山东省自然科学基金(Y2008D43)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：青岛农业大学山东省农业科学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 马铃薯卷叶病毒缺失突变CP基因的原核表达及抗血清的制备被引量：7
- 2012年
- 利用RT-PCR扩增马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白(CP)基因(PLRV-CP),回收大小约630bp的特异性扩增片段并进行T-A克隆,测序表明该基因长度为627bp,与已报道的36个PLRV-CP基因的核苷酸序列的同源性大于96%。以pBAD/Thio-TOPO为起始载体,构建了PLRV-CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP。以pBAD-LRCP为模板,用PCR法删除了该基因富含精氨酸稀有密码子的第52～177核苷酸,获得了PLRV缺失突变CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP-126。用阿拉伯糖诱导工程菌TOP10(pBAD-LRCP-126),获得了34kD的诱导表达的融合蛋白(重组CP)。用镍离子亲和层析法从包涵体中纯化出了高纯度的重组CP,用纯化的重组CP作抗原免疫家兔获得了PLRV特异性的抗血清,间接ELISA检测显示效价为1︰12800。本研究结果为利用重组CP作抗原大量制备PLRV抗血清奠定了基础。
- 隋炯明何心凤郭真李广存王晶珊郭宝太
- 关键词：马铃薯卷叶病毒CP基因缺失突变原核表达抗血清
- 马铃薯卷叶病毒CP基因的突变及其原核表达被引量：3
- 2010年
- 通过人工合成DNA的方法,对马铃薯卷叶病毒外壳蛋白（CP）基因第52～177核苷酸（126bp）这段序列进行了突变,将其中12个AGA、AGG、CGA等精氨酸稀有密码子变成了原核高效表达的同义密码子CGT与CGC,将另外两个AGA精氨酸密码子变成了错义密码。构建了突变基因的原核表达载体pBAD-LRCP2,Bsp1407Ⅰ与MssⅠ酶切及DNA测序结果表明,基因突变符合要求,表达载体的构建正确。在37℃,大肠杆菌工程株TOP10（pBAD-LRCP2）用0.2%L-阿拉伯糖诱导培养4h,SDS-PAGE显示蛋白图谱上有一条36ku的诱导表达的融合蛋白条带,结果表明突变基因在PBAD启动子驱动下在大肠杆菌中实现了表达。
- 张建建隋炯明盖树鹏宋希云郭宝太
- 关键词：马铃薯卷叶病毒CP基因密码子突变原核表达
- 马铃薯卷叶病毒缺失突变CP基因酿酒酵母表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 以重组质粒pBAD-LRCP-126为模板,经PCR扩增获得了PLRV缺失突变CP基因的特异性条带。目的片段与pYES2.1/V5-His/-TOPO的连接产物转化大肠杆菌TOP10F′获得了氨苄青霉素抗性菌落,酶切与DNA测序结果确认了酵母表达载体的正确性,该表达载体命名为pYES-LRCP-126。在30℃,酿酒酵母工程菌株INVSc1(pYES-LRCP-126)经2%半乳糖诱导培养16h,SDS-PAGE显示蛋白图谱上有一条23kDa的诱导表达的蛋白条带,其大小与预期的重组CP大小相符,表明PLRV缺失突变基因在酵母菌中实现了表达。
- 左玉玲王晓杰樊连梅王晶珊郭宝太
- 关键词：马铃薯卷叶病毒CP基因缺失突变酿酒酵母
- 重组CP多克隆抗体在马铃薯卷叶病毒DAS-ELISA检测中的应用被引量：11
- 2011年
- 先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用于感染PLRV病叶的检测,DAS-ELISA反应呈阳性,结果表明,用重组CP制备的多克隆抗体可成功地用于PLRV的DAS-ELISA检测。本研究为PLRV重组CP多克隆抗体的大量制备及ELISA检测奠定了基础。
- 李楠楠左玉玲隋炯明盖树鹏樊连梅李广存郭宝太
- 关键词：马铃薯卷叶病毒多克隆抗体酶标抗体DAS-ELISA
