中国博士后科学基金(20060390737)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：刘秋英王一飞金琳刘格张传海更多>>
- 相关机构：暨南大学广州市公安局更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金广东省科技计划工业攻关项目留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 单核苷酸多态性检测技术在法医学中的应用进展被引量：4
- 2008年
- 单核苷酸多态性是新一代的法医学检测标记,本文结合市面上常见的商品化试剂盒,对单核苷酸多态性的检测原理、试剂选择及具体操作等进行了综述,并在此基础上提出了它们在法医学应用中需要注意的问题。
- 李中红刘秋英
- 关键词：单核苷酸多态性RFLP分析
- K562细胞nm23-H1基因沉默对其向巨核细胞分化的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨nm23-H1沉默对K562细胞向巨核细胞分化的影响。方法采用Lipo-fectamine2000将靶向nm23-H1基因的RNA干扰质粒pSilencer^TM 4．1-CMV-sinm23及空质粒转染K562细胞，经G418筛选建立该基因稳定下调的K562细胞（K562-sinm23细胞）及空质粒转染K562细胞（K562-siNC细胞），实时定量PCR、免疫组织化学、蛋白印迹反应等方法证实了nm23基因沉默细胞构建成功。NBT还原比色试验检测细胞分化能力。流式细胞术检测在诱导剂佛波酯作用下K562-sinm23细胞表面巨核细胞分化抗原GPⅡb-Ⅲa（CD41）的表达。蛋白印迹法检测细胞在佛波酯诱导后ERK1／2磷酸化活性。结果与K562细胞和K562-siNC细胞比较，pSilencer^TM 4．1-CMV-sinm23能够沉默内源性nm23-H1 mRNA的表达，基因水平和蛋白水平的沉默效率分别达到75％和70％。经佛波酯诱导，与K562-siNC细胞比较K562-sinm细胞的分化能力明显增强（NBT还原能力A值分别为0．23±0．05和0．31±0．07）。nm23-H1基因调控K562细胞向巨核细胞分化与ERK1／2磷酸化活性增强有关。结论成功构建了nm23-H1基因稳定下调表达的K562细胞株，并且证明nm23-H1参与了K562细胞向巨核细胞系的分化。
- 金琳刘格张传海熊盛张美英刘秋英钱垂文王一飞
- 关键词：基因NM23-H1K562细胞细胞分化RNA干扰
- nm23-H1基因实时荧光定量PCR标准质粒的构建
- 2007年
- 目的:制备用于nm23-H1基因mRNA实时荧光定量PCR检测的质粒标准品。方法:通过PCR扩增出目的片断,纯化后T-A连接至pMD18-T载体,转化宿主菌E.coliDH5α,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析。结果:nm23-H1基因目的片段成功重组至pMD18-T载体上,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性。梯度浓度标准质粒的荧光定量PCR结果显示,循环阈值(C t)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系。结论:成功构建了nm23-H1基因实时荧光定量PCR质粒标准品。
- 张传海刘秋英金琳刘格郭朝万张美英王一飞
- 关键词：实时荧光定量PCR重组质粒标准品
