国家自然科学基金(30700327)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：广东省人民医院广东省医学科学院复旦大学更多>>
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- 胚胎干细胞分化为表皮样细胞的基因表达谱差异被引量：3
- 2012年
- 【目的】用全基因表达谱芯片技术筛选小鼠胚胎干细胞(ESC)定向分化为表皮样细胞(ELC)的差异表达的基因并对其进行分析,以进一步阐明ESC分化为ELC的分子机制。【方法】利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESC诱导定向分化为ELC,做3次生物学重复,分别取未分化的ESC和诱导分化的ELC提取总RNA进行扩增、Cy3标记,与NimbleGen135k小鼠全基因表达谱芯片(含44170个基因)杂交,荧光扫描,筛选出差异表达基因,并进行GO分析和pathway分析,用实时定量PCR对结果进行验证。【结果】芯片筛选结果显示,分化后的ELC与ESC间的差异表达的基因多达4856个(Cut off:2)。基因本体(GO)分析显示与生物学过程相关的差异表达基因最多的是细胞过程,1931个;与亚细胞组分(CC)相关的差基因中最多的是细胞和细胞组分相关基因,2391个;与分子功能相关的差异基因中最多是的结合功能(binding)基因,1869个。Pathway分析显示,与DNA复制通路相关的差异基因有23个;与蛋白酶体通路相关的24个;剪接体通路相关有47个;细胞周期相关的有44个。【结论】ESC体外诱导定向分化为ELC过程中,基因表达谱发生了巨大的变化,提示细胞分化是一个众多基因参与的复杂的生物学过程,这些基因在分化过程所起的作用和作用机制尚需大量的实验研究阐明。
- 张仁礼刘彩霞孟锦绣闻安民张丽丽韩冬
- 关键词：胚胎干细胞
- 胚胎干细胞分化为表皮样细胞基因启动子区差异甲基化的研究被引量：2
- 2013年
- 目的:用全基因组甲基化芯片探讨可能参与小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化为表皮样细胞(ELCs)的基因DNA甲基化调控机制。方法:利用人羊膜建立体外诱导体系,将小鼠ESCs诱导定向分化为ELCs,分别取未分化的ESCs和诱导分化后的ELCs进行芯片分析,利用甲基化免疫共沉淀技术将每组染色质DNA的甲基化片段共沉淀下来,和本底对照(input)分别标记Cy3和Cy5荧光,一同上样于Roche NimbleGen高密度(2.1M,芯片覆盖22 425个启动子)甲基化芯片,启动子区采用UCSC数据库进行注释,启动子覆盖转录起始位点上游8 200 bp、下游3 000 bp,通过对这些启动子区甲基化谱的分析,筛选出甲基化调控可能与ESCs向ELCs定向分化相关的基因。结果:小鼠ESCs和ELCs两组细胞在基因组水平上有17 500个启动子存在甲基化,其中有3 435个启动子发生甲基化差异变化,高CpG岛的启动子有894个发生差异甲基化,中度CpG岛的启动子有974个发生差异甲基化,低CpG岛的启动子有1 567个发生差异甲基化。结论:在ESCs向ELCs定向分化的过程中,众多的基因启动子区发生了甲基化程度的变化,说明细胞分化是一个复杂的表观遗传学事件。这些基因启动子的差异甲基化在ESCs向ELCs定向分化过程中所起的作用及其机制尚有待进一步的功能学研究阐明。
- 张仁礼刘彩霞孟锦绣张丽丽韩冬蔡佳杰闻安民
- 关键词：DNA甲基化胚胎干细胞启动子
- 风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库的构建和分析被引量：1
- 2012年
- 目的:构建风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库。方法:外科手术治疗中取风湿性心脏病患者新鲜心耳组织,用QIAGEN试剂盒提取RNA,用逆转录酶合成cDNA第一链,用长距离PCR合成双链cDNA,SfiⅠ酶切cDNA后过柱分级收集,用T4 DNA连接酶重组连接入λTripl Ex2载体,最后用λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。结果:构建了风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/mL,重组率为99%,81.25%外源重组片段大于1kb。结论:成功构建了高质量的风湿性心脏病患者心肌组织噬菌体表达文库,为风湿性心脏病的分子机制寻找新的研究策略奠定了实验基础。
- 李运雄孟锦绣朱平卢聪郑少忆余细勇
- 关键词：风湿性心脏病
- 免疫筛选获得风湿性瓣膜性心脏病的自身抗原THYN1
- 目的风湿性瓣膜性心脏病是风湿热继发心脏损害导致死亡的重要原因,A组乙型溶血性链球菌模拟心脏瓣膜组织蛋白分子达到免疫逃避的同时,也导致人类产生自身抗体造成心脏组织的免疫性损伤,这种被链球菌模拟了的自身抗原与自身抗体的长期作...
- 孟锦绣李运雄朱平林秋雄卢聪郑少忆余细勇
- 文献传递
- 风湿性心脏病自身抗原THYN1V2可诱导心肌细胞发生间质转化
- 目的:风湿性心脏病被认为是溶血性链球菌感染后引起的瓣膜病变为主的心脏病,但临床上并不是所有链球菌感染者都发生风心病,因此存在其它易感因素。本文旨在筛选风湿性心脏病自身抗原及其对纤维化的作用及其机制。方法:构建风湿性心脏病...
