国家重点基础研究发展计划(2012CB722408)
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 相关作者：孙涛李永玲崔建奇周瑜刘强更多>>
- 相关机构：宁夏医科大学新疆生产建设兵团新疆医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- C/EBP β对APP基因的表达调控作用的研究被引量：2
- 2015年
- 该研究成功地构建了C/EBP β过表达慢病毒载体,在体外人胚肾细胞(HEK293FT)进行病毒包装并感染小鼠海马神经元细胞(HT22)。通过荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)检测C/EBPβ对淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)启动子活性的影响;通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)来检测C/EBPβ对APP和Sp1在转录水平上的表达;通过蛋白免疫印迹分析(Western blot assay)检测C/EBPβ对APP和Sp1蛋白表达的作用。萤火虫荧光素酶分析结果显示,C/EBPβ对APP启动子的表达有正调控作用;Western blot和Q-PCR分析的结果表明,C/EBPβ对APP和Sp1基因的表达有正调控作用。C/EBPβ对APP基因表达的调控作用的机制可能在于C/EBPβ上调了内源性转录因子Sp1的基因表达,而Sp1基因表达的增强直接导致了APP基因表达的上调。
- 柴娟李永玲芦晓红张茜马琳Huichen Wang孙涛崔建奇
- 关键词：C/EBP淀粉样前体蛋白阿尔茨海默病SP1基因表达调控
- Purα基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建及应用被引量：2
- 2014年
- 目的构建Purα基因过表达以及SiRNA慢病毒表达载体,通过包装病毒,以用于神经系统细胞感染及原代培养神经元的基因操作。方法 1)过表达载体的构建:本实验使用pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP和pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP慢病毒载体,PCR扩增Purα全长基因,然后亚克隆到pCDH载体相应的多克隆位点之中,进行酶切和测序鉴定;2)ShRNA慢病毒表达载体的构建:根据shRNA的特征,设计shRNA的DNA序列以及其反向互补序列,然后合成并克隆到慢病毒载体pLKO.1-puro的相应位点中。3)慢病毒包装和滴度测定:将克隆好的pCDH-Purα和pLKO.1-puro-shRNA载体和病毒包装质粒pCMV-VSVG、pCMV-dR8.2 dvpr按相应的比例转染到293FT细胞中,48h后收集上清液,纯化、浓缩,进行滴度测定。结果测序结果证实所插入片段相位正确,转染后通过RT-PCR和Western blot证实过表达组Purα基因表达增高,而沉寂组的Purα表达抑制,达到实验设计要求,可以用于实验研究。结论利用本方法可以快速地进行目的基因的基因操作,省时、节约,与同类型的方法比较,具有较大的优越性,可以在实验中推广应用。
- 贾中发马琳和祯泉周瑜孙涛崔建奇
- 关键词：慢病毒表达载体基因过表达基因操作
- Purα蛋白质不同结构域对APP基因表达的调控作用
- 2015年
- 该研究将构建的含淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)基因启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒与Purα全长基因或含不同结构域的Purα缺失突变体共转染到U87MG细胞中,进行萤火虫荧光素酶活性测定,以确定Purα对APP基因表达的调控作用。同时,将Purα全长基因及含有不同结构域的Purα缺失突变体的真核表达载体分别转染至U87MG细胞,使目的蛋白过表达,通过实时定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)研究Purα不同的结构域对APP基因在转录、翻译水平的调控作用。结果显示,Purα全长蛋白及其不同结构域对APP基因表达均有不同程度的抑制作用,但至少保持N-端或C-端的结构域可能是维持Purα蛋白功能的必要条件。
- 李永玲贾中发柴娟李平袁程敏孙涛崔建奇
- 关键词：蛋白质结构结构域APP基因表达
- Purα对匹罗卡品致痫大鼠海马DNA损伤的保护作用被引量：6
