛媛; 关键词：荧光定量PCR法血凝素杆状病毒滴度

2种去除Vero细胞DNA工艺的研究: 2017年; 目的建立并比较2种去除Sabin株脊髓灰质炎疫苗Vero细胞DNA工艺方法。方法采用不同终浓度的鱼精蛋白和非限制性核酸内切酶在不同条件下分别处理Sabin株脊髓灰质炎病毒浓缩液,采用荧光染色法检测宿主细胞DNA、酶联免疫法检测D抗原和宿主残余蛋白含量。结果鱼精蛋白的终浓度为1 g/L^1.5 g/L,病毒浓缩液中Vero细胞DNA的去除率达98%以上,抗原回收率达85%以上,宿主细胞残余蛋白去除率可达30%左右;非限制性核酸内切酶的终浓度为100 U/ml^150 U/ml,37℃孵育2 h转入2℃~8℃孵育18 h^20 h,病毒浓缩液中Vero细胞DNA的去除率达95%以上,抗原回收率达98%以上,宿主细胞残余蛋白基本无去除。结论 2种工艺均可用于去除Sabin株脊髓灰质炎疫苗中Vero细胞残余DNA,非限制性核酸内切酶法操作更简便快捷。; 岳卓赵玉秀高波董圆李婉莉王辉; 关键词：鱼精蛋白疫苗

细菌性多糖蛋白结合疫苗免疫应答机制的研究进展被引量：8: 2018年; 细菌性多糖蛋白结合疫苗是一类重要的、安全有效的预防疫苗。目前该疫苗在控制由流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌等引起的感染性疾病中已取得了巨大的成功,尤其是针对两岁以下的婴幼儿。然而,由于缺乏对其免疫激活机制的了解,多糖蛋白结合疫苗仍存在一些问题,如在高危人群中免疫原性较低。因此,了解细菌性多糖蛋白结合疫苗在机体内的免疫应答机制至关重要,以便设计更为合理的疫苗。传统的免疫机制认为,T淋巴细胞活化是由提呈的多肽诱导,即多糖蛋白结合物中载体蛋白部分的加工产物。近年来,已发现T细胞识别多糖的新机制,显示多糖蛋白结合疫苗的多糖部分积极参与T细胞活化。现就近年来细菌性多糖蛋白结合疫苗免疫应答机制的相关研究作一概述。; 程亚慧沈荣乔瑞洁; 关键词：多糖蛋白结合疫苗抗原提呈细胞免疫应答

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性研究被引量：11: 2014年; 目的评价细胞工厂工艺连续生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）的稳定性。方法疫苗在-20℃放置24个月,检测病毒滴度、外观、抗生素残留量、无菌性,及对病毒血清型进行鉴别;2~8℃放置12个月检测疫苗稳定性;室温放置7周、37℃放置7 d检测加速热稳定性并冻融的稳定性。结果该疫苗-20℃可贮存24个月以上,2~8℃有效期可延长至12个月,且冻融不会影响疫苗的稳定性。结论疫苗质量稳定,各项检测结果均符合《中华人民共和国药典》三部（2010版）及企业《口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）注册标准》。; 张晋王红燕张亮梁晶徐冉金歌柯伟华; 关键词：稳定性病毒滴度

“重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09402302)

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