- 孟锦绣肖定璋陈景林秋雄朱平卢聪郑少忆庄建余细勇
- 关键词：风湿性心脏病心肌细胞
- 醛固酮-WNK4途径参与盐负荷对上皮钠通道的调节被引量：1
- 2010年
- 目的 通过建立生理条件下的盐负荷饮食大鼠模型,观察醛同酮和WNK4在水盐代谢调节中的作用.方法 将SD大鼠分为5组：高盐组（H,4%NaCl）、正常盐组（N,0.4%NaCl）、低盐组（L,0.07%NaCl）、高盐加醛固酮组（H＋A,4%NaCl＋1 mg·kg^（-1）·d^（-1）醛固酮）、低盐加螺内酯（L＋S,0.07%NaCl＋0.1 g·kg^（-1）·d^（-1）螺内酯）,所有大鼠自由饮水,喂养2周.用放射免疫法检测血浆醛同酮的变化.应用实时定量PCR和Western印迹法检测大鼠肾脏上皮钠通道γ亚基（γENaC）、WNK4的mRNA和蛋白的变化.结果 H组大鼠血浆醛同酮水平低于N组（P〈0.05）,H＋A组高于H组（P〈0.05）;L组大鼠血浆醛固酮水平高于N组（P〈0.05）,显示SD大鼠造模成功.L组大鼠肾脏γENaC蛋白表达高于N组,但是L＋S低于L组;同时H组低于N组,H＋A组高于H组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.mRNA变化趋势和蛋白变化趋势一致.H组肾脏WNK4的蛋白表达高于N组,但是H＋A组低于H组;同时L组低于N组,L＋S组高于L组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.mRNA的变化趋势和蛋白的变化趋势一致.结论 饮食中的盐可以调节γENaC在肾脏的蛋白表达,醛固酮和WNK4都参与了机体对盐的调节,WNK4受到醛同酮的负调节作用.
- 刘德凤赖凌云陈靖蔡晖顾勇
- 关键词：醛固酮螺内酯上皮钠通道
- 人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库的构建及质量分析
- 2011年
- 目的:各种病因引起的心脏瓣膜纤维化是导致心脏瓣膜功能丧失的主要原因,样本来源有限和不可重获性是其分子机制研究的瓶颈。本研究旨在成功获取患者纤维化瓣膜的遗传信息物质,为探明瓣膜病变的分子机制提供直接证据。方法:心脏换瓣手术中取纤维化瓣膜组织,提取高质量RNA,用SMART技术合成cDNA第1链,再用长距离PCR合成双链cDNA,经Sfi I酶切后过柱分级收集长片段cDNA,经T4 DNA连接酶催化连接入λTriplEx2载体,最后经λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。结果:成功构建了纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,原始文库滴度为8×109 pfu/L,重组率为99%,外源基因片段大小在500到3 000 bp之间,其中81.25%片段大于1 000 bp。结论:成功构建了高质量的人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,该文库的库容量足够代表人类基因的复杂性,高重组率能保障功能筛选的高效性,长片段更有助于全长基因的获得和表达。
- 孟锦绣李运雄朱平卢聪郑少忆余细勇
- 关键词：心脏瓣膜纤维化
- 角蛋白18是风湿性心脏病的自身抗原
- 目的风湿性心脏病是风湿热继发的最严重器官损害的结果,引起风湿热的A组乙型溶血性链球菌模拟心脏组织蛋白分子,导致外周血中的抗体在识别和清除病原体的同时也对心脏组织产生免疫性损伤,从而使这种自身免疫反应在自身抗体存在的情况下...
- 孟锦绣李运雄朱平林秋雄李玲卢聪郑少忆李广华余细勇
- 文献传递
- 风湿性心脏病自身抗原RHDAG1的获得与鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的探索用风湿性心脏病患者噬菌体表达文库构建和免疫筛选方法来研究风湿性心脏病的自身抗原候选分子。方法提取风湿性瓣膜性心脏病患者心肌组织总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成长链cDNA,用噬菌体载体构建表达文库,用风湿热患者血清免疫筛选该库,对筛选获得的自身抗原基因进行鉴定、生物信息学分析、体外表达、Western blotting鉴定和免疫反应结合性分析。结果成功构建了风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106pfu/ml,重组率为99%,81%外源片段大于1kb。通过免疫筛选方法获得了自身抗原RHDAG1,该自身抗原与人类角蛋白18同源,能与活动性风湿热患者血清和风湿性心脏病患者血清结合,而与体检健康人血清无结合。结论构建噬菌体展示文库方法可以有效地用于筛选和获得风湿性心脏病患者自身抗原;本研究提示自身抗原RHDAG1可成为风湿热和/或风心病的候选分子标志物。
- 孟锦绣李运雄朱平李玲卢聪郑少忆李广华余细勇
- 关键词：风湿性心脏病自身抗原分子标志物
