国家自然科学基金(30370748)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：郑宁叶胜龙刘银坤孙瑞霞钟翠平更多>>
- 相关机构：复旦大学复旦大学上海医学院皖南医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠次级淋巴组织趋化因子成熟肽基因/腺相关病毒重组载体的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 构建含小鼠次级淋巴组织趋化因子 (SLC)cDNA的重组腺相关病毒载体。 方法 以C5 7BL 6J小鼠的淋巴组织为材料抽提总RNA ,用RT PCR方法克隆小鼠SLC的成熟肽基因。PCR产物回收后经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切 ,插入pAAV IRES hrGFP质粒 ,用磷酸钙法 ,与pAAV RC和pHelper三者共同转染HEK2 93细胞 ,包装成重组的病毒颗粒 ,并通过绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因荧光检测及抽提病毒DNA ,进行PCR扩增等进一步证实重组病毒的形成。 结果 约 5 0 0bp的小鼠SLC成熟肽基因被成功克隆 ,序列分析表明 ,所克隆的SLC基因与基因库注册的相同 ,重组载体的酶切及测序鉴定表明SLC基因被定向插入。重组载体转染HEK2 93细胞 ,经荧光显微镜和病毒DNA的PCR检测 ,证实已完成对重组病毒的包装 ,并表达GFP。 结论 成功构建了SLC成熟肽基因重组腺相关病毒载体。
- 梁春敏钟翠平郑宁吴欣孙瑞霞刘银坤叶胜龙
- 关键词：小鼠次级淋巴组织趋化因子成熟肽基因腺相关病毒
- SLC基因修饰树突状细胞及不同免疫方式抗肿瘤作用探讨被引量：3
- 2006年
- 目的:应用次级淋巴组织趋化因子(SLC)成熟肽基因/重组腺相关病毒(rAAVSLC)转染树突状细胞(DC),探讨一种基因修饰DC的新方法及其抗肿瘤的生物学活性。方法:体外构建rAAVSLC,按MOI为10、50、100与腺病毒(Ad2)协同转染小鼠骨髓来源成熟和未成熟DC,GFP作为成功转染的示踪蛋白。RTPCR在mRNA水平、ELISA在蛋白水平检测SLC表达,Transwell检测转染DC的培养上清对T细胞的趋化作用。瘤苗的在体效应通过C57BL/6J小鼠肿瘤模型验证。皮下接种Hepal6肿瘤细胞后成瘤小鼠分成3组:①生理盐水对照组,瘤内或足垫注射NS;②单纯DC对照组,瘤内或足垫注射未修饰DC;③SLC基因修饰DC组,瘤内或足垫注射SLC基因修饰的DC。每隔7天注射1次,观察各组小鼠肿瘤的生长情况。4周后分离瘤体,用荧光免疫组化检测瘤体内CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润情况。结果:rAAVSLC在MOI为100时能成功转染DC,未成熟DC的转染效率显著高于成熟DC,并产生对T细胞有明显趋化生物学活性的SLC。动物实验表明,瘤内注射SLC修饰后DC,肿瘤大小与对照组有明显差异,免疫组化显示瘤体内有较多的CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润。足垫注射SLC修饰的DC与对照组相比,抗肿瘤作用无显著差异。结论:rAAVSLC在Ad2的辅助下能有效转染未成熟DC并能表达具有趋化生物学活性的SLC。SLC基因修饰的树突状细胞瘤内注射以其对CD4+T细胞、CD8+T细胞的吸引作用而发挥了明显的抗肿瘤作用,同时也进一步证实用树突状细胞进行肿瘤生物免疫治疗时,不同免疫方式对疗效有明显影响。
- 梁春敏钟翠平郑宁刘彬彬孙瑞霞吴欣刘银坤叶胜龙
- 关键词：重组腺相关病毒骨髓来源树突状细胞次级淋巴组织趋化因子
