重庆市自然科学基金(CSTC2008BA5030)
- 作品数：15 被引量：78H指数：6
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- 东亚飞蝗辅酶Q-细胞色素C还原酶基因克隆和序列分析被引量：1
- 2011年
- 辅酶Q-细胞色素C还原酶是组成线粒体呼吸链的4种酶复合体之一,对线粒体呼吸链的电子传递起着重要作用.同时,辅酶Q-细胞色素C还原酶还是杀真菌剂(Fungicide)、抗原虫(Antiprotozoan)、抗癌药物(Anticancer drugs)以及抗疟疾(Antimalarial)药物——阿托喹酮(Atovaquone)、氯胍(Proguanil)、布帕伐醌(Buparvaquone)的作用靶标,可将它作为昆虫的药靶,设计和开发新型的杀虫剂.采用RACE方法,克隆了东亚飞蝗[Locusta migratoria manilensis(Meyen)]辅酶Q-细胞色素C还原酶cDNA全序列(GenBank登录号:GU593056.1).获得的cDNA全长939 bp,其中可读框819 bp,编码272个氨基酸,推测其相对分子质量为29.48 ku,等电点为9.19.通过与其它10个物种的细胞色素C还原酶基因的氨基酸序列进行比对,发现东亚飞蝗与家蚕、赤拟谷盗、黒腹果蝇、埃及伊蚊、致乏库蚊、小家鼠、人、丽蝇蛹集金小蜂、蜜蜂和豌豆蚜的辅酶Q-细胞色素C还原酶氨基酸序列同源性分别为72%、72%、66%、63%、60%、59%、59%、58%、57%和56%.
- 司风玲何正波赵杨陈斌
- 关键词：东亚飞蝗RACE
- 葱蝇夏滞育蛹的全长cDNA文库构建被引量：5
- 2010年
- 葱蝇具有夏滞育的特性且与果蝇近缘.为构建葱蝇夏滞育蛹的全长cDNA文库,并为进一步的夏滞育专化基因筛选、克隆和表达分析奠定基础,利用RNAiso试剂盒提取葱蝇夏滞育蛹的总RNA,采用SMART技术合成全长cDNA,限制性酶切消化后将cDNA克隆到质粒载体pDNR-LIB.经鉴定原始文库的滴度为2.4×107cfu/mL.随机挑取克隆,经PCR快速鉴定,插入片段大小在0.35～2.2kb之间,平均大小约为0.9kb,重组率达100%,获得了高质量的葱蝇夏滞育蛹cDNA文库.
- 冯国忠黎万顺陈斌李莹
- 关键词：葱蝇全长CDNA文库SMART技术
- 乙酰胆碱酯酶的分离纯化及生物学研究进展被引量：11
- 2011年
- 乙酰胆碱酯酶在神经突触间隙中通过催化水解神经递质乙酰胆碱来维持神经冲动的正常传递,广泛存在于各种动物组织中,如脑、红血球、鱼肉组织和动物血清中。总结了最近国内外关于乙酰胆碱酯酶的研究进展,包括乙酰胆碱酯酶的提取、纯化和固定化研究,且综述了有关乙酰胆碱酯酶传感器的应用进展,以及在治疗疾病如阿尔茨海默病方面的应用,这将为以乙酰胆碱酯酶为目标的研究提供信息框架。
- 叶东平陈斌何正波
- 关键词：乙酰胆碱酯酶分离纯化传感器阿尔茨海默病
- 纳豆激酶研究进展被引量：1
- 2011年
- 对纳豆激酶的理化性质、基因与蛋白结构、纳豆激酶基因的克隆与表达及体外溶栓活性测定方面的研究进展进行了综述,并对纳豆激酶的发展前景进行了展望。
- 敬俊锋陈斌李莹何正波
- 关键词：纳豆激酶克隆表达活性测定
- 黑腹果蝇热激蛋白基因家族的生物信息学分析被引量：5
- 2011年
- 热激蛋白是细胞或生物体受到热激后新合成的一类遗传上高度保守的蛋白,在生物体中普遍存在,在细胞生长、发育、分化、基因转录等功能方面发挥重要的作用。本研究利用生物信息学方法首次对黑腹果蝇(Drosophila mel-anogaster)全部热激蛋白进行分析。结果表明,黑腹果蝇热激蛋白共有HSPC(HSP90)、HSPA(HSP70)、DNAJ(HSP40)、HSPB(小分子HSP)、HSPD(HSP60)、CCT(TRiC)等6个基因家族,不存在HSPE(HSP10)和HSPH(HSP110)家族,共有35个基因,新发现7个基因,命名为HSPBA5、HSPBB2、HSPBB3、DNAJA7、DNAJA8、HSPD5和HSPCB1。染色体定位表明,黑腹果蝇热激蛋白主要分布在2L、3L、2R、3R和X上。序列比对分析发现,黑腹果蝇热激蛋白家族序列高度保守。进化分析表明,他们有共同的祖先,可分为6个基因家族。
- 牟国鹏陈斌何正波
- 关键词：黑腹果蝇热激蛋白生物信息学系统发育
- 纳豆激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2011年