- 2015年
- 目的探讨Purα蛋白对匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马所致DNA损伤的保护作用，以及Purα蛋白在DNA损伤修复中的作用。方法将Purα蛋白过表达的慢病毒和Purα siRNA慢病毒在立体定位仪指导下注入大鼠海马组织。注入后14d通过荧光切片和免疫印迹证实病毒已经在海马组织表达，然后用匹罗卡品腹腔注射诱导癫痫发作。癫痫发作1h后处死动物，分别取样进行免疫组织化学和免疫印迹检测与DNA损伤和修复。结果免疫组织化学结果表明，DNA损伤标志性蛋白γH2AX在大鼠CA1区的表达，各组选20张相同背景色的海马CA1区通过图像分析软件iPP6．0测定阳性细胞的平均光密度值；与空载组（0．40±0．11）和对照组（0．42±0．05）相比，Purα过表达组（0．15±0．10）免疫着色阳性细胞数目明显减少（P〈0．01）；而在Purα沉默组（0．68±0．06）明显增高（P〈0．01）。免疫印迹结果表明，在DNA损伤修复相关蛋白Parp-1的表达上：与空载组（0．93±0．11）和对照组（1．00±0．00）相比，Purα过表达组（0．17±0．09）的表达明显降低（P〈0．01）；Purα沉默组的表达明显增高（P〈0．01）。结论癫痫发作早期可引起明显的DNA损伤，Purα蛋白对癫痫引起的DNA损伤有明显的保护作用。
- 刘强孙涛杨征宋祖耀和祯泉王峰牛建国崔建奇
- 关键词：匹罗卡品
- 排毒尪痹汤结合扶他林治疗类风湿性关节炎的疗效评价及对血清TNF-α、IL-1β、VEGF因子水平影响的研究被引量：3
- 2018年
- 目的:观察排毒尪痹汤结合扶他林对类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis-RA)的治疗效果及对患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法:选取2014年8月~2016年10月新疆医科大学第一附属医院的100例RA患者,随机分为2组,每组50例,对照组采用扶他林治疗,治疗组采用扶他林联合排毒尪痹汤治疗。连续治疗4周为1疗程,治疗两个疗程之后,观察并比较两组患者的临床症状和实验室检测的各指标水平变化及临床治疗效果。结果:治疗前,两组患者的临床症状指标:晨僵时间,关节疼痛程度和数目、关节肿胀程度和数目、步行15分钟的时间、双手握力,实验室检测指标:TNF-α、IL-1β、VEGF,对比差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组的上述两项各指标均较治疗前明显改善(P<0.05),且治疗组较对照组改善更为明显(P<0.05)。在临床治疗效果方面对比,治疗组的治疗总有效率为92%,明显高于对照组的76%(P<0.05)。结论:排毒尪痹汤结合扶他林的中西医结合治疗方案能明显降低患者的机体炎症水平,缓解临床症状,总体治疗效果相对较好,值得临床推广。
- 张玉红王彦炎孟岩罗莉
- 关键词：扶他林TNF-ΑIL-1ΒVEGF
- Egr-1对APP基因表达的调控作用被引量：5
- 2015年
- 该研究构建了含有APP启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒,将该质粒与Egr-1真核表达载体p CDNA3-Egr-1共转染到HEK293与U87MG细胞中进行荧光素酶活性测定,以确定Egr-1对APP基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)和凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)确定Egr-1蛋白在APP启动子上的结合部位,同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)和butyrate诱导内源性Egr-1的表达以及Egr-1抑制剂suramin来作用于细胞,通过蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测Egr-1对APP蛋白表达的作用。结果显示,Egr-1蛋白在APP基因启动子上5′UTR区域有特异性的结合部位,去除该结合部位则Egr-1失去对APP基因启动子的调控作用,Ch IP和EMSA的结果也证实了该结合位点;通过HDAC抑制剂和suramin干扰内源性Egr-1的表达则显著影响了Egr-1对APP基因表达的调控作用。
- 马琳周瑜李永玲柴娟贾中发郭克孙涛崔建奇
- 关键词：EGR-1淀粉样前体蛋白阿尔茨海默病基因表达调控
