浙江省自然科学基金(Y304194)
- 作品数：10 被引量：25H指数：3
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- 相关机构：湖州师范学院苏州大学扬州大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金湖州市自然科学基金更多>>
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- 抗病毒基因MxA真核表达载体的构建及在鸡细胞中的表达被引量：6
- 2008年
- 将人抗病毒蛋白基因MxA与携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒重组后构建MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经PCR和酶切方法鉴定后,重组质粒在脂质体介导下转染鸡成纤维细胞和睾丸组织原代细胞,通过荧光观察,RT-PCR及细胞免疫组化检测目的基因的表达。结果表明,MxA基因片段已经被克隆到pEGFP-C1表达载体,成功构建了MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经该重组质粒转染后的鸡细胞的胞质中呈现颗粒状分布的绿色荧光,RT-PCR扩增出EGFP和MxA基因的特异性片断,免疫组化结果显示EGFP报告基因在细胞内的阳性表达,并表现出MxA的表达特征,间接证明了MxA可在鸡细胞中表达。MxA基因真核表达载体的成功构建以及在鸡细胞中的表达为进一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的应用打下了基础。
- 刘莉采克俊张易祥何湃丁志丽张念慈
- 关键词：转染
- 睾丸组织移植研究进展被引量：1
- 2008年
- 睾丸组织移植是将同种或者异种供体的睾丸组织移植到受体的皮下、腹腔等血管丰富的部位后,检测移植物生长发育和精子发生情况。利用睾丸组织移植的方法来加速供体睾丸细胞的分化与增殖,在较短的时间内得到大量的生殖细胞,这对于种质资源保存、精子发生研究和男性不育症的治疗都是一有效的技术手段。本文对睾丸组织移植的供体选用、受体准备、移植的部位、移植物处理和检测以及移植技术的应用作一综述。
- 于立颖刘莉采克俊
- 关键词：睾丸组织精原干细胞
- 白消安对性成熟公鸡睾丸发育的影响被引量：1
- 2009年
- 将96只165日龄健康公鸡随机分为3组,分别行腹腔内单次注射法注射白消安0、50、60mg/kg鸡重,分别在白消安处理后5、10、15、20、25、30d研究其对鸡睾丸形态和曲细精管组织学方面的影响。结果表明,白消安(50mg/kg、60mg/kg)可显著降低鸡的睾丸质量并严重损伤鸡睾丸曲细精管和生精细胞,是制备精原干细胞移植受体的合适剂量。
- 陈云波张易祥曹广力刘莉采克俊
- 关键词：公鸡睾丸发育白消安
- 禽类原始生殖细胞的研究进展被引量：1
- 2008年
- 丁海雷刘莉丁志丽张易祥王杏龙采克俊
- 关键词：原始生殖细胞禽类PGCS生殖腺性细胞鸡胚
- 病毒载体在转基因技术中的研究进展被引量：1
- 2008年
- 转基因技术的广泛应用对基因导入系统提出了越来越高的要求。构建能将目的基因高效稳定导入靶细胞的重组载体是制备转基因动物以及进行基因治疗的关键技术之一。基因导入系统可分为病毒载体与非病毒载体,病毒载体转染效率高、能介导外源基因稳定表达,因而在转基因技术应用中倍受关注。就病毒载体在转基因技术中的研究进展作一综述。
- 何湃刘莉
- 关键词：基因导入系统转基因动物基因治疗
- 禽类胚胎干细胞的研究进展被引量：5
- 2008年
- 采克俊周国庆李连茅张易祥张念慈刘莉
- 关键词：胚胎干细胞禽类产品STEM分化潜能增殖能力发育分化
- 鸡胚睾丸支持细胞的传代培养与鉴定被引量：2
- 2009年
- 以孵化18d的广西土鸡鸡胚为实验材料,采用两步酶消化法分离鸡胚睾丸支持细胞,置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,用低渗的磷酸缓冲液(PBS)处理进行纯化,并对原代和传代支持细胞进行了鉴定。结果显示,睾丸支持细胞生长良好,已传至第4代;经低渗处理,可去除绝大部分的生精细胞,获得的支持细胞纯度可达95%;鉴定结果显示,支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内有双极小体;丫啶橙染色证明支持细胞的细胞质中富含RNA,细胞核内的DNA含量也较高;罗丹明123染色证明支持细胞含有丰富的线粒体。结论:经两步酶消化法以及低渗处理后能得到纯度较高的鸡胚睾丸支持细胞;37℃、5%CO2的培养条件适宜支持细胞的生长;AKP染色、油红O、丫啶橙和罗丹明123等方法简单易行,适用于鸡胚睾丸支持细胞的鉴定。
- 丁海雷刘莉张易祥王杏龙采克俊
- 关键词：睾丸支持细胞
- 精原干细胞的分离纯化方法被引量：10
- 2008年
- 采克俊张易祥丁志丽丁海雷张念慈刘莉
- 关键词：精原干细胞分离纯化方法遗传资源保护精子细胞增殖分化生精细胞
- 精原干细胞标记及活体追踪的研究进展
- 2009年
- 研究表明，精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSCs）具有重建不育个体精子发生的能力。采用细胞标记试剂标记精原干细胞，可以活体追踪移植至睾丸的精原干细胞命运，即在发育过程中的增殖、运动及分化情况。标记和追踪精原干细胞将有助于了解精子发生恢复的机理并选择最优的移植策略。
- 陈云波张易祥采克俊刘莉曹访
- 关键词：精原干细胞磁共振成像
- 第28期鸡胚原始生殖细胞的分离培养被引量：1
- 2009年
- [目的]进一步优化生殖细胞(PGCs)细胞体外培养条件。[方法]从第28期(5.5 d)鸡胚生殖嵴分离PGCs,将PGCs与性腺基质细胞共培养进行原代培养,比较2种培养温度和3种培养浓度对PGCs原代培养的影响,以及2种饲养层细胞对PGCs传代培养的影响,并通过倒置显微镜下形态学观察、碱性磷酸酶(AKP)和过碘酸希夫反应(PAS)染色方法鉴定PGCs。[结果]培养浓度为2.5×105个/m l和培养温度为37℃时PGCs增殖较多,不易分化,存活能力较强,以第2代鸡胚成纤维细胞作饲养层时传代培养效果较好,获得了PGCs增殖的未分化集落,为后期的细胞标记及移植研究提供了较多数量和较高活力的PGCs。[结论]获得了PGCs原代与传代培养较好的培养体系,为禽类EG细胞系的建立和转基因研究奠定了基础。
- 丁志丽采克俊刘莉张易祥张念慈
- 关键词：鸡胚原始生殖细胞