- 纳豆激酶纳是从日本传统食品纳豆中发现的一类具有溶栓效果的蛋白酶,由于其具有安全,高效,作用时间长,易吸收,廉价等优点,现在正成为一个开发治疗血栓类疾病药物的研究热点。从本实验室保存的一株高溶栓的纳豆杆菌N07出发,提取总基因组DNA,利用PCR手段扩增获得了纳豆激酶长为825bp的成熟肽基因片段。构建重组表达质粒pPICZaA-NK,经EcoR I、Xba I双酶切、PCR、测序验证得出重组表达质粒上的外源基因即为825bp的目的片段;将重组质粒pPICZaA-NK用内切酶Sac I线性化后电击导入毕赤酵母X33,通过含Zeocin的YPDS平板筛选获得重组酵母。重组酵母在BMMY培养基中发酵培养,用1%甲醇诱导目的蛋白表达。用纤维蛋白平板法检测发现发酵上清具有纤溶活性,经硫酸铵盐析、透析、Sephadex-G50过柱等步骤分离得到纳豆激酶蛋白,进行SDS-PAGE鉴定表明,表达的纳豆激酶蛋白分子量为27KD。以尿激酶为标准,实验所得纳豆激酶发酵上清液溶栓活性约为195U/mL。成功的将纳豆激酶成熟肽基因在毕赤酵母X33中表达,为纳豆激酶基因工程进一步研究奠定基础。
- 敬俊锋陈斌李莹何正波霍金柱
- 关键词：纳豆激酶基因毕赤酵母克隆
- 葱蝇冬滞育蛹的全长cDNA文库的构建被引量：6
- 2010年
- 葱蝇Delia antiqua(Meigen)具有冬滞育的特性且与黑腹果蝇Drosophila melanogaster近缘。该研究目的在于构建葱蝇冬滞育蛹的全长cDNA文库,为进一步的冬滞育专化基因筛选、克隆、和表达分析奠定基础。利用RNAiso试剂盒提取葱蝇冬滞育蛹的总RNA,采用SMART技术合成全长cDNA,经SfiⅠ酶切消化后,将cDNA克隆到质粒载体pDNR-LIB。经鉴定,原始文库的滴度为2.4×107cfu/mL。随机挑取15个克隆,经PCR快速鉴定,插入片段大小在0.5～3kb之间,平均大小在1kb左右,重组率达100%。结果表明该研究获得高质量的葱蝇冬滞育蛹cDNA文库。
- 黎万顺冯国忠陈斌何正波
- 关键词：葱蝇全长CDNA文库SMART技术
- 纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2012年
- 纳豆激酶是一种良好的天然蛋白酶类溶栓物质。国内外许多学者对该酶进行了基因工程研究,但在克隆表达过程中出现了许多长短不同的基因片段。本研究通过原产日本的优质纳豆中分离鉴定出高产纳豆杆菌N07并提取该菌株的全基因组;通过PCR手段扩增出能编码纳豆激酶信号肽,前导肽和成熟肽的前纳豆激酶酶原基因NK1,以及能编码纳豆激酶成熟肽的纳豆激酶基因NK2,构建了纳豆激酶基因的表达载体pET30a-NK1和pET30a-NK2,转化E.coli BL21后在大肠杆菌中表达,并进行了活性分析。结果发现,纳豆激酶酶原基因片段NK1能成功表达出有活性的分泌型纳豆激酶;而纳豆激酶基因片段NK2的表达产物为无活性的包涵体。在对NK1和NK2的比较研究后可知,纳豆激酶酶原基因片段NK1能在大肠杆菌中很好的分泌表达,这将为纳豆激酶基因工程的深入研究奠定基础。
- 李莹陈斌敬俊锋何正波
- 关键词：纳豆激酶基因大肠杆菌克隆
- 溶栓剂的研发现状及展望被引量：9
- 2010年
- 由血栓引起的血栓性疾病是一种常见的心脑血管疾病。溶栓剂是预防与治疗心脑血管疾病的主要抗血栓药物。本文总结性地概述了目前国内外各种新型溶栓剂的溶栓机理、临床应用效果及其副作用等。其中,第三代溶栓剂组织型纤溶酶原激活剂变异体、导向溶栓剂、嵌合体溶栓剂,以及部分天然溶栓剂包括蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂、蛇毒纤溶酶原激活剂、水蛭素及其变异体等均通过将纤溶酶原激活为纤溶酶溶解血栓。临床实验结果表明它们在延长体内半寿期、增强对血纤维蛋白选择性和溶栓效率等方面有较大的改进,但溶栓治疗后的冠状动脉再栓塞,颅内出血等问题仍是目前未解决的难题;而纳豆激酶及豆豉纤溶酶由于溶栓原理的不同,引起内出血的几率较低。溶栓剂未来的发展方向为如何综合不同药物的优点,使其更加安全与廉价。
- 李莹陈斌何正波
- 关键词：溶栓剂血栓纳豆激酶
- 葱蝇的实验室饲养、生物学特性及滞育诱导被引量：18
- 2010年
- 葱蝇是昆虫滞育分子机理、滞育期抗逆基因、冬滞育和夏滞育专化基因比较等研究的理想模式种,为开展昆虫滞育分子机理及抗逆基因研究,从日本引进葱蝇并设计了葱蝇的培养笼,首次在国内建立了稳定的实验室种群。基于早前的研究工作基础,对葱蝇最佳食物、人工饲养技术和条件、冬滞育和夏滞育诱导和终止条件作了进一步研究;并对各虫期、冬滞育和夏滞育期的生理和生物学特性作了进一步观察;成功地获得了供分子生物学研究需要的非滞育、冬滞育和夏滞育葱蝇各发育阶段的样品。特别重要的是,在本研究通过适度提高光照强度可以使所有实验蛹进入夏滞育。因此,本实验室能够获得100%的冬滞育和夏滞育蛹。本文报道和总结葱蝇的实验室饲养技术、各虫态主要生物学习性,以及冬滞育和夏滞育的诱导和终止策略。
- 陈斌黎万顺冯国忠何正波李廷景
- 关键词：葱蝇人工饲料生物学特性滞育诱导
